基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究白芍總苷治療口腔扁平苔癬的作用機(jī)制

婁依婷，陶 然，李勇正，翁笑燕，應(yīng)彬彬，王慧明*

(1.浙江大學(xué)附屬寧波醫(yī)院，寧波市第一醫(yī)院，浙江 寧波 315000；2.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬口腔醫(yī)院，浙江省口腔生物醫(yī)學(xué)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310006；3.福建醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)系，福建醫(yī)科大學(xué)臨床應(yīng)用解剖學(xué)研究室，福建 福州 350122)

口腔扁平苔蘚是常見的口腔黏膜慢性炎癥疾病，人群患病率為0.1%～4%[1]，惡變率約為 0～5.3%[2-3]，被世界衛(wèi)生組織(WHO)列為癌前狀態(tài)[4]，可以同時(shí)發(fā)生在口腔黏膜的多個(gè)位置，最多見于頰黏膜，表現(xiàn)為網(wǎng)狀、條紋狀、萎縮、糜爛充血等改變[5]。目前針對(duì)該病尚無根治方法，主要使用如腎上腺皮質(zhì)激素類藥物、免疫抑制劑等減輕炎癥、促進(jìn)愈合，盡管取得了一定的療效，但是病情容易反復(fù)，且激素長(zhǎng)期治療有明顯的副作用。因此，選擇既有效，又不出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)的藥物對(duì)于治療口腔扁平苔癬具有重要意義。近年來，中藥注重對(duì)整體的調(diào)節(jié)，毒副作用較小，其合理開發(fā)應(yīng)用對(duì)治療該病具有重要臨床意義。

白芍總苷提取自芍藥干燥根，是包括芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷、羥基芍藥苷、芍藥花苷在內(nèi)的一組糖苷類物質(zhì)的統(tǒng)稱。它具有抗炎、止痛、免疫調(diào)節(jié)等功效，主要用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等免疫系統(tǒng)疾病[6-7]，臨床研究證明白芍總苷可以作為免疫調(diào)節(jié)劑治療口腔扁平苔癬，單獨(dú)或與西藥聯(lián)合使用提高臨床療效，減少不良反應(yīng)。如白芍總苷可以緩解口腔扁平苔蘚的癥狀，控制其炎癥的發(fā)生、發(fā)展[8]；聯(lián)合復(fù)方倍他米松治療糜爛性口腔扁平苔癬，降低復(fù)發(fā)率[9]；聯(lián)合曲安奈德能降低口腔扁平苔癬患者血清中的腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor，TNF-α)和白介素6(IL6)水平[10]。雖然白芍總苷干預(yù)口腔扁平苔癬的療效比較明確，但具體作用分子機(jī)制仍不明確，需要進(jìn)一步研究。

中藥具有多成分特點(diǎn)，并非通過單一靶點(diǎn)、通路來發(fā)揮作用，傳統(tǒng)藥理學(xué)的單一性思維難以總結(jié)藥物作用于機(jī)體的機(jī)制。2007年英國(guó)藥理學(xué)家Hopkins提出網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)概念[11]，通過結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和生物信息學(xué)，利用生物學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)來構(gòu)建“疾病-基因-靶點(diǎn)-藥物”網(wǎng)絡(luò)觀察藥物對(duì)疾病的作用機(jī)制，這與中藥多靶點(diǎn)、多通道作用的特點(diǎn)相契合。同時(shí)，運(yùn)用分子對(duì)接技術(shù)預(yù)測(cè)模擬成分與相應(yīng)受體的結(jié)合方式，以闡明作用靶點(diǎn)。本研究基于以上2種方法對(duì)白芍總苷治療口腔扁平苔癬的作用機(jī)制進(jìn)行研究，預(yù)測(cè)白芍總苷的主要活性成分，為口腔扁平苔癬的臨床干預(yù)治療提供幫助。

