一種蔬菜中農藥殘留快速檢測方法的 分析與評價

◎ 杜 平

（1.陜西省果蔬及加工產品質量檢驗檢測中心，陜西 眉縣 722301；2.眉縣食品藥品安全檢驗檢測中心，陜西 眉縣 722301）

近年來，蔬菜中農藥殘留超標問題已成為人們生活中關心的熱點話題，引起了政府、公眾和新聞媒介的高度關注[1]。目前，我國比較常見的農藥殘留檢測方法主要有氣相色譜、液相色譜、氣相色譜-質譜聯用以及液相色譜-質譜聯用等檢測方法。這些檢測方法均需使用高端設備，且儀器設備操作人員必須為專業的檢驗人員，需要經授權持證上崗。同時，儀器設備的后期維護和保養成本也較高。速測卡法能在較短的時間內快速、準確地檢測蔬菜中的農藥殘留含量[2]。本文綜合評價了蔬菜中農藥殘留快速檢測技術——速測卡法的靈敏度、特異性、準確度。

1 材料與方法

1.1 實驗樣品

從大型農貿市場、超市和散戶菜地隨機抽取8類21種蔬菜，共75個樣品，蔬菜樣品種類及名稱見表1。

表1 蔬菜樣品種類及名稱表

1.2 儀器與試劑

WT-R01農藥殘留速測儀，深圳市安鑫寶科技發展有限公司；HED-NC06農殘快速檢測儀，山東霍爾德電子科技有限公司；Trace 1300氣相色譜儀，配備FPD檢測器，賽默飛世爾科技公司；Ultimate 3000液相色譜儀，配備FLD檢測器，賽默飛世爾科技公司。

甲醇，色譜純；乙腈、丙酮、二氯甲烷，均為分析純；標準品有敵敵畏、滅多威、敵百蟲、氧化樂果、對硫磷、甲胺磷、樂果，均購自農業農村部環境保護科研監測所；標準溶液的配制：用磷酸鹽緩沖溶液（pH=7.5）配制成0.1～3.0 mg·kg-1不同濃度的標準系列溶液。

1.3 實驗方法

1.3.1 速測卡法與分光光度比色法靈敏度與特異性比較

（1）樣品的制備。根據蔬菜樣品，準備50份待檢樣品，20份陰性樣品，30份陽性樣品。根據各農藥的檢出限值，分別對這30份陽性樣品進行加標，具體加標情況為：0.1 mg·kg-15份、0.2 mg·kg-15份、0.8 mg·kg-15 份、1.0 mg·kg-15 份 2.0 mg·kg-15 份 和3.0 mg·kg-15份，組成陽性樣品。

（2）速測卡法。①去除蔬菜表面的污垢，取5.0 g、1 cm大小的樣品放入50 mL燒杯中，之后向燒杯中加入5.0 mL緩沖液，均勻搖晃50次后靜置2 min。②取出速測卡，撕去表面薄膜，將靜置后的溶液滴入白色藥片，2～3滴即可。放入37 ℃恒溫培養箱靜置，10 min后取出，保持藥片表面濕潤。③對折速測卡，顯色完成后，打開速測儀，將紅白藥片疊合，觀察，白藥片顏色不變為強陽性、白藥片淺藍色為弱陽性，白藥片天藍色為陰性，每組設有一個空白實驗。

（3）分光光度比色法。①清除蔬菜樣品表面的泥土，剪成1 cm×1 cm左右大小碎片，稱取1 g樣品放入小燒杯中，加入5.0 mL緩沖液，振蕩2 min，倒出提取液，靜置3 min，備用。②對照溶液測試，于試管中先加入2.5 mL緩沖液，再加入0.1 mL酶液、0.1 mL顯色劑，搖勻后于37 ℃放置15 min以上。加入0.1 mL底物搖勻，此時檢液開始顯色反應，應立即放入比色皿中，使用分光光度計在412 nm波長下測定吸光度，記錄反應3 min吸光度的變化值ΔA0。③樣品的測定，在試管中加入2.5 mL樣品提取液，其他操作與對照測定相同，記錄反應3 min吸光度的變化值ΔAt。利用如下公式計算：

式中：ΔA0為空白溶液吸光度；ΔAt為樣品溶液吸光度；當結果大于50%時，為陽性，樣品中含有殘留農藥；當結果小于50%時，為陰性，樣品中不含有殘留農藥。

1.3.2 速測卡法準確性驗證

按照速測卡法檢測后，采用氣相色譜法與液相色譜法分別對以下參數進行驗證。將不得使用的甲胺磷、久效磷等和限制使用的特丁硫磷、涕滅威等共11個農藥作為檢測項目，有機磷使用氣相色譜法進行驗證，氨基甲酸酯類使用液相色譜法進行驗證。

（1）依據NY/T 761—2008標準[3]。抽取1 kg蔬菜樣品選取可食部勻漿處理后備用。

（2）氣相色譜儀檢測。取樣品25.0 g，將其與50.0 mL乙腈共同放入離心管中，勻漿2 min后，過濾，將濾液置入100 mL離心管中，并向其中加入7 g NaCl，搖勻，靜置1 h左右。吸取10.00 mL乙腈提取液，氮吹濃縮。丙酮定容至5 mL，渦旋混勻后，過膜上機。依據NY/T 761—2008標準[3]第一部分方法二中儀器色譜條件，采用高效氣相-FPD檢測，外標法定量。

