藤石松化學成分的研究

蔣梅香，姚曉長，劉 陽，譚桂山,3，李 靜*

(1.中南大學湘雅醫院藥學部，湖南 長沙 410008；2.湖南中醫藥高等專科學校，湖南 株洲 412012；3.中南大學湘雅藥學院，湖南 長沙 410013)

藤石松Lycopodiastrumcasuarinoides(Spring) Holub為蕨類植物門石松科藤石松屬的單種屬多年生攀援草本植物，生于海拔100～3 100 m的林下、灌木叢或溝邊，主要分布于熱帶與亞熱帶地區，在我國華東、華南、華中和西南地區廣泛分布，包括江西、湖南、云南、四川等地[1]。《四川中藥志》記載該植物又名“舒筋草”，主要用于祛風活絡、鎮痛消腫、跌打損傷等治療[2]。

藤石松的化學成分研究主要集中于石松生物堿類[3-7]，而其他類型化學成分少見報道。現代藥理學研究表明石松生物堿具有膽堿酯酶抑制活性[4-5]、抗腫瘤[6-7]、抗炎[8-9]等作用。本課題組前期從藤石松中分離得到石松生物堿類、萜類、色原酮類和脂肪族類等成分，且其中的萜類和脂肪族類成分亦具有膽堿酯酶抑制活性[5,10-11]。為進一步研究藤石松化學成分的多樣性，本課題組對藤石松75%乙醇提取物部分進行系統的化學成分研究，從中分離得到11個化合物，且所有化合物均為首次從藤石松屬植物中分離得到。

1 材料

柱色譜硅膠(200～300目，青島海洋化工廠)；Agilent 1260半制備型HPLC色譜、Agilent 6540 Q-TOF型高分辨質譜儀(美國Agilent公司)；制備色譜柱(北京綠百草科技發展有限公司SilGreen C18色譜柱)；自動旋光儀(奧地利Anton Paar MCP-500)；Avance-400、500型核磁共振波譜儀(德國Bruker公司)。乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷、甲醇等均為分析純(成都科龍化工試劑廠)；乙腈為色譜純(美國Sigma公司)。

藤石松全草采集于湖南省宜章縣和花垣縣，經廈門大學李振基教授鑒定為石松科藤石松屬植物藤石松Lycopodiastrumcasuarinoides(Spring) Holub的干燥全草。樣本(編號20160712)存放于中南大學湘雅藥學院藥物化學系。

2 提取與分離

藤石松干燥全草20 kg，用80 L 75%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，濃縮成流浸膏1.8 kg。隨后將流浸膏分散于20 L 3%酒石酸水溶液中，酸水溶液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，收集有機相，減壓蒸餾后，分別得到石油醚部位37 g、乙酸乙酯部位248 g、正丁醇部位1.2 kg。

乙酸乙酯部位經硅膠柱，二氯甲烷-甲醇(100∶0～0∶1)梯度洗脫，合并后得到8個組分(Fr.A～Fr.H)。Fr.A (32 g)經硅膠柱，二氯甲烷-甲醇(150∶1～60∶1) 梯度洗脫后得Fr.A1～Fr.A7。Fr.A4 (3.5 g)經硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯(10∶1～1∶1)梯度洗脫后，得化合物1(4.5 mg)。Fr.A5 (4.2 g)經硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯(4∶1)洗脫，得化合物2(3.1 mg)、3(2.7 mg)。Fr.A6 (3.9 g)先經硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯(4∶1)洗脫，再經半制備HPLC，乙腈-水(6∶4)分離，分別在10.1、13.2、22.5、23.0 min得化合物4(3.3 mg)、5(3.8 mg)、6(4.8 mg)、7(2.5 mg)。Fr.A7 (5.6 g) 先經硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯(1∶1)洗脫，再經半制備HPLC，乙腈-水(4∶6)分離，分別在6.8、14.5、20.3、22.7 min得化合物8(8.1 mg)、9(2.4 mg)、10(2.9 mg)和11(7.4 mg)。