1 材料和方法

1.1 一般資料和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 選擇2019年4月至2020年10月于浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬口腔醫(yī)院黏膜科就診的扁平苔癬患者103例，其中男33例，女70例；年齡平均(50.07±13.49)歲。根據(jù)用藥分為白芍總苷治療(觀察組，53例)和常規(guī)用藥(對(duì)照組，50例)2大類，依據(jù)中華口腔醫(yī)學(xué)會(huì)口腔黏膜病專委會(huì)制定的口腔扁平苔癬療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)及指南比較2組治療有效率，即病損完全消退，黏膜恢復(fù)正常，自覺癥狀消失記為“治愈”；充血和糜爛完全消失，白色條紋無或輕微，疼痛完全消失記為“顯效”；充血和糜爛面積縮小，白色條紋減少，疼痛減輕記為“有效”；充血和糜爛無變化或增加，白色條紋無變化或增加，疼痛無減輕或加重記為“無效”。總有效率=(治愈例數(shù)+顯效例數(shù)+有效例數(shù))/總例數(shù)×100%。

1.2 數(shù)據(jù)庫(kù)及軟件 有機(jī)小分子生物活性數(shù)據(jù)庫(kù)PubChem(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov)；中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)TCMSP(https:// tcmspw.com/tcmsp.php)；中醫(yī)藥研究綜合數(shù)據(jù)庫(kù)TCMID(http://www.megabionet.org/tcmid/)；化合物蛋白質(zhì)互作STITCH數(shù)據(jù)庫(kù)(http://stitch.embl.de)；生物活性小分子靶向預(yù)測(cè)平臺(tái)SwissTargetPrediction(https://www.swisstargetprediction.ch)；通用蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)Uniprot(https://www.uniprot.org)；疾病基因與突變位點(diǎn)DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)(www.disgenet.org/)；治療靶點(diǎn)TTD數(shù)據(jù)庫(kù)(http://bidd.nus.edu.sg/group/cjttd/)；人類基因綜合數(shù)據(jù)庫(kù)Genecards(https://www.genecards.org)；在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫(kù)OMIM(https://omim.org)；功能富集分析數(shù)據(jù)庫(kù)DAVID(https://david.ncifcrf.gov/)；蛋白互作平臺(tái)String version 11.0(https://string-db.org)；蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)PBD(http://www.rcsb.org/)。R語(yǔ)言VennDiagram 1.6.20包；網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵傩苑治鲕浖﨏ytoscape 3.6.1；R語(yǔ)言ggplot2包；三維分子模型軟件Pymol 2.5；分子對(duì)接軟件AutoDock 4.2。

1.3 白芍總苷化學(xué)成分與靶點(diǎn)信息收集 根據(jù)白芍總苷系統(tǒng)成分分析結(jié)果，利用PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)獲取其SDF格式文件及對(duì)應(yīng)的簡(jiǎn)化分子線性輸入規(guī)范(simplified molecular input line entry specification，SMILES)結(jié)構(gòu)，對(duì)其分子結(jié)構(gòu)進(jìn)一步確證。以化學(xué)成分芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、羥基芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、芍藥花苷為關(guān)鍵詞，分別輸入TCMSP、TCMID、STITCH數(shù)據(jù)庫(kù)獲得化合物預(yù)測(cè)靶點(diǎn)。同時(shí)，將上述化合物的SDF格式文件置入SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫(kù)，結(jié)合上述數(shù)據(jù)庫(kù)，綜合預(yù)測(cè)白芍總苷中化學(xué)成分的作用靶點(diǎn)。根據(jù)UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)中UniProKBt檢索功能，輸入預(yù)測(cè)靶點(diǎn)信息，預(yù)測(cè)條件限定物種為“Homosapiens(Human)”，將所有靶點(diǎn)名稱校正為官方名稱(Official gene symbol)。

