水產(chǎn)品中常用麻醉劑及其檢測(cè)方法的研究進(jìn)展

張博文，李雪銀，江改青，黃孟麗

（南京市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)院，江蘇南京 211198）

隨著人們收入的不斷增長(zhǎng)和健康意識(shí)的不斷提高，越來(lái)越多的消費(fèi)者食用含有豐富蛋白的水產(chǎn)品，水產(chǎn)業(yè)在農(nóng)業(yè)發(fā)展中的作用和地位日益突出。水產(chǎn)品富含人體所需的多種必需氨基酸，為人類(lèi)貢獻(xiàn)了1/3的優(yōu)質(zhì)蛋白來(lái)源，在人類(lèi)膳食平衡中具有重要地位[1]。隨著消費(fèi)者對(duì)膳食平衡的重視，水產(chǎn)品交易量隨消費(fèi)需求的增加呈現(xiàn)逐年增長(zhǎng)的趨勢(shì)[2]。

水產(chǎn)品種類(lèi)繁多，產(chǎn)量大，造成生產(chǎn)過(guò)程和市場(chǎng)流通的管理難度大。近幾年，水產(chǎn)品質(zhì)量安全問(wèn)題頻發(fā)，引起社會(huì)的廣泛關(guān)注[3]。由于國(guó)家近些年重點(diǎn)打擊水產(chǎn)品養(yǎng)殖過(guò)程中違法使用違禁藥物的行為，水產(chǎn)制品例行檢測(cè)率有所提高，水產(chǎn)品安全質(zhì)量總體向好，但經(jīng)營(yíng)環(huán)節(jié)的水產(chǎn)品合格率為89.1%，與水產(chǎn)制品監(jiān)督合格率98.1%相比仍存在較大差異[4-6]。根據(jù)檢測(cè)數(shù)據(jù)，水產(chǎn)品在流通環(huán)節(jié)比生產(chǎn)環(huán)節(jié)不合格率更高，表明運(yùn)輸環(huán)節(jié)可能添加違禁物質(zhì)或超標(biāo)添加非食用物質(zhì)[7]。在水產(chǎn)品檢測(cè)方面，國(guó)內(nèi)對(duì)水產(chǎn)品中重金屬類(lèi)、農(nóng)藥類(lèi)、持久性有機(jī)污染物有一定的研究，但對(duì)水產(chǎn)品中麻醉劑的檢測(cè)還處于初始研究階段，對(duì)麻醉劑的過(guò)度使用的危害還停留在研究階段[8]。

本文綜述了國(guó)內(nèi)外水產(chǎn)品中麻醉劑的使用現(xiàn)狀、危害性、檢測(cè)技術(shù)等，展望了未來(lái)水產(chǎn)品中麻醉劑的使用發(fā)展趨勢(shì)，為麻醉劑在水產(chǎn)運(yùn)輸?shù)暮侠硎褂锰峁├碚撘罁?jù)，為我國(guó)監(jiān)管部門(mén)對(duì)水產(chǎn)品中麻醉劑的監(jiān)測(cè)提供參考依據(jù)。

1 水產(chǎn)品中常用麻醉劑及其危害

很多水產(chǎn)品在運(yùn)輸中由于缺氧或不適應(yīng)環(huán)境而死亡，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[9]。運(yùn)輸中使用麻醉劑可降低水產(chǎn)品的耗氧和氨排放，從而提高水產(chǎn)品運(yùn)輸途中的存活率，查閱相應(yīng)的資料，結(jié)合國(guó)內(nèi)外麻醉劑的使用數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)丁香酚類(lèi)物質(zhì)、間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽（MS-222）、苯佐卡因、CO2、2-苯氧乙醇、鹽酸普魯卡因、利多卡因、布比卡因、丁卡因、美托咪酯和喹哪啶等麻醉劑能用于水產(chǎn)品運(yùn)輸。目前，常用于水產(chǎn)品運(yùn)輸?shù)穆樽韯┲饕獮槎∠惴宇?lèi)化合物[10]和MS-222[11]。

