HIV第四代試劑初篩假陽性患者1例分析

劉 杰，張大鵬

1.四川省達(dá)州市達(dá)川區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川達(dá)州 635000;2.重慶醫(yī)科大學(xué)感染性疾病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400010

自1985年我國發(fā)現(xiàn)第1例人類免疫缺陷病毒(HIV)感染者以來，我國的HIV感染者逐年增加，盡早發(fā)現(xiàn)HIV感染者和艾滋病患者，及早提供咨詢、治療對控制疾病的流行尤為重要[1]。對HIV的檢測，1985年美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)使用第一代酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測試劑，第一代試劑主要為病毒裂解物或部分純化的病毒抗原包被反應(yīng)板，由于宿主細(xì)胞成分的污染和雜蛋白的存在，故假陽性較高。1990年第二代試劑出現(xiàn)，主要特征是使用重組或合成多肽抗原，靈敏度和特異度均較第一代試劑有所提高，窗口期平均比第一代試劑縮短20.3 d。1994年開發(fā)出了第三代試劑，相對于第二代試劑檢出HIV抗體的時(shí)間可以提前4～5 d，同時(shí)靈敏度有所提高。1998年出現(xiàn)第四代試劑，第四代試劑則在第三代試劑的基礎(chǔ)上進(jìn)一步增加了p24抗原的檢測,同時(shí)進(jìn)行HIV抗體及p24抗原的檢測，可提高試劑靈敏度，縮短窗口期，減少急性感染者窗口期漏檢，與第三代試劑相比，第四代試劑檢測窗口期平均縮短4～5 d[2]。目前，四川省達(dá)州市達(dá)川區(qū)人民醫(yī)院(以下簡稱本院)檢驗(yàn)科采用第四代HIV初篩試劑時(shí)，發(fā)現(xiàn)1例HIV初篩陽性患者，隨訪發(fā)現(xiàn)第四代試劑復(fù)檢仍為陽性，蛋白質(zhì)免疫印跡(WB)試驗(yàn)確診為陰性。為進(jìn)一步確診，對該患者進(jìn)行HIV-1核酸檢測及外周血CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞比值分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1病例資料 患者，男，68歲，平時(shí)健康狀況欠佳，慢性胃炎10余年，高血壓5年。入院7 d前，患者右側(cè)肢體無力、吐詞不清，于2020年5月27日到本院就診，頭顱MRI示：腦梗死。入院當(dāng)天血紅蛋白(Hb)為134 g/L,血小板計(jì)數(shù)為141×109/L，白細(xì)胞計(jì)數(shù)為4.15×109/L，中性粒細(xì)胞百分比為70.7%,淋巴細(xì)胞百分比為19.8%；肝功能指標(biāo)正常。患者無流行病學(xué)史。入院進(jìn)行常規(guī)輸血前篩查。

1.2試劑與儀器

1.2.1初篩試劑 HIV抗原/抗體初篩試劑A由邁克生物股份有限公司提供(批號：1119071)，HIV抗體初篩試劑B由鄭州安圖生物工程股份有限公司提供(批號：191126),快速診斷HIV抗體初篩試劑C由廈門英科新創(chuàng)科技有限公司提供(批號20191208E2)。

1.2.2檢測儀器 邁克I3000全自動化學(xué)發(fā)光儀，安圖A2000Plus全自動化學(xué)發(fā)光儀，BD Calibur流式細(xì)胞儀。

1.3方法 采用試劑A進(jìn)行初篩試驗(yàn)，根據(jù)《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范(2020年修訂版)》[3]的要求，對初篩有反應(yīng)的標(biāo)本，可再選擇抗原或抗體檢測試劑復(fù)檢，若復(fù)檢兩次結(jié)果均有反應(yīng)或一種有反應(yīng)，一種無反應(yīng)，需進(jìn)行HIV抗體確證試驗(yàn)；結(jié)果均無反應(yīng)，需進(jìn)行HIV-1核酸檢測或2～4周隨訪。結(jié)果均無反應(yīng)的標(biāo)本送往達(dá)州市疾病預(yù)防控制中心(CDC)，進(jìn)行HIV抗體蛋白印跡試驗(yàn)及HIV-1核酸檢測。外周血CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測于本院檢驗(yàn)科開展。

2 結(jié) 果

2.1HIV初篩試驗(yàn)結(jié)果 本院檢驗(yàn)科使用初篩試劑A的S/CO值為477.875(陽性)。選擇兩種HIV抗體檢測試劑(試劑B、試劑C)對標(biāo)本進(jìn)行復(fù)檢，試劑B的S/CO值為0.016，試劑C為陰性，見表1。因HIV抗體檢測試劑B/C均為陰性，對患者進(jìn)行隨訪。