1.4 口腔扁平苔癬疾病靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 通過DisGeNET、TTD、GeneCards、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)，輸入關(guān)鍵詞檢測(cè)“Oral lichen planus”，物種設(shè)置為“Homosapiens(Human)”，查找分析和口腔扁平苔癬相關(guān)的人類基因，將各數(shù)據(jù)庫(kù)檢索結(jié)果匯總后去除重復(fù)基因并查閱相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行驗(yàn)證，最終獲得口腔扁平苔癬相關(guān)靶點(diǎn)。

1.5 構(gòu)建“白芍總苷-主要化合物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò) 根據(jù)上述靶點(diǎn)信息，利用R語(yǔ)言VennDiagram包，繪制藥物和疾病的韋恩圖，獲得藥物和疾病共同分子靶點(diǎn)。基于收集獲得的預(yù)測(cè)靶點(diǎn)，在Excel表中分別構(gòu)建“藥物-主要化合物”“主要化合物-靶點(diǎn)”“靶點(diǎn)-疾病”之間的相互關(guān)系，采用Cytoscape軟件進(jìn)行拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)分析，繪制“白芍總苷-主要化合物-藥物靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖。其中不同的節(jié)點(diǎn)(Node)分別代表了白芍總苷、主要化合物、作用靶點(diǎn)、疾病，邊(Edge)代表了四者之間的關(guān)系。

1.6 作用靶點(diǎn)功能和通路的富集分析 基于收集獲得的白芍總苷治療口腔扁平苔蘚的預(yù)測(cè)靶點(diǎn)，采用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)，物種限定為“Homosapiens”，對(duì)預(yù)測(cè)靶點(diǎn)進(jìn)行GO和KEGG分析，利用R語(yǔ)言ggplot2包將結(jié)果可視化。其中，GO分析分為分子功能(molecular function，MF)，生物過程(biological process，BP)和細(xì)胞組成(cellular component，CC)三個(gè)部分。

1.7 構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)并篩選關(guān)鍵(hub)基因 將白芍總苷治療口腔扁平苔蘚的預(yù)測(cè)靶點(diǎn)導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫(kù)，物種限定為“Homosapiens”，獲取蛋白質(zhì)相互作用信息。篩選具有高置信度(≥0.75)的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，將其導(dǎo)入Cytoscape軟件，繪制PPI網(wǎng)絡(luò)圖。利用Cytoscape中CytoHubba插件，按MCC(maximal clique centrality)計(jì)算方法，篩選排名前十的hub基因。利用Cytoscape中MCODE插件，進(jìn)一步提取了其中的核心子網(wǎng)絡(luò)。

1.8 主成分-主靶點(diǎn)分子對(duì)接 在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取主成分的三維(3D)結(jié)構(gòu)，利用PyMOL軟件將其轉(zhuǎn)換為PDB格式，并使用AutoDock軟件進(jìn)行加氫、加電子等操作，觀察可扭轉(zhuǎn)的化學(xué)鍵個(gè)數(shù)，保存為Pdbqt格式。從PDB數(shù)據(jù)庫(kù)下載疾病靶點(diǎn)蛋白3D結(jié)構(gòu)的PDB格式文件，并運(yùn)用PyMOL軟件對(duì)蛋白質(zhì)分子進(jìn)行去水去化合物，利用AutoDock軟件將蛋白質(zhì)加氫、加電子，轉(zhuǎn)化成備用對(duì)接文件格式(Pdbqt)格式，用AutoGrid進(jìn)行計(jì)算。對(duì)接時(shí)構(gòu)象計(jì)算算法為基因遺傳算法(Genetic Algorithm)，參數(shù)默認(rèn)，結(jié)果輸出方式為Genetic Algorithm。通過結(jié)合能(binding energy，BE)對(duì)成分與靶點(diǎn)之間的結(jié)合活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，利用PyMOL軟件使對(duì)接文件可視化。

2 結(jié)果

2.1 2組治療有效率比較 治療后觀察組有效率為86.79%，對(duì)照組有效率為62.00%，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 2組臨床治療有效率比較(例)

