靈芝孢子粉中水分、重金屬及微生物含量分析

張 洋，黃 芳，韋雪飛，羊超菠

（磐安縣食品藥品檢驗檢測中心，浙江金華 322300）

隨著生活水平的不斷提高，人們對健康長壽和高品質生活的追求進一步提升，養生保健日益受到人們的青睞，而以靈芝孢子粉為代表的保健食品，在國內悄然興起，因富含氨基酸類、多糖類、有機酸類、三萜類及微量元素等成分而具有諸多有益的藥理活性，受到人們的廣泛關注[1-2]。分析靈芝孢子粉的生產流程發現，影響其質量安全因素較多。例如，生長環境、加工過程可能會引起重金屬的富集；包裝密封性差引起水分超標，使孢子粉霉變、微生物超標等，若被人們服用，會對其健康造成適得其反的影響。基于這一考慮，本文根據現有標準[3-4]，從水分、重金屬、微生物3 方面進行檢測與評估，以期為靈芝孢子粉后續研發、生產提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑和儀器

從市場共收集22 批次靈芝孢子粉（編號1 ～22）。

培養基，北京陸橋；硝酸（GR）；超純水；25種元素混標（BEIJING-4）；汞標準溶液（國家標準樣品）；氯化鈉（AR）。

電熱鼓風干燥箱，上海市森信實驗儀器公司；微波消解儀MARS6，美國CEM 公司；電熱板；電感耦合等離子體質譜儀ICAPRQ，賽默飛世爾；電子天平，梅特勒-托利多公司；霉菌培養箱；生化培養箱；高純氬氣及氦氣。

1.2 實驗方法

1.2.1 水分的測定方法

依據《食品安全國家標準 食品中水分的測定》（GB 5009.3—2016）中的直接干燥法測定。稱取2.0 g試樣（精確至0.000 1 g）平鋪于干燥至恒重的鋁制扁形稱量瓶中，試樣厚度不超過5 mm，置于104 ℃干燥箱中，瓶蓋斜支于瓶邊，干燥4 h 后，蓋好取出，放入干燥器內冷卻0.5 h 后稱量。然后再放入104 ℃干燥箱中干燥1 h 左右，取出，放入干燥器內冷卻0.5 h 后再稱量。重復以上操作至前后兩次質量差不超過2 mg，根據減失的重量，計算試樣中的含水量（%）。

1.2.2 重金屬的含量測定方法

依據《食品安全國家標準 食品中多元素的測定》（GB 5009.268—2016）中的第一法 電感耦合等離子體質譜法測定。

（1）樣品預處理。①在采樣和制備過程中，所有玻璃器皿及消化罐均以20%硝酸浸泡24 h 以上，用水反復清洗，最后用超純水沖洗干凈，自然晾干。②精密稱取試樣0.5 g（精確至0.000 1 g），將試樣置于微波消解內罐中，加入5 mL 硝酸，加蓋放置過夜，旋緊罐蓋，按照微波消解儀標準操作步驟進行消解。冷卻后取出，緩慢打開罐蓋排氣，用少量水沖洗內蓋，將消解罐放在控溫電熱板上，于100 ℃加熱30 min，將消解液移至25 mL 容量瓶中，用超純水沖洗消解罐內壁3 次以上，用水定容刻度，搖勻，待測，同時做空白試驗。

（2）標準品溶液的制備。①混合標準工作溶液（鉛、鎘、汞、砷、鎳和鉻）：吸取適量單元素標準貯備液或多元素混合標準貯備液，用硝酸溶液（5+95）逐級稀釋配成混合標準工作溶液系列，各元素質量濃度見表1。②汞標準工作溶液：取適量汞貯備液，用汞標準穩定劑逐級稀釋配成標準工作溶液系列，濃度范圍見表1。③內標使用液：取適量內標多元素標準貯備液（鈧、鍺、銠、銦、錸和鉍），用硝酸溶液（5+95）配制成50 ng/mL 的內標使用液。

表1 混合標準溶液中各元素濃度（單位：ng/mL）

1.2.3 微生物含量的測定方法

依據《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定》（GB 4789.2—2016）、《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數》（GB 4789.3—2016）、《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 霉菌和酵母計數》（GB 4789.15—2016）、《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》（GB 4789.4—2016）、《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗》（GB 4789.10—2016）規定方法，分別對靈芝孢子粉中的菌落總數、大腸菌群、霉菌和酵母菌總數、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌進行計數或定性檢測[5]。

2 結果與分析

2.1 水分測定結果

22批靈芝孢子粉的含水率測定結果如表2所示。

表2 22 批靈芝孢子粉的含水率

根據《浙江省中藥飲片炮制規范》2015 年版規定破壁靈芝孢子粉的水分不得超過9%，結合該標準觀察表2 數據，可發現從市場上購買的22 批靈芝孢子粉中，含水率最高的是第21 批次（9.97%），最低的是第18 批次（2.93%），本次購買的靈芝孢子粉中只有1 批樣品水分略超過規范規定的標準，整體樣品水分合格率為95.45%，水分平均值為5.48%。靈芝孢子粉中的水分可由生產過程中烘干工藝、包裝密封性等因素產生較大差異，而水分含量過高有可能引起靈芝孢子粉的霉變，進而對人體健康造成影響，因此要重視靈芝孢子粉的水分監測，確保其質量穩定。