表1 HIV初篩試驗(yàn)結(jié)果

2.2隨訪4周后HIV復(fù)檢結(jié)果 對患者隨訪4周后進(jìn)行復(fù)檢，HIV抗原/抗體初篩試劑A的S/CO值為438.554(陽性)，試劑B的S/CO值為0.016(陰性)，試劑C為陰性。

2.3WB和核酸序列擴(kuò)增試驗(yàn) 采用WB試驗(yàn)檢測HIV抗體，檢測結(jié)果為陰性；核酸序列擴(kuò)增試驗(yàn)檢測HIV-1核酸，檢測結(jié)果為陰性。

2.4流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果 流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血T淋巴細(xì)胞，亞群分類CD4+T細(xì)胞占比為24%，CD8+T細(xì)胞占比為15%，CD4/CD8比值為1.6，該患者CD4/CD8比值在參考范圍內(nèi)(1.5～2.5)，CD3+/CD45+、CD3+CD8+/CD45+、CD3+CD4+/CD45+分別為39%、15%、24%。

3 討 論

自1985年第一代HIV抗體試劑問世以來，至今已經(jīng)發(fā)展到第四代試劑；窗口期由第一代的大約3個(gè)月縮短到第四代的大約2周[4]。 在縮短窗口期的同時(shí)，也使第四代試劑的假陽性率大大增加。

本研究中病例采用邁克生物股份有限公司提供的第四代試劑進(jìn)行初篩，其結(jié)果S/CO值較高，而復(fù)檢采用的鄭州安圖生物工程股份有限公司提供的第三代試劑和廈門英科新創(chuàng)科技有限公司提供的快速診斷第三代試劑檢測結(jié)果均為陰性，檢測結(jié)果相差較大，且S/CO值越高預(yù)示HIV陽性的風(fēng)險(xiǎn)越高[5]。于是隨訪4周后再次進(jìn)行HIV抗體檢測，結(jié)果依舊為陰性。同時(shí)WB試驗(yàn)檢測HIV抗體為陰性，核酸序列擴(kuò)增試驗(yàn)檢測HIV-1核酸結(jié)果為陰性，流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群，CD4/CD8在正常參考范圍內(nèi)，提示在對此病例進(jìn)行HIV篩查時(shí)，第四代試劑出現(xiàn)假陽性。既往研究結(jié)果表明，標(biāo)本溶血、黃疸、乳糜血或血型等因素可導(dǎo)致檢測結(jié)果呈假陽性[6-8]。當(dāng)患者具有某些基礎(chǔ)疾病如惡性腫瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病等，其體內(nèi)可能含有干擾抗體如自身抗體、類風(fēng)濕因子等，這些干擾抗體可與試劑盒中抗原成分產(chǎn)生非特異結(jié)合，從而使檢測結(jié)果產(chǎn)生假陽性[9-10]。另外，一些特殊人群如孕婦、嬰幼兒、老人等體內(nèi)產(chǎn)生的嗜異性抗體也會導(dǎo)致檢測結(jié)果呈假陽性[11-12]。

本研究中病例血清標(biāo)本性狀正常且為全自動儀器檢測，排除標(biāo)本性狀因素及操作人員操作產(chǎn)生的隨機(jī)誤差導(dǎo)致的假陽性因素。本院檢驗(yàn)科采用邁克生物股份有限公司第四代試劑(夾心法)對HIV進(jìn)行初篩。患者年齡較大且長期健康狀況欠佳，有較多的基礎(chǔ)疾病，導(dǎo)致檢測結(jié)果假陽性的可能原因是患者體內(nèi)存在嗜異性抗體，而嗜異性抗體可以與許多動物免疫球蛋白的Fc、Fab和F(ab′)2部位上的表位結(jié)合，模擬被測抗原的免疫活性，同時(shí)結(jié)合試劑盒中的捕獲抗體、標(biāo)記抗體或標(biāo)記抗原等成分干擾試驗(yàn)結(jié)果，造成假陽性[13]。

目前，第四代試劑大大縮短了HIV檢測的窗口期，但同時(shí)假陽性率也有所增加，此病例提示在日常的臨床HIV檢測工作中應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作，如遇到有疑惑的標(biāo)本時(shí)，應(yīng)觀察患者標(biāo)本狀態(tài)，核對患者信息，按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程對標(biāo)本進(jìn)行后續(xù)處理，在以上環(huán)節(jié)均無問題時(shí)，可通過對患者進(jìn)行隨訪，對標(biāo)本進(jìn)行2次采樣復(fù)檢來明確最終結(jié)果，以此來減少臨床工作中出現(xiàn)的假陽性，同時(shí)該病例也為第四代試劑盒的進(jìn)一步改進(jìn)提供了部分臨床參考。