1.1 丁香酚類(lèi)麻醉劑使用現(xiàn)狀及其危害

丁香酚類(lèi)化合物作為麻醉劑，由于其價(jià)格低廉、麻醉效果好、復(fù)蘇時(shí)間短，被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)品的運(yùn)輸和保鮮中，丁香酚的最佳麻醉濃度為40 mg/L，MS-222 的最佳麻醉濃度為135 mg/L，麻醉時(shí)間分別為2.55 min 和2.58 min；MS-222 和丁香酚對(duì)暗紋東方鲀幼魚(yú)對(duì)應(yīng)的有效質(zhì)量濃度分別為120 ～140 mg/L與60 ～70 mg/L，數(shù)據(jù)顯示要達(dá)到相同的麻醉效果，丁香酚類(lèi)化合物用量更少[12-13]。丁香酚類(lèi)麻醉劑主要分為6 種，包括丁香酚、異丁香酚、甲基丁香酚、乙酸丁香酚酯、甲基異丁香酚和乙酰基異丁香酚[14]。目前，市場(chǎng)上水產(chǎn)品中丁香酚類(lèi)物質(zhì)的檢出率較高，特別是農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，丁香酚的檢出率高達(dá)76.9%；網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)抽檢的水產(chǎn)品中丁香酚的檢出率達(dá)到23.8%，丁香酚在水產(chǎn)品中的高檢出率引起了監(jiān)管部門(mén)的高度重視[14]。

丁香酚的安全性并沒(méi)有被普遍接受，針對(duì)丁香油麻醉劑的使用管理，各國(guó)仍存在較大的爭(zhēng)議[15]。研究表明，丁香酚會(huì)導(dǎo)致小鼠肝臟內(nèi)癌細(xì)胞的發(fā)生率增高，國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（International Agency for Research on Cancer，IARC）將其列為Ⅲ類(lèi)致癌物質(zhì)[16]。歐洲食品安全局（European Food Safety Authority，EFSA）認(rèn)為丁香酚對(duì)皮膚和眼睛具有刺激作用，并且皮膚接觸后會(huì)產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)[17]。目前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丁香酚類(lèi)麻醉劑中異丁香酚會(huì)導(dǎo)致大鼠的鼻腔、小鼠的胃腺、前胃、鼻腔和腎臟發(fā)生非腫瘤性病變損傷，但也有文獻(xiàn)表明丁香酚可快速代謝，從體內(nèi)排泄出去，因此關(guān)于丁香酚的使用管理仍存在一定爭(zhēng)議[11,18]。

1.2 麻醉劑MS-222 使用現(xiàn)狀及其危害

MS-222 易溶于水、易降解，安全性高[19]。MS-222 作為當(dāng)前唯一一種合法麻醉劑流通于加拿大、美國(guó)市場(chǎng)，但MS-222 要達(dá)到相同的麻醉效果，其使用量比丁香酚類(lèi)麻醉劑多，價(jià)格也更高。我國(guó)對(duì)MS-222 的研究使用開(kāi)發(fā)較晚，目前我國(guó)水產(chǎn)品市場(chǎng)仍普遍采用丁香酚類(lèi)化合物為麻醉劑[19]。

1.3 其他麻醉劑使用現(xiàn)狀及其危害

苯氧乙醇也是一種麻醉劑，常用于獸醫(yī)治療和外科方面，由于其麻醉起效快、復(fù)蘇時(shí)間短，常用于魚(yú)類(lèi)麻醉研究。2-苯氧乙醇價(jià)格低，具有殺菌作用，但其復(fù)蘇時(shí)間長(zhǎng)于MS-222 和丁香酚類(lèi)麻醉劑[20]。苯佐卡因（氨基苯甲酸乙酯）是一種鎮(zhèn)靜藥物，苯佐卡因與MS-222 均為對(duì)氨基苯甲酸的衍生物,均被挪威批準(zhǔn)在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中進(jìn)行商業(yè)運(yùn)用[21-22]。使用苯佐卡因作為麻醉劑可能導(dǎo)致水產(chǎn)品死亡，苯佐卡因可能會(huì)引起高鐵血紅蛋白血癥的嚴(yán)重不良反應(yīng)[23-24]。喹哪啶在魚(yú)用麻醉劑中價(jià)格相對(duì)低廉，可輔助各種活魚(yú)運(yùn)輸，在國(guó)外已有廣泛的應(yīng)用，我國(guó)對(duì)于喹哪啶和苯佐卡因用于水產(chǎn)品的運(yùn)輸還處于研究階段[20]。

乙醚作用過(guò)于劇烈，導(dǎo)致水產(chǎn)品存活率較低。CO2麻醉對(duì)水產(chǎn)品無(wú)毒害作用，但在水產(chǎn)品局部組織中積累過(guò)多，將導(dǎo)致水產(chǎn)品麻醉過(guò)度，也可能導(dǎo)致水產(chǎn)品死亡[15]。此外，CO2麻醉復(fù)蘇時(shí)間較長(zhǎng)，麻醉對(duì)象較局限，僅適用于部分水產(chǎn)品。非化學(xué)麻醉劑操作煩瑣、復(fù)蘇時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)水產(chǎn)品有一定的負(fù)面影響，如過(guò)低的溫度運(yùn)輸會(huì)導(dǎo)致水產(chǎn)品死亡[21]。因此，非化學(xué)麻醉劑用于水產(chǎn)品的運(yùn)輸受到一定的限制。

