Nec-1鞘內注射抑制炎性反應對大鼠外周神經病理性疼痛的影響*

張秀梅

江西省贛州市人民醫院麻醉科，江西贛州 341000

神經病理性疼痛是指由于疾病或者軀體受損后出現的疼痛，此類疼痛為中樞神經或者外周神經破壞性刺激導致[1]。目前，臨床上對于神經病理性疼痛的治療手段多種多樣，但整體治療效果依舊不夠理想。機體受到損傷及細胞壞死性凋亡等均會導致神經細胞出現死亡，繼而引起神經病理性疼痛等。因此，在神經病理性疼痛改善方面，可從調節細胞程序性壞死方面入手，程序性壞死特異性抑制劑(Nec-1)可以對程序性壞死產生抑制作用，探討其對炎性反應、外周神經病理性疼痛的影響具有重要意義[2-4]。本研究以45只雄性大鼠為研究對象，分析Nec-1在抑制炎性反應對大鼠外周神經病理性疼痛的影響中的作用，現報道如下。

1 材料與方法

1.1實驗動物 選取雄性SD大鼠45只為研究對象，按照隨機數字表法分為對照組、損傷組、損傷給藥組，每組15只。對照組大鼠月齡2～3個月，平均(2.35±0.12)月；體質量182～220 g，平均(192.36±1.87)g。損傷組大鼠月齡2～3個月，平均(2.36±0.12)月；體質量180～220 g，平均(192.41±1.92)g。損傷給藥組月齡2～3個月，平均(2.41±0.16)月；體質量183～220 g，平均(192.38±1.88)g。3組大鼠月齡、體質量比較，差異無統計學意義(P>0.05)。研究期間所有大鼠生活環境控制為濕度40%～70%、溫度18～22 ℃，自然晝夜光線下飼養，自由飲水進食，4只/籠。

1.2儀器與試劑 Nec-1由上海懋康生物科技有限公司提供，PubChem化學物質編號24724559，MDL編號MFCD00056916Von-Frey。BME-410A型熱痛刺激儀由北京拜安吉科技有限公司提供。受體相互作用蛋白(RIP)3、RIP1、混合系激酶區域樣蛋白(MLKL)抗體，以及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素(IL)-1β、IL-6檢測試劑盒由Abcam 公司提供。

1.3方法 在損傷組、損傷給藥組大鼠腹腔內注射10%水合氯醛300 mg/kg進行麻醉，手術損傷坐骨神經。術后對損傷給藥組大鼠進行鞘內置管，術后5 d給予Nec-1鞘內注射治療，每天5 μg Nec-1+10 μL二甲基亞砜(DMSO)儲備液注射治療，持續至術后14 d。對照組為空白組不做任何處理。

1.4觀察指標 分別于術前1 d，術后1、3、5、7、10、12、14 d觀察3組熱刺激縮足反射潛伏期(TWL)、機械縮足反射閾值(MWT)，采用BME-410A型熱痛刺激儀進行測試，參照儀器使用說明書進行操作。術后14 d采用酶聯免疫吸附試驗檢測所有大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6水平，將所有大鼠麻醉處死，取L4～L6段脊髓背角，使用Western blot法檢測大鼠MLKL、RIP1、RIP3水平。

2 結 果

2.13組大鼠TWL、MWT比較 3組大鼠術前1 d TWL、MWT比較，差異無統計學意義(P>0.05)。對照組術前1 d與術后1、3、5、7、10、12、14 d TWL、MWT比較，差異無統計學意義(P>0.05)。損傷組TWL、MWT術后1、3、5、7、10、12、14 d明顯下降，與術前1 d比較，差異有統計學意義(P<0.001)。損傷給藥組術后1、3、5 d TWL、MWT較術前1 d明顯下降，給藥后出現升高，術后7、10、12、14 d TWL、MWT較術后1、3、5 d 明顯升高，差異有統計學意義(P<0.001)。見表1。

表1 3組大鼠TWL、MWT比較

續表1 3組大鼠TWL、MWT比較

2.23組大鼠脊髓背角細胞程序性壞死的壞死通路蛋白表達水平比較 術后14 d,MLKL、RIP1、RIP3水平在對照組、損傷給藥組、損傷組依次升高，兩兩比較，差異有統計學意義(P<0.001)。見表2。

表2 3組大鼠脊髓背角細胞程序性壞死的壞死通路蛋白表達水平比較

2.33組大鼠炎癥因子水平比較 TNF-α、IL-1β、IL-6水平在對照組、損傷給藥組、損傷組中依次升高，兩兩比較，差異有統計學意義(P<0.001)。見表3。

表3 3組大鼠炎癥因子水平比較

3 討 論

神經病理性疼痛的原因多樣，手術類型、年齡、麻醉時間等因素均可對神經病理性疼痛的發病產生影響。目前，在此病治療中，各種藥物所能起到的效果還不夠理想，對此病進行有效治療依舊是臨床領域亟待解決的重要問題[5-8]。有研究表明，患者出現神經病理性疼痛與細胞出現的壞死性凋亡有很大關系，因此在神經病理性疼痛上可向此領域進行深入分析[9-12]。

RIP1與RIP3形成壞死小體，被認為是程序性壞死的重要分子標志，Nec-1對RIP1與 RIP3的結合可以產生抑制作用，達到有效阻斷壞死性凋亡的目的，繼而改善病理性損傷，緩解疼痛[13-15]。本研究結果顯示，損傷組、損傷給藥組TWL、MWT在術后1、3、5 d有明顯下降的趨勢，說明研究構建的分組具有嚴謹性與合理性。且研究結果顯示損傷給藥組TWL、MWT先下降后升高(P<0.001)，說明在大鼠損傷后，給予其Nec-1鞘內注射對于細胞壞死性凋亡起到抑制作用，可緩解壞死引起的大鼠熱痛覺過敏、機械痛覺等[16-18]。外周神經損傷出現后，可以使大鼠脊髓背角膠質細胞激活，使大鼠炎癥因子釋放增加，而炎癥因子水平的升高又會對大鼠神經病理性疼痛產生重要影響。TNF-α已被證實可直接激活RIP1，助力壞死性凋亡。由于TNF-α、IL-1β、IL-6可以直接反映炎癥因子激活情況，通過對其表達水平的觀察可以分析藥物對神經病理性疼痛產生的影響。術后14 d，損傷組TNF-α、IL-1β、IL-6水平最高，明顯高于損傷給藥組，說明損傷組大鼠炎癥因子激活明顯強于損傷給藥組，證明Nec-1鞘內注射在抑制炎性反應等方面具有積極作用，繼而緩解大鼠神經病理性疼痛[19-20]。

綜上所述，Nec-1鞘內注射對大鼠外周神經病理性疼痛、炎性反應改善等均有積極意義，可以抑制大鼠脊髓背角細胞的壞死性凋亡，值得深入研究。