2.2 白芍總苷的主要成分靶點(diǎn) 根據(jù)白芍總苷系統(tǒng)成分分析結(jié)果(圖1)，得到5個(gè)有效成分分別為芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、羥基芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、芍藥花苷。將5個(gè)化學(xué)成分輸入TCMSP、TCMID、STITCH和SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫(kù)，搜索結(jié)果經(jīng)篩選后共得到438個(gè)藥物潛在靶點(diǎn)，去除重復(fù)的預(yù)測(cè)靶點(diǎn)后結(jié)果為199個(gè)。

圖1 白芍總苷有效成分

2.3 疾病靶點(diǎn)的篩選及其與藥物共有靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 通過DisGeNET、TTD、GeneCards、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)分別以疾病名稱“Oral lichen planu”進(jìn)行檢索，其中DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)獲得治療口腔扁平苔癬的疾病靶點(diǎn)454個(gè)，TTD數(shù)據(jù)庫(kù)篩選得到疾病靶點(diǎn)4個(gè)，GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)篩選后得到疾病靶點(diǎn)402個(gè)，OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)得到疾病靶點(diǎn)2個(gè)，4個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)結(jié)果匯總?cè)ブ貜?fù)項(xiàng)，得到疾病靶點(diǎn)共534個(gè)。將白芍總苷藥物靶點(diǎn)與口腔扁平苔癬疾病靶點(diǎn)進(jìn)行映射匹配，得到白芍總苷治療口腔扁平苔癬的靶點(diǎn)共39個(gè)，繪制韋恩圖(圖2)。

圖2 疾病靶點(diǎn)-藥物靶點(diǎn)韋恩圖

圖3 白芍總苷活性成分治療口腔扁平苔癬的潛在靶點(diǎn)GO分析

2.4 GO功能和KEGG信號(hào)通路富集分析 將白芍總苷主要成分預(yù)測(cè)得出的39個(gè)作用靶點(diǎn)，通過DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行GO分析和KEGG分析。GO功能富集分析顯示(圖3)，在生物過程(BP)中，白芍總苷治療靶基因主要參與RNA聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控(positive regulation of transcription from RNA polymeraseⅡ promoter)、對(duì)NF-κB轉(zhuǎn)錄因子活性的正調(diào)控(positive regulation of NF-κB transcription factor activity)、炎癥反應(yīng)(inflammatory response)、凋亡過程的負(fù)調(diào)控(negative regulation of apoptotic process)等過程；在分子功能(MF)中，白芍總苷治療靶基因主要參與金屬內(nèi)肽酶活性(metalloendopeptidase activity)、脂多糖結(jié)合(lipopolysaccharide binding)、鋅離子結(jié)合(zinc ion binding)；在細(xì)胞組成(CC)中，白芍總苷治療靶基因主要作用于核(nucleus)、胞外間隙(extracellular space)、質(zhì)膜(plasma membrane)。

KEGG信號(hào)通路富集結(jié)果顯示，白芍總苷治療口腔扁平苔癬主要涉及的通路主要有TLR信號(hào)通路(Toll-like receptor signaling pathway)、腫瘤壞死因子信號(hào)通路(TNF signaling pathway)、癌癥中的蛋白多糖(proteoglycans in cancer)、PI3K-Akt信號(hào)通路(PI3K-Akt signaling pathway)、癌癥的途徑(pathways in cancer)、NOD樣受體信號(hào)通路(NOD-like receptor signaling pathway)，提示白芍總苷治療口腔扁平苔癬可能通過以上多條信號(hào)通路協(xié)同作用。圖4是排名前20的信號(hào)通路富集數(shù)據(jù)，圓圈大小代表基因數(shù)目，參與該信號(hào)通路靶基因的數(shù)目越多，圓圈直徑越大；圓圈的顏色從藍(lán)色到綠色再變紅代表P值逐漸變小，P值越小，說明參與該信號(hào)通路的靶基因富集程度越高。