2 麻醉劑的檢測(cè)方法

2.1 丁香酚類(lèi)麻醉劑檢驗(yàn)方法

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)麻醉劑的安全性、反復(fù)麻醉對(duì)水產(chǎn)品的危害、麻醉劑殘留對(duì)人體健康的影響等研究較少，建立準(zhǔn)確的麻醉劑檢驗(yàn)方法可為水產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)管提供技術(shù)支持。我國(guó)對(duì)丁香酚類(lèi)麻醉劑的檢測(cè)常使用氣相質(zhì)譜法，市場(chǎng)監(jiān)管總局頒布了《水產(chǎn)品及水中丁香酚類(lèi)化合物的測(cè)定》（BJS 201908）補(bǔ)充檢驗(yàn)方法[8,25-34]。如表1 所示，目前我國(guó)關(guān)于丁香酚類(lèi)化合物的檢測(cè)方法較為全面，也有文獻(xiàn)對(duì)比，采用乙腈為提取溶劑，丁香酚回收率較高[29，31]。丁香酚化合物的凈化方法主要有固相萃取法、分散固相萃取法、QuEChERS 法，QuEChERS 法對(duì)環(huán)境污染較小，具有經(jīng)濟(jì)、高效、簡(jiǎn)便和快速等優(yōu)點(diǎn)，近幾年發(fā)展較快。QuEChERS 與傳統(tǒng)提取方法相比具有回收率高、穩(wěn)定性好、能檢測(cè)含有水分的樣品、樣品通量高、溶劑使用量少、操作簡(jiǎn)單、不污染環(huán)境以及分析成本低等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域的檢測(cè)，目前QuEChERS 法已成為檢驗(yàn)水產(chǎn)中丁香酚含量的一種新興方法[35]。丁香酚化合物的檢測(cè)儀器方法主要有高效液相色譜-紫外法（High Performance Liquid Chromatography-Ultraviolet Spectrometry，HPLC-UV）、超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，UPLC-MS/MS）、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜 法（Gas Chromatography-Mass Spectrometer，GCMS/MS）、氣相色譜質(zhì)譜法（Gas Chromatography-Mass Spectrometer，GC-MS）和 氣 相 色 譜- 離 子阱串聯(lián)質(zhì)譜法（Gas Chromatography-Ion Trap Mass Spectrometry，GC-IT-MS/MS），其中GC-MS 外標(biāo)法和其他方法相比，成本低、操作簡(jiǎn)單。

表1 文獻(xiàn)中關(guān)于丁香酚類(lèi)麻醉劑檢驗(yàn)方法分析

2.2 其他麻醉劑檢驗(yàn)方法

MS-222 的主要檢測(cè)方法有高效液相色譜串聯(lián)質(zhì) 譜 法（High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，HPLC-MS/MS） 和GC-MS 法。儲(chǔ)成群等[36]通過(guò)QuEChERS 前處理方法并采用HPLC-MS/MS 技術(shù)能定量黃顙魚(yú)/桂花魚(yú)中MS-222 的含量。劉海新等[37]通過(guò)GC-MS 內(nèi)標(biāo)法準(zhǔn)確定量魚(yú)肉中MS-222 的含量。GC-MS 法成本低、準(zhǔn)確率高，GC-MS 法相比HPLC-UV 定性和定量準(zhǔn)確度有顯著提高[38]。

對(duì)于水產(chǎn)品中2-苯氧乙醇的測(cè)定方法較少，外文文獻(xiàn)中有報(bào)道，KLIMáNKOVá 等[39]用SPMEGC-MS/MS 檢測(cè)出魚(yú)肉組織和魚(yú)血漿組織中2-苯氧乙醇的含量。目前，通過(guò)高效液相色譜儀測(cè)定2-苯氧乙醇含量的檢驗(yàn)方法較為常見(jiàn)，但通過(guò)高效液相色譜儀測(cè)定水產(chǎn)品中2-苯氧乙醇的文獻(xiàn)還未有報(bào)道[40-42]。

利多卡因和苯佐卡因均可通過(guò)高效液相色譜檢測(cè)定量[43-44]。利多卡因和苯佐卡因也可被GC-MS 定量，但關(guān)于檢測(cè)水產(chǎn)品中利多卡因和苯佐卡因含量的文獻(xiàn)還未有報(bào)道，目前關(guān)于水產(chǎn)品中麻醉劑2-苯氧乙醇、利多卡因、苯佐卡因等其他類(lèi)麻醉劑的檢測(cè)還處于研究階段。

