陰道菌群對(duì)不同級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變的影響

吳雪燕 張梅 王星星 焦薇△

(1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550001，2.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550004)

宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)是與宮頸癌(CC)密切相關(guān)的一組病變。目前國(guó)際公認(rèn)高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)的持續(xù)感染是CIN或CC發(fā)生的必要條件[1-2]。從HPV感染到發(fā)展為CIN及癌變大概需要5～10年，目前認(rèn)為陰道微環(huán)境在宮頸HPV感染、宮頸上皮內(nèi)瘤變的發(fā)生、發(fā)展存在過(guò)程中發(fā)揮作用[3-4]。本文主要探討陰道菌群的改變與不同級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年7月至2020年1月就診于貴州醫(yī)科大學(xué)婦科門診的高危型HPV感染患者，以陰道鏡下活檢病理結(jié)果為依據(jù)分為三組，其中正常組25例，年齡24～55歲，平均(35.88±8.20)歲，低級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變組11例，年齡21～42歲，平均(33.18±6.66)歲，高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變組29例，年齡28～50歲，平均(39.17±6.09)歲。納入患者均為年齡18～55歲的已婚女性，月經(jīng)周期規(guī)律，1個(gè)月內(nèi)無(wú)陰道用藥史、全身使用使用抗生素史；1周內(nèi)無(wú)陰道不規(guī)則流血史；3 d內(nèi)無(wú)性生活史。已排除妊娠期、哺乳期、月經(jīng)期、絕經(jīng)期婦女；陰道炎患者；有宮頸病變治療史婦女；宮內(nèi)節(jié)育器置入術(shù)后患者；長(zhǎng)期使用皮質(zhì)類固醇激素、免疫抑制劑婦女；糖尿病、心、肝、腎等內(nèi)科疾病患者。各組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 標(biāo)本采集前告知研究對(duì)象本實(shí)驗(yàn)研究方案及意義，獲其同意后，采集陰道分泌物，30 min內(nèi)保存至-80℃冰箱中。通過(guò)16S rDNA測(cè)序技術(shù)進(jìn)行細(xì)菌DNA的提取、擴(kuò)增、測(cè)序：采用提取試劑盒 QIAamp DNA Mini Kit對(duì)陰道分泌物進(jìn)行細(xì)菌基因組DNA提取。繼而進(jìn)行PCR擴(kuò)增：試劑盒中提供P1、P3、P5、P6 四對(duì)擴(kuò)增引物，按照P1+P5、P3+P6引物對(duì)組合配置PCR反應(yīng)體系。最后參照Illumina Miseq 默認(rèn)流程進(jìn)行上機(jī)操作、參數(shù)設(shè)置步驟，完成每個(gè)樣本測(cè)定20萬(wàn)對(duì)以上序列的數(shù)據(jù)。

1.3觀察指標(biāo) 陰道菌群多樣性是指某一菌群中所有細(xì)菌種類的多少，是評(píng)價(jià)陰道微環(huán)境的一個(gè)重要指標(biāo)。優(yōu)勢(shì)菌群是指菌群中生物量或種群密集度最大的細(xì)菌，在很大程度上影響著整個(gè)菌群的功能且其對(duì)宿主的生理病理影響最大。對(duì)三組菌群多樣性及優(yōu)勢(shì)菌群進(jìn)行對(duì)比分析。

2 結(jié) 果

2.1菌群多樣性分析 微生物群落結(jié)構(gòu)是按照界、門、綱、目、科、屬、種水平逐級(jí)分層，本實(shí)驗(yàn)共檢出26種菌種，隨著宮頸病變的發(fā)生發(fā)展，在菌種水平各組間陰道菌群多樣性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。分別在菌屬和菌門水平再次進(jìn)行菌群多樣性比較，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。

表1 不同組別陰道菌群多樣性的比較

2.2優(yōu)勢(shì)菌群分析 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果前三位陰道優(yōu)勢(shì)菌為惰性乳桿菌、卷曲乳桿菌、阿托波氏菌，惰性乳桿菌在三組中檢出率高達(dá)46.15%(30/65)。各組優(yōu)勢(shì)菌群之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見(jiàn)表2。各優(yōu)勢(shì)菌群在每組中的構(gòu)成比詳見(jiàn)表1。

表2 不同組優(yōu)勢(shì)菌群在每組中的構(gòu)成比的比較[n(%)]

3 討 論

陰道微生物在HPV感染的持續(xù)或消退中起到重要作用[3,5-6]，但在宮頸上皮內(nèi)瘤變的女性中陰道微環(huán)境作用的研究相對(duì)較少。我們分別在菌種水平、菌屬水平以及菌門水平分析不同級(jí)別宮頸病變患者陰道菌群多樣性之間的差異，結(jié)果均提示無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C.J.Piyathilake等[7]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)隨著宮頸病變分級(jí)升高，陰道菌群的多樣性并無(wú)增加。通過(guò)本次研究我們發(fā)現(xiàn)隨著宮頸病變嚴(yán)重程度的增加，以卷曲乳桿菌為優(yōu)勢(shì)菌群的占比明顯減少，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。惰性乳桿菌在各組中的占比呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，從我們的數(shù)據(jù)分析各組優(yōu)勢(shì)菌群之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這一結(jié)果與A.Mitra等[8]研究一致。我們推測(cè)高危型HPV感染患者，陰道菌群以惰性乳桿菌為主，且隨著宮頸病變的發(fā)展，惰性乳桿菌的占比逐漸升高；盡管在樣本量不大的情況下分析結(jié)果沒(méi)有顯著性差異，但我們考慮卷曲乳桿菌為主的陰道菌群的減少與疾病嚴(yán)重程度增加之間可能存在相關(guān)性。下一步需擴(kuò)大樣本量，進(jìn)一步分析優(yōu)勢(shì)菌群與宮頸病變的關(guān)系。