3 結構鑒定

化合物1：白色固體，易溶于甲醇。HR-ESI-MSm/z:187.203 4[M+H]+。1H-NMR (500 MHz,CDCl3)δ:3.51 (1H,s,OH),3.66 (2H,t,H-1),1.59 (2H,m,H-2),1.28 (18H,overlapped,H-3～H-11),0.90 (3H,t,J=6.5 Hz,H-12);13C-NMR (125 MHz,CDCl3)δ:63.1 (C-1),32.8 (C-2),25.8 (C-3),29.6 (C-4),29.7 (C-5),29.7 (C-6),29.7 (C-7),29.7 (C-8),29.6 (C-9),31.9 (C-10),22.7 (C-11),14.1 (C-12)。以上數據與文獻[12]報道一致，故鑒定為月桂醇。

化合物3：黃色粉末，易溶于甲醇、氯仿、二甲基亞砜。HR-ESI-MSm/z:595.160 4[M+H]+。1H-NMR (500 MHz,CDCl3)δ:13.12 (1H,s,OH-5″),12.83 (1H,s,OH-5),8.00 (1H,dd,J=8.5,2.6 Hz,H-6′),7.90 (1H,d,J=2.3 Hz,H-2′),7.50 (2H,d,J=8.8 Hz,H-2?,6?),7.19 (1H,d,J=8.8 Hz,H-5′),6.85 (2H,d,J=8.8 Hz,H-3?,5?),6.64 (2H,H-3,3″),6.56 (1H,s,H-6″),6.46 (1H,d,J=2.1 Hz,H-8),6.38 (1H,d,J=2.1 Hz,H-6),3.89 (3H,s,-OCH3),3.86 (3H,s,-OCH3),3.83 (3H,s,-OCH3),3.81 (3H,s,-OCH3);13C-NMR (125 MHz,CDCl3)δ:164.0 (C-2),102.9 (C-3),182.4 (C-4),162.2 (C-5),98.1 (C-6),163.8 (C-7),92.6 (C-8),157.8 (C-9),104.6 (C-10),123.4 (C-1′),127.7 (C-2′),122.1 (C-3′),160.7 (C-4′),114.5 (C-5′),131.1 (C-6′),165.5 (C-2″),103.6 (C-3″),182.9 (C-4″),160.7 (C-5″),95.8 (C-6″),162.4 (C-7″),105.1 (C-8″),154.2 (C-9″),105.6 (C-10″),122.1 (C-1?),127.7 (C-2?),114.5 (C-3?),162.4 (C-4?),114.5 (C-5?),127.7 (C-6?),56.3 (-OCH3),55.9 (-OCH3),55.8 (-OCH3),53.5 (-OCH3)。以上數據與文獻[14]報道一致，故鑒定為穗花杉雙黃酮 7,4′,7″,4?-四甲基醚。

化合物4：黃色粉末，易溶于二甲基亞砜。HR-ESI-MSm/z:331.082 8[M+H]+。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6)δ:7.33 (2H,s,H-2′,6′),6.99 (1H,s,H-3),6.57 (1H,d,J=2.1 Hz,H-8),6.21 (1H,d,J=2.1 Hz,H-6),3.89 (6H,s,3′,5′-OCH3);13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6)δ:164.1 (C-2),104.1 (C-3),182.4 (C-4),157.7 (C-5),99.3 (C-6),164.7 (C-7),94.7 (C-8),161.9 (C-9),105.1 (C-10),120.9 (C-1′),104.9 (C-2′,6′),148.7 (C-3′,5′),140.3 (C-4′),56.8 (3′,5′-OCH3)。以上數據與文獻[15]報道一致，故鑒定為苜蓿素。

化合物5：黃色粉末，易溶于二甲基亞砜。HR-ESI-MSm/z:345.098 2[M+H]+。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:7.08 (1H,s,H-3),6.39 (1H,d,J=2.2 Hz,H-6),6.88 (1H,d,J=2.2 Hz,H-8),7.38 (2H,s,H-2′ and H-6′),12.98 (1H,s,5-OH),9.40 (1H,s,4′-OH),3.98 (3H,s,7-OCH3),3.90 (6H,s,3′,5′-OCH3);13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6)δ:164.4(C-2),104.2(C-3),182.5(C-4),161.6(C-5),98.5(C-6),165.6(C-7),93.3(C-8),157.8(C-9),105.2(C-10),120.7(C-1′) 104.9(C-2′),148.7(C-3′),140.5(C-4′),148.7(C-5′),104.9(C-6′),56.6 (7-OCH3),56.9 (3′,5′-OCH3)。以上數據與文獻[15]報道一致，故鑒定為7-甲氧基苜蓿素。