2.3 多種麻醉劑檢驗(yàn)方法

丁香酚類(lèi)麻醉劑及MS-222 是水產(chǎn)品運(yùn)輸中常用的麻醉劑，因此需建立一種能同時(shí)檢測(cè)丁香酚類(lèi)麻醉劑及MS-222 麻醉劑的方法。但現(xiàn)有檢測(cè)方法都是僅針對(duì)單一種類(lèi)的麻醉劑的檢測(cè)，不利于對(duì)多種麻醉劑的檢測(cè)，需開(kāi)發(fā)制定快速、高效且能檢測(cè)多種麻醉劑的檢測(cè)方法[37]。翟紋靜等[26]建立了一種三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定6 種丁香酚類(lèi)麻醉劑和MS-222 麻醉劑的檢測(cè)方法，準(zhǔn)確度、精密度均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 27404—2008，該方法能同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)品中7 種麻醉劑含量是由于丁香酚類(lèi)麻醉劑微溶于水而易溶于有機(jī)溶劑，而MS-222 易溶于水[21,45]。如表2 所示，翟紋靜等[26]根據(jù)國(guó)家監(jiān)管的需求研究了一種能同時(shí)檢測(cè)市場(chǎng)上常用的兩種類(lèi)別的麻醉劑的方法，但由于這兩種化合物極性相差較大，提取方法還需進(jìn)一步優(yōu)化，并且該方法需使用兩種內(nèi)標(biāo)化合物，提高了檢驗(yàn)成本；鄭向華等[20]通過(guò)固相萃取-液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜成功測(cè)定水產(chǎn)品中三卡因、苯佐卡因、喹哪啶的含量；李圓圓等[21]通過(guò)全自動(dòng)固相萃取儀器LC MS/MS 同時(shí)檢測(cè)出7種類(lèi)別的麻醉劑（苯佐卡因、利多卡因、丁卡因、辛可卡因、普魯卡因、普魯卡因胺和氯普魯卡因），但該方法對(duì)前處理?xiàng)l件和儀器條件要求較高，需選擇最優(yōu)的前處理?xiàng)l件和儀器條件，而且該方法需采用基質(zhì)標(biāo)定量確保結(jié)果的準(zhǔn)確性；HUANG 等[46]通過(guò)固相微萃取（Solid-Phase Microextraction，SPME）與GC-MS 相結(jié)合的方法活體檢測(cè)5 種麻醉劑[2-苯氧乙醇、丁香酚、異丁香酚、4-氨基苯甲酸乙酯（苯佐卡因）和MS-222]，使得用GC/MS 同時(shí)檢測(cè)多種類(lèi)別的麻醉劑成為了可能，但該方法適用于活體快速、微量檢測(cè)麻醉劑，并且該方法精密度還有待提高。以上幾種方法，由于存在各種問(wèn)題，目前并不能滿(mǎn)足檢驗(yàn)需求。

表2 文獻(xiàn)中關(guān)于多種麻醉劑檢驗(yàn)方法分析

3 結(jié)語(yǔ)

為實(shí)現(xiàn)活體水產(chǎn)品長(zhǎng)距離運(yùn)輸，在運(yùn)輸中使用麻醉劑成為一種必然的趨勢(shì)，但在水產(chǎn)品中過(guò)度使用麻醉劑會(huì)危害消費(fèi)者的身體健康，也會(huì)引起社會(huì)的廣泛關(guān)注，因此合理監(jiān)管水產(chǎn)品中麻醉劑含量非常重要。目前，水產(chǎn)品中麻醉劑的檢驗(yàn)方法過(guò)于局限，并且其檢驗(yàn)方法沒(méi)有統(tǒng)一的規(guī)范和使用依據(jù)。目前的文獻(xiàn)中報(bào)道的麻醉劑的研究對(duì)象多為魚(yú)類(lèi)，關(guān)于其他甲殼類(lèi)水產(chǎn)品麻醉劑的檢驗(yàn)方法案例較少，研究對(duì)象不夠全面，仍需使用不同檢驗(yàn)方法對(duì)不同水產(chǎn)品基質(zhì)進(jìn)行考察。應(yīng)從食物安全角度出發(fā)，建立能同時(shí)監(jiān)測(cè)多種水產(chǎn)品基質(zhì)、多種類(lèi)型麻醉劑的檢測(cè)方法以及檢驗(yàn)依據(jù)。隨著對(duì)水產(chǎn)品中麻醉劑的研究的不斷深入，進(jìn)一步開(kāi)發(fā)高靈敏度、高分辨率、對(duì)多種麻醉劑同時(shí)檢測(cè)的檢驗(yàn)方法，以及該方法能在不同基質(zhì)下檢測(cè)，這也是未來(lái)水產(chǎn)品質(zhì)量安全研究的一個(gè)重要方向。