TLR4、VEGF在皮膚黑色素瘤組織中的表達及其與臨床病理特征的關系

王麗娜 朱艷 張麗

(1.漢中市人民醫院皮膚科,陜西 漢中 723000；2.陜西省核工業二一五醫院中西醫結合外科學，陜西 咸陽 712000；3.陜西省核工業二一五醫院皮膚科,陜西 咸陽 712000)

皮膚黑色素瘤(CMM)是一種廣泛浸潤皮膚表皮、皮下組織及其黏膜深層組織的皮膚腫瘤，具有發病率高、惡性程度高、預后差等特點，近年來發病率和病死率呈上升趨勢[1]。研究[2]發現，CMM的發生與遺傳、過度光照、摩擦刺激、個人免疫抑制等因素有關。Toll樣受體4(TLR4)是啟動細胞內炎癥信號傳導的關鍵因子，在免疫調節和全身炎癥反應中發揮著重要作用[3]。有研究[4]指出，血管新生是腫瘤發展的重要病理特征，血管內皮生長因子(VEGF)是一種由正常細胞或腫瘤細胞及其相關間質細胞生成分泌的促血管內皮細胞生長因素，在血管生成中發揮著重要作用。本文主要探討TLR4、VEGF在CMM組織中的表達及其與臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇本院2019年4月至2021年5月收治并行手術治療的88例CMM患者為研究組，其中男48例，女40例；年齡(47.55±8.31)歲；Clark分級：I級19例，Ⅱ級13例，Ⅲ級10例，Ⅳ級26例，V級20例。另選擇同期收治的行手術治療的71例皮內痣患者為對照組。對照組中男46例，女42例；年齡(47.94±8.25)歲。納入患者臨床及病理資料均完整；均經組織病理學確診為CMM；入院前未接受任何治療。已排除合并其他惡性腫瘤者；除皮膚外其他部位有黑色素瘤者；肝腎功能不全、風濕免疫性疾病、嚴重感染性疾病患者。兩組臨床資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。患者及家屬均知情同意。

1.2方法 兔抗人TLR4多克隆抗體(北京博奧森生物技術有限公司)、兔抗人VEGF單克隆抗體(北京博奧森生物技術有限公司)，免疫組織化學染色試劑盒、光學顯微鏡、DAB顯色液等均由實驗室提供。將病理蠟塊按照常規連續切片，切片厚3μm，均按照試劑盒說明書進行TLR4、VEGF免疫組化染色。

1.3結果判斷 染色判讀：TLR4陽性為細胞質或胞膜著色呈棕黃色，VEGF細胞質胞漿或細胞膜內出現均勻棕黃色顆粒為陽性。細胞免疫組化結果均由兩位病理科醫師在雙盲條件下進行獨立判斷，每張切片隨機選取5個高倍視野(×200)，每個視野分別記錄50個腫瘤細胞的染色強度與染色密度，采用半定量計數法判定染色結果，染色強度：無色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；染色密度：著色細胞比例≤5%0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分。兩者記分相乘，≤3分為陰性表達，>3分為陽性表達。

2 結 果

2.1陽性表達 TLR4、VEGF在CMM組織中的陽性表達明顯高于皮內痣(P<0.05)。見表1。

表1 TLR4、VEGF在CMM和皮內痣組織中的陽性表達

2.2臨床病理特征的關系 不同Clark分級、淋巴結轉移的CMM患者TLR4、VEGF陽性表達比較有差異(χ2=19.471、4.718，P<0.05)。見表2。

表2 TLR4、VEGF表達與CMM臨床病理特征的關系

2.3相關性分析Spearman相關性分析結果顯示，VEGF表達陽性和TLR4計數同樣呈正相關。見表3。

表3 CMM組織TLR4與VEGF的相關性

3 討 論

既往研究[5]指出，CMM發病機制較為復雜，多與遺傳、環境、免疫缺陷等因素有關，容易造成某一細胞基因水平生長調控失常，使細胞增殖與凋亡出現異常，進而出現癌變。腫瘤細胞的免疫活性可識別腫瘤逃避集體免疫系統，在腫瘤發展過程中發揮著重要作用。研究[6]顯示，腫瘤細胞上表達的TLRs的激活對抑制免疫細胞的抗腫瘤作用具有重要作用，同時其能夠通過介導炎癥因子和細胞因子，提高炎癥反應，造成腫瘤微環境中的免疫細胞聚集，進一步釋放更多的促血管生長因子和細胞生長，加重腫瘤嚴重程度。TLR4是參與炎癥和感染調控過程中的細胞表面受體，高TLR4水平與細胞的增殖和高蛋白合成存在密切關聯[7]。研究[8]發現，TLR4可通過My888進一步激活ERK1/2入核調節核轉錄蛋白活性，進而促進成纖維細胞的生長和膠原沉積。有研究指出[9]，慢性炎癥會增加腫瘤發生和發展的概率，而TLR4在炎癥反應中，發揮著啟動適應性免疫反應的重要作用，不僅在免疫細胞上有表達，在腫瘤細胞上同樣有表達。細胞因子和生長因子是參與CMM發病、發展中的重要因子，痔細胞可通過產生生長因子和趨化因子，進而上調生長因子VEGF表達，進而引發CMM細胞浸潤和轉移[10]。胡燕燕等[11]研究發現，血管新生在CMM垂直生長期的轉移侵襲活動中發揮著重要作用，而VEGF是調節病理性和生理性血管新生的重要信號通路因子，血管新生腫瘤良好血供的解剖學基礎，因此VEGF在腫瘤發生發展中發揮著重要作用。

本文結果顯，TLR4、VEGF在CMM組織中的陽性表達明顯高于皮內痣，提示相較于正常皮膚組織，CMM組織中TLR4、VEGF陽性表達呈現高水平。此外不同Clark分級、淋巴結轉移的CMM患者TLR4、VEGF陽性表達比較有差異，提示TLR4、VEGF在CMM腫瘤的侵襲和轉移中發揮著重要作用。研究[12]顯示，CMM的侵襲和轉移是多因素的復雜過程，其中TLR家族和VEGF家族中的細胞因子和蛋白高表達在腫瘤轉移中發揮著重要作用。同時VEGF表達陽性和TLR4計數同樣呈正相關，推測原因可能是腫瘤微環境中的VEGF可通過下調TLR4的表達進而負向調控腫瘤細胞的免疫功能。