UPLC-MS/MS 同時測定飲料中5 種甜味劑

楊 穎

（建德市食品藥品檢驗檢測中心，浙江杭州 311600）

甜味劑是重要的食品添加劑，主要用于增加或改善食品甜味感、提升品質[1]。《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》（GB 2760—2014）對飲料中添加合成甜味劑的限量和使用范圍作出明確規(guī)定[2]。而現行有效檢測方法包括《飲料中乙酰磺胺酸鉀的測定》（GB/T 5009.140—2003）、《食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》（GB 5009.28—2016）、《食品安全國家標準 食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定》（GB 5009.97—2016）、《食品安全國家標準 食品中阿斯巴甜和阿力甜的測定》（GB 5009.263—2016）這4 種方法，其中樣品凈化、目標物提取、儀器測定條件和流動相設置等各不相同，同時測定以上項目需要檢測人員多、工作時間長，效率低[3]。質譜檢測因其低檢出限、高靈敏度與強抗干擾能力，成為當前檢測的首選。為減少實驗成本、提高工作效率，建立超高壓液相色譜-串聯質譜法（Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，UPLC-MS/MS）檢測方法顯得十分必要。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

飲料均購自本地超市。

甲醇、乙腈（HPLC 級，默克公司）；甲酸（HPLC級，CNW TECHNOLOGIES）；阿斯巴甜（97.4%，壇墨質檢），阿力甜（98.8%，壇墨質檢），糖精鈉（1 000 μg/mL，壇墨質檢）；甜蜜素（1 000 μg/mL，壇墨質檢）；三氯蔗糖（99.6%，壇墨質檢），安賽蜜（1 000 μg/mL，壇墨質檢），純水由Millipore 超純水儀制備。

電子天平（BT125D，賽多利斯儀器有限公司）；超高效液相色譜-串聯質譜聯用儀（TQ-S misco、Waters）；超聲儀（KQ=500 型，昆山市超聲儀器有限公司）；旋渦混合器（WH-861，華利達）。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準中間液溶液

分別取單標100 μL 于10 mL 容量瓶中，用1 ∶1甲醇水溶解并定容，得到質量濃度10 mg/L 的混合標準儲備液。再取10 mg/L 混合標準儲備液1 mL 稀釋至10 mL，得到1 mg/L 中間液。

1.2.2 標準工作溶液

移取中間液用水稀釋，得到0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L、0.200 mg/L、0.400 mg/L、0.800 mg/L 和1.000 mg/L 系列標曲，現配現用。

1.2.3 樣品處理

參考標準SN/T 3538—2013，取2 g 超聲脫氣后的樣品于100 mL 容量瓶中，用水稀釋定容至刻度，過0.22 μm 濾膜后供UPLC-MS/MS 分析[4]。

1.2.4 儀器條件

（1）UPLC 條件。UPLC 系統：ACQUITY UPLC I-CLASS；色譜柱：ACQUITY UPLC HSS T3（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；柱溫：35 ℃；進樣量：5 μL；流動相A：0.1%甲酸水溶液；流動相B：0.1%甲酸乙腈溶液；流速：0.3 mL/min[5]。洗脫梯度程序見表1。

表1 流動相洗脫梯度表

（2）質譜條件。電離模式：ESI-；毛細管電壓：-2.5 kV；脫溶劑溫度：550 ℃；檢測方式：MRM；源氣體流量：溶媒揮散氣體流速為1 000 L/Hr，進樣錐氣體流速為50 L/Hr。

2 結果與分析

2.1 質譜條件的優(yōu)化

手動調諧優(yōu)化錐孔電壓和碰撞能量的質譜條件見表2。

表2 5 種甜味劑質譜檢測條件

2.2 定量限和線性關系

實驗得到5 種甜味劑標準曲線的線性回歸方程、相關系數R2及方法定量限（以信噪比S/N≥10 計算），結果見表3。

表3 方法線性回歸方程、線性范圍及檢出限

2.3 精密度和回收率的測定

空白樣品加標（低、中、高3 個不同濃度，每個濃度下進行6 次平行試驗），計算結果見表4，阿斯巴甜、阿力甜、糖精鈉、甜蜜素和安賽蜜的加標回收率為82.6%～107.0%，相對標準偏差為0.32% ～ 4.56%。

表4 加標回收率和精密度（n=6）

2.4 實際樣品測定

采用建立的方法，對市場上銷售的10 種飲料進行檢測，5 種人工合成甜味劑均未檢出。

3 結論

超高效液相色譜-串聯質譜法測定飲料中5 種人工合成甜味劑，操作快捷方便，其線性、定量限、回收率及精密度指標均能夠滿足日常食品檢測的監(jiān)管需要。