（3）液相色譜儀檢測。取樣品25.0 g，將其與5～7 g Nacl、50.0 mL乙腈共同置于離心管中，渦旋混勻后，高速勻漿2 min，靜置30 min，離心，使乙腈和水分層。取10.0 mL乙腈層于比色管中80 ℃水浴氮吹蒸至近干，用10 mL二氯甲烷∶甲醇（99∶1）溶液分3次洗滌比色管。采用固相萃取法，將液體轉移至活化后的固相萃取氨基柱，將濾出液體收集，氮吹至近干后加入1.0 mL甲醇渦旋后過膜上機。依據NY/T 761—2008標準[3]第三部分中儀器色譜條件，采用高效液相-熒光檢測，外標法定量。

2 結果與分析

2.1 速測卡法與分光光度比色法檢驗結果分析

通過兩種快速檢測方法（速測卡法與分光光度比色法）對同一批樣品進行檢測比較，得出檢驗結果，如表2所示。兩種方法的檢測結果與已知檢驗結果進行對比，相符合的有41個，不符合的9個，其中速測卡法3個，分光光度比色法6個。

表2 速測卡法與分光光度比色法檢測蔬菜中殘留農藥結果表

由上述檢驗結果計算可知，速測卡法的靈敏度為96.7%，特異性為90%。分光光度比色法的靈敏度為86.7%，特異性為90%。兩種檢測方法對樣品的特異性都穩定，但速測卡法的靈敏度要比分光光度比色法高一些。兩種檢測方法的比較如下。①取樣代表性。分光光度法取1 g，速測卡取5 g，在樣品取樣量上，速測卡取樣要比分光光度比色法更具有代表性。②測定時樣品液的濃度。速測卡是直接加入提取液進行檢測，分光光度法是將樣品加入緩沖液中，樣品溶液濃度稀釋了5倍。③樣品色素對結果干擾。分光光度比色法對樣品液要求必須澄清且盡量避免顏色的干擾，減少樣品中色素。但速測卡法對樣品中葉綠素的要求不高，適合各種蔬菜的檢測。④可操作性。速測卡法通過樣品溶液提取-培養-檢驗結果肉眼即可判斷，實驗過程簡單、可操作性強。而分光光度比色法對實驗過程時間的把控有嚴格要求，必須確保樣品與空白對照放置的時間相同，實驗結果才真實可靠并具有一定的可比性。待測樣品加入底物以及測定都要迅速，實驗過程復雜，且對操作人員有一定的要求。綜上所述，速測卡法在樣品代表性、檢驗結果的準確度、實驗過程的可操作性都要比分光光度比色法更具有適用性、實用性。

2.2 速測卡法準確性驗證

通過對21種蔬菜、75個樣品進行檢測發現，其中速測卡與色譜法（氣相和液相）檢測結果均為合格的農產品樣本有63個，均為不合格的農產品樣本為4個，還有8個樣品兩種檢測方法獲得結果存在沖突。這8個樣品中，速測卡檢測合格而色譜法檢測不合格的農產品樣本有3個，速測卡檢測不合格而色譜法檢測合格的農產品樣本有5個，如表3所示。

表3 速測卡與色譜法檢測結果的比較表

表3結果表明，經氣相、液相色譜儀定性定量檢測比較后得出在68個樣品中，假陰性率為4.4%，假陽性率為7.4%，相對準確度為88.2%。速測卡法能夠基本滿足國家標準對有機磷和氨基甲酸酯類農殘快速檢測方法的要求。樣品農藥殘留量濃度在1 mg·kg-1以上，檢測都呈陽性。

3 結論

（1）兩種方法（速測卡法和分光光度比色法）檢測原理相同。經過對兩種快速檢測方法的靈敏度和特異性比較，得出速測卡法的靈敏度、準確度較高，特異性穩定。

（2）速測卡法對蔥、姜、蒜及西紅柿等蔬菜有假陽性反應。主要是因為這類蔬菜的汁液中有能夠破壞或者抑制膽堿酯酶的物質。檢測這類蔬菜時可將取整株浸泡后的液體作為檢測樣本，避免蔬菜的汁液影響檢測效果。

（3）參照食品中農藥最大殘留限量標準GB 2763—2021[4]，農藥殘留限量為0.01～0.5 mg·kg-1，速測卡法檢出呈陽性的靈敏度約為0.1 mg·kg-1。

（4）速測卡法具有操作簡單、便于攜帶、準確快速、成本低等優點，可以有效檢測農藥殘留是否超標，預防食材中毒事件發生。隨著社會經濟以及人們生活水平的不斷提高，健康對于人們的重要性已經日益凸顯，人們對于農產品中農藥殘留的限量承受能力也在不斷降低，對農藥殘留檢測要求越來越高[5]。因此，農藥殘留檢測開始向著質量更高、速度更快、方法更精確、靈敏度更高的方向發展。速測卡法能夠快速、準確地分析檢測出有機磷類和氨基甲酸酯類農藥殘留總量。未來，隨著科學技術日新月異的發展，隨著各學科的不斷融合與發展，農產品農藥殘留檢測技術將更加成熟、高效。