2.5 PPI網(wǎng)絡(luò)分析 將白芍總苷預(yù)測(cè)治療靶點(diǎn)導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫(kù)，得到PPI網(wǎng)絡(luò)圖，網(wǎng)絡(luò)圖包括了39個(gè)節(jié)點(diǎn)，304條邊，平均節(jié)點(diǎn)度為15.6，平均局部聚類系數(shù)為0.767，導(dǎo)入Cytoscape軟件，繪制PPI網(wǎng)絡(luò)圖(圖5A)。利用Cytoscape中cytoHubba插件，挖掘hub基因。IL6、CASP3、TNF、TP53、STAT3、EGFA、MMP9、EGFR、MMP2、PTGS2為排名前十的基因，這些靶基因可能是PPI網(wǎng)絡(luò)中的樞紐節(jié)點(diǎn)，也很可能是白芍總苷治療口腔扁平苔癬的核心靶點(diǎn)(圖5B)。利用Cytoscape中MCODE插件，發(fā)現(xiàn)了其中的核心子網(wǎng)絡(luò)(圖5C)。

圖4 通路分析氣泡圖

圖5 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析圖

2.6 分子對(duì)接 芍藥苷是白芍總苷的主要有效成分，其含量占總苷的90%以上，將該活性成分與Cytoscape軟件中cytoHubba得出的IL6、CASP3、TP53、STAT3關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接，并利用PyMOL程序?qū)ζ溥M(jìn)行可視化分析。每種活性成分產(chǎn)生50種對(duì)接結(jié)果，結(jié)合能越小說明受體與配體之間的親和力越大，按結(jié)合能從低到高將對(duì)接結(jié)果進(jìn)行排序，選取結(jié)合能最低且構(gòu)象較好的結(jié)果作為分子對(duì)接結(jié)果。圖6依次為芍藥苷和CASP3、IL6、STAT3、TP53分子對(duì)接結(jié)果，圖中標(biāo)注了主要結(jié)合位點(diǎn)和結(jié)合氫鍵長(zhǎng)度。

圖6 芍藥苷與CASP3(A)、IL6(B)、STAT3(C)、TP53(D)的分子對(duì)接

2.7 白芍總苷-成分-作用靶點(diǎn)-通路-口腔扁平苔癬疾病網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 采用Cytoscape軟件構(gòu)建白芍總苷-成分-作用靶點(diǎn)-口腔扁平苔癬疾病的網(wǎng)絡(luò)模型，該網(wǎng)絡(luò)有697個(gè)節(jié)點(diǎn)和863條邊(圖7)，其中下標(biāo)符代表藥物，正方形節(jié)點(diǎn)代表疾病，菱形節(jié)點(diǎn)代表成分，圓形節(jié)點(diǎn)代表靶點(diǎn)，其中黃色圓形靶點(diǎn)代表共同作用靶點(diǎn)，邊代表相互作用關(guān)系。度值在網(wǎng)絡(luò)分析中越大說明與之相連的節(jié)點(diǎn)數(shù)越多。芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、羥基芍藥苷、苯甲酰芍藥苷能與50個(gè)以上靶點(diǎn)相連接，推測(cè)這4個(gè)成分是白芍總苷中多靶點(diǎn)治療口腔扁平苔癬的主要活性成分。ADRA2B、ADRA2C、FGF2、MMP2、STAT3、TP53、GABRA3、HSPA5、IL6這些靶點(diǎn)可能在口腔扁平苔癬治療中發(fā)揮重要的作用。以上結(jié)果可以得出白芍總苷的各個(gè)成分通過多靶點(diǎn)、多信號(hào)通路來治療口腔扁平苔癬。

圖7 白芍總苷-成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)

3 討論

口腔扁平苔蘚的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，國(guó)內(nèi)外研究認(rèn)為該病可能與自身免疫因素、精神因素相關(guān)[12-14]。近年來中藥白芍總苷在調(diào)節(jié)免疫等方面表現(xiàn)出較好療效[15]，可以緩解癥狀，控制炎癥的發(fā)生發(fā)展[8]，但其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制較難明確。