2.2 重金屬鉛、鎘、汞、砷、鎳和鉻的測定結果

2.2.1 標準曲線的建立

鉛、鎘、汞、砷、鎳和鉻含量的回歸方程見表3。

表3 鉛、鎘、汞、砷、鎳和鉻元素標準曲線的建立

由表3 可知，鉛、鎘、汞、砷、鎳和鉻各元素的回歸方程均為一元一次方程，標準曲線相關系數均大于0.99，說明在靈芝孢子粉鉛、鎘、汞、砷、鎳和鉻檢測中所選定的標準系列濃度范圍內，各元素線性關系較好[6]。

2.2.2 樣品的測定22 批樣品重金屬含量測定結果如表4 所示。

表4 22 批樣品重金屬含量測定（單位：mg/kg）

根據《浙江省中藥飲規范片炮制》2015年版和《破壁靈芝孢子粉》（T/ZZB 0474—2018），靈芝孢子粉鉛、砷、鎘和汞規定為鉛含量≤2.0 mg/kg，砷含量≤1.0 mg/kg，鎘含量≤0.5 mg/kg，汞含量≤0.1 mg/kg，鎳含量≤1.0 mg/kg，鉻含量≤2.0 mg/kg。由表4 可知，鉛、鎘、汞和砷元素含量均為合格，但鎳元素含量有5 批不合格，最高含量為5.52 mg/kg，鉻元素含量有6 批不合格，最高含量為40.8 mg/kg，遠超標準限定值。22 批樣品中第19 批次的鎳元素含量為0.923 mg/kg，亦非常接近標準限定值，鎳、鉻超標批次近乎相同。靈芝種植區普遍沒有對土壤和水定期監測，而靈芝對于重金屬以及農藥殘留具有較強的富集作用，再加之許多市面上靈芝孢子粉采用機械法加工，金屬材料制成的撞擊研磨部件，與高速運動的靈芝孢子原料發生激烈的長時間碰撞，很可能將碰撞過程中產生的微細金屬粉混入靈芝孢子粉中，從而使靈芝孢子產品遭受鎳和鉻等重金屬的嚴重污染[7-8]。如果鎳和鉻過度超標，將會對人體造成不可估量的影響。因此，改善加工工藝，加強對靈芝孢子粉的重金屬監測，十分重要。

2.3 微生物限量測定

在本次22 批樣品中抽取8 批次樣品（含水分含量超標的第21 批次樣品）進行微生物檢測，結果如表5 所示。

表5 樣品中微生物限量測定

根據《食品安全國家標準 保健食品》（GB 16740—2014）和《破壁靈芝孢子粉》（T/ZZB 0474—2018）規定，菌落總數≤10 000 CFU/g，大腸菌群≤0.92 MPN/g，霉菌和酵母菌總數≤50 CFU/g，金黃色葡萄球菌和沙門氏菌≤0/25 g。由表5 可知，8 批樣品的菌落總數、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌限量測定均合格，但存在部分樣品中大腸菌群、霉菌和酵母菌總數超標的情況，合格率分別都為50%。

查閱資料，周蓮娟等[9]分析了市售靈芝產品的衛生狀況，結果發現有部分樣品存在霉菌、酵母菌和大腸菌群超標的情況。2018 年，國家市場監管總局公布抽檢的靈芝孢子粉顆粒，其菌落總數不符合食品安全國家標準規定。分析原因，靈芝孢子粉作為農副產品，自然也是微生物容易繁殖的棲息地。由于靈芝孢子粉多以套紙筒方式收集，且采用機械法中的碾壓法或擠壓法破壁。因此，靈芝孢子粉在包裝之前的滅菌是否徹底也會影響其微生物是否超標。另外，除了需注意生產過程中的收集、破壁、包裝等加工環節，還要重視的是市場部分靈芝孢子粉包裝簡陋，主要表現為大容量的塑料散裝瓶裝，無法一次性食用完。而消費者在日后食用中頻繁開啟，保存不當，也極易造成微生物含量的超標。因此，企業應規范生產過程，優化預包裝，消費者應注意保存得當，市場應加強靈芝孢子粉微生物監測。

3 結論

在靈芝孢子粉水分、重金屬、微生物的檢驗檢測中，發現靈芝孢子粉的水分合格率為95.45%；重金屬元素鉛、鎘、汞和砷元素含量均為合格，部分樣品鎳和鉻超標；微生物檢測中，部分樣品大腸菌群、霉菌和酵母菌總數超標。考慮到靈芝孢子粉一般直接食用，應引起足夠重視。企業要加強優化工藝流程，規范生產過程，傳統加工方法雖操作簡便，破壁率高，但易引起部分重金屬含量及微生物的超標，因此企業應創新破壁技術，加強生產流程中的滅菌工藝，包括包裝環節，采取有效的包裝手段，選擇合適的儲存條件，避免微生物或真菌繁殖。而市場監管部門應加強監管手段，增加對靈芝孢子粉產品的風險監測以及監督抽檢的頻次，技術部門應加強科研成果轉化，助力靈芝孢子粉產品品質提升。