化合物6：白色晶體，易溶于甲醇。HR-ESI-MSm/z:193.047 6[M+H]+。1H-NMR (500 MHz,CD3OD)δ:6.23 (1H,d,J=9.5 Hz,H-3),7.88 (1H,d,J=9.5 Hz,H-4),7.14 (1H,s,H-5),6.80 (1H,s,H-8),3.93 (3H,s,-OCH3);13C-NMR (125 MHz,CD3OD)δ:162.7 (C-2),111.1 (C-3),144.7 (C-4),108.6(C-5),145.7 (C-6),151.6 (C-7),102.6 (C-8),150.1 (C-9),111.2 (C-10),55.4 (-OCH3)。以上數據與文獻[12]報道一致，故鑒定為東莨菪內酯。

化合物7：白色晶體，易溶于甲醇。HR-ESI-MSm/z:193.048 1[M+H]+。1H-NMR (500 MHz,CD3OD)δ:6.25 (1H,d,J=9.5 Hz,H-3),7.82 (1H,d,J=9.4 Hz,H-4),6.98 (1H,s,H-5),6.97 (1H,s,H-8),3.96 (3H,s,OCH3);13C-NMR (125 MHz,CD3OD)δ:162.6 (C-2),112.1 (C-3),143.9 (C-4),111.5 (C-5),144.5 (C-6),152.1 (C-7),99.2 (C-8),148.9 (C-9),112.1 (C-10),55.4 (OCH3)。以上數據與文獻[16]報道一致，故鑒定為異東莨菪內酯。

化合物8：白色粉末，易溶于二甲基亞砜。HR-ESI-MSm/z:179.034 4[M+H]+。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6)δ:6.17 (1H,d,J=9.4 Hz,H-3),7.87 (1H,d,J=9.5 Hz,H-4),6.98 (1H,s,H-5),6.74 (1H,s,H-8);13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6)δ:161.2 (C-2),112.0 (C-3),144.9 (C-4),112.8 (C-5),143.3 (C-6),150.8 (C-7),103.1 (C-8),149.0 (C-9),111.2 (C-10)。以上數據與文獻[17]報道一致，故鑒定為秦皮乙素。

化合物10：白色粉末，易溶于氯仿、甲醇。HR-ESI-MSm/z:123.044 6[M+H]+。1H-NMR (500 MHz,CDCl3)δ:9.88 (1H,s,CHO),7.85 (2H,d,J=8.6 Hz,H-2,6),7.01 (2H,d,J=8.6 Hz,H-3,5);13C-NMR (125 MHz,CDCl3)δ:129.8 (C-1),132.6 (C-2,6),116.0 (C-3,5),161.7 (C-4),191.3 (C-7)。以上數據與文獻[19]報道一致，故鑒定為4-羥基苯甲醛。

化合物11：白色粉末，易溶于氯仿、甲醇。HR-ESI-MSm/z:153.055 2[M+H]+。1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ:7.88 (2H,d,J=8.8 Hz,H-2,6),6.83 (2H,d,J=8.8 Hz,H-3,5),3.86 (3H,s,-OCH3);13C-NMR (125 MHz,CD3OD)δ:120.6 (C-1),131.3 (C-2,6),114.8 (C-3,5),162.4 (C-4),167.4 (-C=O),50.8 (-OCH3)。以上數據與文獻[20]報道一致，故鑒定為4-羥基苯甲酸甲酯。

4 討論

本次研究從藤石松中分離得到11個化合物，包括1個脂肪族類(1)、1個木質素類(2)、3個黃酮類(3～5)、3個香豆素類(6～8)、1個萜類(9)、2個簡單芳香族類(10～11)，均為首次從藤石松屬植物中分離得到，以期豐富藤石松的化學成分類型，也為藤石松活性成分研究及深度開發奠定物質基礎。