本研究借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，探討白芍總苷治療口腔扁平苔癬的物質(zhì)基礎(chǔ)及其分子機(jī)制，分析獲得藥物和疾病共同分子靶點(diǎn)39個(gè)，主要靶點(diǎn)包括IL6、TNF、TP53、STAT3、MMP2、MMP9、EGFR等。IL6是近年來研究最熱門的炎癥細(xì)胞因子之一，國(guó)內(nèi)外研究表明口腔扁平苔癬患者的血清和唾液中IL6表達(dá)較健康人升高，可以作為口腔扁平苔癬的診斷和治療靶標(biāo)[16-18]。TNF是一種能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞而對(duì)正常細(xì)胞無明顯毒性的內(nèi)細(xì)胞因子，分為TNF-α，TNF-β兩種[19]。實(shí)驗(yàn)證明TNF-α參與口腔扁平苔癬的發(fā)病及病變發(fā)展過程，且兩者之間有相關(guān)性[20-22]。臨床研究表明TNF-α同IL6在口腔扁平苔癬患者外周血清中高表達(dá)，而白芍總苷的使用可以降低兩者的水平[10]。

口腔扁平苔癬被WHO歸類為癌變前疾病，腫瘤抑制基因(TP53)參與誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯或DNA損傷細(xì)胞的凋亡[23-24]，有研究發(fā)現(xiàn)在口腔扁平苔癬中TP53家族成員P63和其相關(guān)蛋白表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)表達(dá)下降，后者被認(rèn)為在上皮角化增殖中起重要作用[25]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)MMP2和MMP9的表達(dá)與口腔扁平苔癬的發(fā)生、發(fā)展乃至癌變潛能有關(guān)，可以作為口腔潛在惡性疾病的早期診斷標(biāo)志物[26-27]。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3(STAT3)是一種在多種組織(包括口腔黏膜)中表達(dá)的信號(hào)分子，可能是口腔扁平苔癬疾病發(fā)生發(fā)展過程中與臨床分型密切相關(guān)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄信號(hào)蛋白，在正常對(duì)照組、網(wǎng)狀口腔扁平苔癬、糜爛性口腔扁平苔癬組中STAT3的表達(dá)逐漸升高[28-29]。白芍總苷可以下調(diào)STAT3表達(dá)，從而改善間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能[30]。

本研究分析結(jié)果表明白芍總苷治療口腔扁平苔癬主要涉及TLR信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路等，它們?cè)谘装Y和免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用。TNF信號(hào)通路不僅與炎癥、凋亡密切相關(guān)，而且與PI3K-Akt信號(hào)通路間的交叉作用參與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)[31-32]。此外，口腔扁平苔癬的發(fā)生涉及角質(zhì)形成細(xì)胞的變性，而角質(zhì)形成細(xì)胞中的TLRs在皮膚自身免疫疾病中起重要作用[33-37]。白芍總苷顯示出的抗炎和免疫調(diào)節(jié)活性，已經(jīng)被證明可以通過選擇性地調(diào)節(jié)PI3K/Akt/mTOR途徑[38]、抑制TNF-α的產(chǎn)生[39]、阻斷體內(nèi)TLRs的活化[40]等對(duì)免疫相關(guān)疾病起到保護(hù)作用。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法分析了白芍總苷治療口腔扁平苔癬的活性成分、關(guān)鍵基因和作用機(jī)制，構(gòu)建了“藥物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)，并驗(yàn)證了主要活性成分與重要靶點(diǎn)之間存在較好的結(jié)合活性，說明白芍總苷通過多成分-多靶點(diǎn)-多通路治療口腔扁平苔癬，為研究白芍分子作用機(jī)制和口腔扁平苔癬發(fā)病機(jī)制提供了方向。