HIV第四代試劑初篩假陽性患者1例分析

劉 杰，張大鵬

1.四川省達州市達川區人民醫院檢驗科，四川達州 635000;2.重慶醫科大學感染性疾病教育部重點實驗室，重慶 400010

自1985年我國發現第1例人類免疫缺陷病毒(HIV)感染者以來，我國的HIV感染者逐年增加，盡早發現HIV感染者和艾滋病患者，及早提供咨詢、治療對控制疾病的流行尤為重要[1]。對HIV的檢測，1985年美國食品藥品監督管理局(FDA)批準使用第一代酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測試劑，第一代試劑主要為病毒裂解物或部分純化的病毒抗原包被反應板，由于宿主細胞成分的污染和雜蛋白的存在，故假陽性較高。1990年第二代試劑出現，主要特征是使用重組或合成多肽抗原，靈敏度和特異度均較第一代試劑有所提高，窗口期平均比第一代試劑縮短20.3 d。1994年開發出了第三代試劑，相對于第二代試劑檢出HIV抗體的時間可以提前4～5 d，同時靈敏度有所提高。1998年出現第四代試劑，第四代試劑則在第三代試劑的基礎上進一步增加了p24抗原的檢測,同時進行HIV抗體及p24抗原的檢測，可提高試劑靈敏度，縮短窗口期，減少急性感染者窗口期漏檢，與第三代試劑相比，第四代試劑檢測窗口期平均縮短4～5 d[2]。目前，四川省達州市達川區人民醫院(以下簡稱本院)檢驗科采用第四代HIV初篩試劑時，發現1例HIV初篩陽性患者，隨訪發現第四代試劑復檢仍為陽性，蛋白質免疫印跡(WB)試驗確診為陰性。為進一步確診，對該患者進行HIV-1核酸檢測及外周血CD4+和CD8+T淋巴細胞比值分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1病例資料 患者，男，68歲，平時健康狀況欠佳，慢性胃炎10余年，高血壓5年。入院7 d前，患者右側肢體無力、吐詞不清，于2020年5月27日到本院就診，頭顱MRI示：腦梗死。入院當天血紅蛋白(Hb)為134 g/L,血小板計數為141×109/L，白細胞計數為4.15×109/L，中性粒細胞百分比為70.7%,淋巴細胞百分比為19.8%；肝功能指標正常。患者無流行病學史。入院進行常規輸血前篩查。

1.2試劑與儀器

1.2.1初篩試劑 HIV抗原/抗體初篩試劑A由邁克生物股份有限公司提供(批號：1119071)，HIV抗體初篩試劑B由鄭州安圖生物工程股份有限公司提供(批號：191126),快速診斷HIV抗體初篩試劑C由廈門英科新創科技有限公司提供(批號20191208E2)。

1.2.2檢測儀器 邁克I3000全自動化學發光儀，安圖A2000Plus全自動化學發光儀，BD Calibur流式細胞儀。

1.3方法 采用試劑A進行初篩試驗，根據《全國艾滋病檢測技術規范(2020年修訂版)》[3]的要求，對初篩有反應的標本，可再選擇抗原或抗體檢測試劑復檢，若復檢兩次結果均有反應或一種有反應，一種無反應，需進行HIV抗體確證試驗；結果均無反應，需進行HIV-1核酸檢測或2～4周隨訪。結果均無反應的標本送往達州市疾病預防控制中心(CDC)，進行HIV抗體蛋白印跡試驗及HIV-1核酸檢測。外周血CD4+和CD8+T淋巴細胞檢測于本院檢驗科開展。

2 結 果

2.1HIV初篩試驗結果 本院檢驗科使用初篩試劑A的S/CO值為477.875(陽性)。選擇兩種HIV抗體檢測試劑(試劑B、試劑C)對標本進行復檢，試劑B的S/CO值為0.016，試劑C為陰性，見表1。因HIV抗體檢測試劑B/C均為陰性，對患者進行隨訪。

表1 HIV初篩試驗結果

2.2隨訪4周后HIV復檢結果 對患者隨訪4周后進行復檢，HIV抗原/抗體初篩試劑A的S/CO值為438.554(陽性)，試劑B的S/CO值為0.016(陰性)，試劑C為陰性。

2.3WB和核酸序列擴增試驗 采用WB試驗檢測HIV抗體，檢測結果為陰性；核酸序列擴增試驗檢測HIV-1核酸，檢測結果為陰性。

2.4流式細胞術檢測結果 流式細胞術檢測外周血T淋巴細胞，亞群分類CD4+T細胞占比為24%，CD8+T細胞占比為15%，CD4/CD8比值為1.6，該患者CD4/CD8比值在參考范圍內(1.5～2.5)，CD3+/CD45+、CD3+CD8+/CD45+、CD3+CD4+/CD45+分別為39%、15%、24%。

3 討 論

自1985年第一代HIV抗體試劑問世以來，至今已經發展到第四代試劑；窗口期由第一代的大約3個月縮短到第四代的大約2周[4]。 在縮短窗口期的同時，也使第四代試劑的假陽性率大大增加。

本研究中病例采用邁克生物股份有限公司提供的第四代試劑進行初篩，其結果S/CO值較高，而復檢采用的鄭州安圖生物工程股份有限公司提供的第三代試劑和廈門英科新創科技有限公司提供的快速診斷第三代試劑檢測結果均為陰性，檢測結果相差較大，且S/CO值越高預示HIV陽性的風險越高[5]。于是隨訪4周后再次進行HIV抗體檢測，結果依舊為陰性。同時WB試驗檢測HIV抗體為陰性，核酸序列擴增試驗檢測HIV-1核酸結果為陰性，流式細胞術檢測外周血T淋巴細胞亞群，CD4/CD8在正常參考范圍內，提示在對此病例進行HIV篩查時，第四代試劑出現假陽性。既往研究結果表明，標本溶血、黃疸、乳糜血或血型等因素可導致檢測結果呈假陽性[6-8]。當患者具有某些基礎疾病如惡性腫瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病等，其體內可能含有干擾抗體如自身抗體、類風濕因子等，這些干擾抗體可與試劑盒中抗原成分產生非特異結合，從而使檢測結果產生假陽性[9-10]。另外，一些特殊人群如孕婦、嬰幼兒、老人等體內產生的嗜異性抗體也會導致檢測結果呈假陽性[11-12]。

本研究中病例血清標本性狀正常且為全自動儀器檢測，排除標本性狀因素及操作人員操作產生的隨機誤差導致的假陽性因素。本院檢驗科采用邁克生物股份有限公司第四代試劑(夾心法)對HIV進行初篩。患者年齡較大且長期健康狀況欠佳，有較多的基礎疾病，導致檢測結果假陽性的可能原因是患者體內存在嗜異性抗體，而嗜異性抗體可以與許多動物免疫球蛋白的Fc、Fab和F(ab′)2部位上的表位結合，模擬被測抗原的免疫活性，同時結合試劑盒中的捕獲抗體、標記抗體或標記抗原等成分干擾試驗結果，造成假陽性[13]。

目前，第四代試劑大大縮短了HIV檢測的窗口期，但同時假陽性率也有所增加，此病例提示在日常的臨床HIV檢測工作中應嚴格按照標準操作規程進行操作，如遇到有疑惑的標本時，應觀察患者標本狀態，核對患者信息，按標準操作規程對標本進行后續處理，在以上環節均無問題時，可通過對患者進行隨訪，對標本進行2次采樣復檢來明確最終結果，以此來減少臨床工作中出現的假陽性，同時該病例也為第四代試劑盒的進一步改進提供了部分臨床參考。