續斷一體化工藝優化

吳書亮，王建科*，迮薇薇，李 妍，顧 田

(1.貴州中醫藥大學，貴州 貴陽 550025；2.畢節市中醫院，貴州 畢節 551700)

續斷是傳統常用中藥，為川續斷科植物川續斷DipsacusasperWall.ex Henry的干燥根，在秋季采挖，除去蘆頭及須根，清洗后用微火烘至半干，堆積“發汗”至內部變綠后再烘干[1]，含有三萜皂苷、木通皂苷、馬錢子苷、多糖、生物堿等成分[2-6]，具有抗炎、鎮痛、抗衰老、抗骨質疏松及修復肝損傷等藥理活性[7-11]。在該藥材傳統加工工藝中，鮮品需先經產地加工得到商品藥材后再進行軟化、切制、干燥等工序處理形成飲片，其間用水、干燥工序有重復，可能會導致有效成分流失，增加藥材加工時間及成本。因此，本實驗在2020年版《中國藥典》的基礎上，將續斷產地加工方法與炮制方法進行整合，形成一體化加工工藝，并對其進行優化，以期為該藥材相關應用的研究奠定基礎。

1 材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀(UltiMate 3000型，美國賽默飛公司)；紫外-可見分光光度儀(TU-1810型，北京普析通用儀器有限責任公司)；電子天平[AUW220D型，島津儀器(蘇州)有限公司]；粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)。

1.2 試劑與藥物 川續斷皂苷Ⅵ(批號GZDD-0006)對照品購于貴州迪大生物科技有限責任公司。續斷采自威寧縣二塘鎮梅花村續斷種植基地，經貴州中醫藥大學生藥教研室魏升華教授鑒定為川續斷科植物川續斷DipsacusasperWall.ex Henry的新鮮根。甲醇、乙腈均為色譜純；甲醇、乙醇、磷酸均為分析純；水為純凈水。

2 方法與結果

2.1 飲片制備

2.1.1 優化的傳統切制工藝 參考文獻[12]報道，取新鮮藥材，剪掉須根及蘆頭，清洗干凈，過濾水分，置于60 ℃干燥箱中減重50%，堆積“發汗”以使藥材內部變綠，在60 ℃下烘干。加入4倍量水軟化6 h，取出，稍潤，橫切3 mm厚片，在70 ℃下烘干，即得。

2.1.2 一體化工藝(趁鮮切制) 取新鮮藥材，除去雜質，洗凈，在一定溫度下減重至一定程度，堆置“發汗”一定時間，取出，切片，干燥，即得。

2.2 川續斷皂苷Ⅵ、總皂苷、浸出物含量測定 川續斷皂苷Ⅵ、總皂苷含量測定根據李妍等[12]建立的方法進行，水溶性浸出物、醇溶性浸出物含量測定參照2020年版《中國藥典》方法進行[1]。

2.3 一體化工藝優化

2.3.1 單因素試驗 通過查閱相關文獻資料及前期預實驗，發現影響續斷趁鮮切制“發汗”后飲片質量的主要因素有藥材含水量、“發汗”溫度、“發汗”時間、烘干溫度等，同時還與“發汗”過程中出現的“霉變”現象有關。因此，本實驗以川續斷皂苷Ⅵ、總皂苷、浸出物含量為評價指標，對減重程度(A)、“發汗”溫度(B)、“發汗”時間(C)、烘干溫度(D)進行考察，結果見表1～4。

2.3.2 正交試驗 在單因素試驗基礎上，采用L9(34)表設計正交試驗方案，見表5～6。

表1 不同減重程度對各成分含量的影響

表2 不同“發汗”溫度對各成分含量的影響

表3 不同“發汗”時間對各成分含量的影響

表4 不同烘干溫度對各成分含量的影響

表5 因素水平

表6 試驗計劃

取新鮮藥材，按表6工藝進行加工、粉碎、過篩，測定川續斷皂苷Ⅵ、總皂苷、浸出物含量。根據上述指標在藥材中的重要性，設定權重分別為川續斷皂苷Ⅵ含量35%、總皂苷含量25%、水溶性浸出物含量20%、醇溶性浸出物含量20%，綜合評分=川續斷皂苷Ⅵ含量隸屬度×35%+總皂苷含量隸屬度×25%+水溶性浸出物含量隸屬度×20%+醇溶性浸出物含量隸屬度×20%，結果見表7，方差分析見表8。

表7 試驗設計與結果

表8 方差分析

由表7可知，各因素影響程度依次為B>A>D>C，表明“發汗”溫度最大，“發汗”時間最小，最優工藝為A3B2C1D1。由表8可知，減重程度、“發汗”溫度、烘干溫度有顯著影響(P<0.05)，而“發汗天數”無顯著影響(P>0.05)，并且烘干溫度為80 ℃時綜合評分最高。因此，最優工藝為A3B2C1D3，即新鮮藥材洗凈，在60 ℃下減重60%，于(25±2)℃堆置“發汗”3 d，取出，橫切2 mm片，在80 ℃下烘干，川續斷皂苷Ⅵ、續斷總皂苷、水浸出物、醇浸出物含量分別為7.71%、16.27%、53.23%、52.49%。

2.3.3 驗證試驗 取新鮮藥材3批，除去根頭和須根，水洗，瀝干表面水分，按“2.1.2”項下優化工藝制備 一體化工藝飲片，同時按“2.1.1”項下優化續斷傳統切制工藝制備3批飲片，按“2.2”項下方法測定川續斷皂苷Ⅵ、總皂苷、浸出物含量，結果見表9。由此可知，一體化工藝穩定、合理、可行，并且所得結果高于傳統工藝。

表9 驗證試驗結果(n=3)

3 討論

本實驗所用的續斷均采自同一種植基地，保證了藥材質量，并且鮮藥材較易切制，對機械設備要求不高，在種植基地內即可進行[13]。通過多指標綜合來優化續斷一體化工藝，符合中藥“一藥多效”的用藥特點，也可體現中醫藥思維的整體觀念[14]。結果顯示，最優工藝為新鮮藥材洗凈，在60 ℃下減重60%，于(25±2)℃堆置“發汗”3 d，取出，橫切2 mm片，在80 ℃下烘干，川續斷皂苷Ⅵ、續斷總皂苷、水浸出物、醇浸出物含量分別為7.71%、16.27%、53.23%、52.49%，經驗證試驗表明，該工藝穩定合理。

與續斷傳統切制工藝比較，一體化工藝具有生產周期短、貯存環節少、成品性狀佳、成本低、指標成分含量高等優勢，同時藥材產地加工與炮制的一體化有利于明確其產地及來源，從源頭上保證質量[15]。今后，課題組將比較上述2種工藝所得續斷飲片的藥效學，以期進一步探討該藥材一體化工藝的可行性，并為其生產開發奠定基礎。