STARD8在胃癌中的表達水平及診斷意義

陳智勇 柯恩明

在中國，胃癌(gastric cancer，GC)是癌癥相關死亡的第3大原因[1]。根據癌癥統計資料顯示，臨床上大多數GC患者為晚期患者[2]，目前包括手術和聯合化療在內的臨床治療手段，在治療晚期GC的療效上均不理想，僅能夠一定程度上改善患者生存質量，而對患者的生存率的提高并不明顯[3]。因此，盡管目前GC的發病率逐年下降，但GC作為高度侵襲性和異質性的惡性腫瘤，GC患者的死亡率依然很高[4,5]。因此提高GC的早期診出率，可能是降低GC致死率的關鍵。挖掘在GC診斷中有效的生物標志物，是臨床醫學的研究熱點問題之一。淋巴結轉移也是GC死亡率高的主要影響因素之一，對淋巴結轉移機制的探索可能有助于GC的早期診斷[6,7]。在GC治療前，尤其是在早期GC中，精準識別淋巴結狀況被認為對制定更合適的治療策略和生存結局的改善至關重要[8]，目前臨床上主要通過影像學方式診斷淋巴結狀況，然而假陰性率高達45%[9]。因此，挖掘能夠有效評估GC淋巴結轉移風險的生物標志物，同樣在GC的早期診斷以及治療中具有重要意義。Rho GTP酶是肌動蛋白細胞骨架的重要調節因子，參與調節細胞周期、遷移、侵襲、極化以及轉移等過程，進而調節腫瘤的發生和進展[10]，DLC蛋白則通過催化GTP水解成GDP，致使Rho GTP酶失活，間接影響細胞過程[11]。近年來研究表明DLC蛋白家族成員在多種癌癥出現顯著低表達甚至不表達的異常現象，且其表達失調和癌癥進展密切相關[12,13]。DLC3也稱為GTP酶激活因子STARD8抗體STARD8[StAR-related lipid transfer(START)domain containing 8，STARD8]，目前在腫瘤領域的研究相對匱乏。STARD8包含一個N端無菌α基序(SAM)，一個C端類固醇生成的急性調節蛋白相關脂質轉移(START)結構域和調節RhoA的GAP域，是維持細胞的粘附連接穩定性和極化發生所必需的[14]。在乳腺癌中，STARD8通過和內體膜的動態締合，進而調節乳腺癌調節RhoB活性和肌動蛋白聚合，影響乳腺癌細胞的生長[14]，而STARD8在GC中的研究較少。因此在本研究中，為了探究STARD8在GC中的臨床意義，我們對本院76例GC患者進行了回顧分析，評估其在GC中的表達模式及診斷意義，結合GC患者的臨床病理特征進行相關性分析，探究其和GC惡性進展的關系，并對STADR8表達水平和淋巴結轉移的風險進行深入研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究包括2018年12月至2019年12月本院收治的76例GC患者，均在我院被確診為GC，并接受了后續治療。收集GC患者的臨床病理資料、腫瘤組織(觀察組)及癌旁正常組織(對照組)樣本，樣本均在各患者接受治療前被采集。GC患者男51例，女25例；平均年齡(55.42±15.13)歲；平均BMI(23.96±5.31)kg/m2。

1.2 組織采集與STARD8表達水平檢測 組組織樣本均保存于無菌凍存管,置于液氮中速凍，速凍樣本放置于-80℃環境下長期保存。取組織樣本，通過PBS沖洗，洗去組織表面殘留的血液和雜質，將組織塊稱重，并剪成盡量小的碎塊。按照組織重量∶PBS體積=1∶9加入預冷的PBS進行勻漿。吸取勻漿液到離心管，在4℃下以5 000 g的轉速離心5 min，于-80℃保存下保存上清液。將上清液放入Human STARD8 ELISA Kit試劑盒中進行檢測，根據試劑盒操作說明，通過酶聯免疫吸附法測定樣品中STARD8的表達水平，計算觀察組和對照組組織中STARD8的相對表達水平。

2 結果

2.1 STARD8在GC中的表達水平及其診斷價值 GC患者腫瘤組織樣本中STARD8的表達水平出現顯著下調。通過ROC曲線對2組樣本進行了分析，低表達的STARD8在GC中具有較高的診斷價值(AUC值：0.862；敏感度：68.4%；特異性：96.1%；cut-off值：0.796)，根據cut-off值可較為精確地區分腫瘤組織和正常組織。見圖1，表1。

圖1 STARD8在GC中的表達模式及診斷意義

表1 2組組織中STARD8的表達水平比較

2.2 STARD8表達水平和GC患者病理特征的相關性 根據GC患者腫瘤組織中STARD8表達水平的中位值，分為高表達組和低表達組。STARD8表達水平和GC的TNM分期、分化程度以及淋巴結轉移顯著相關，STARD8低表達情況下，GC的TNM分期顯著更高，分化程度顯著更低。在淋巴結轉移方面，STARD8低表達的GC患者中發生淋巴結轉移的人數更多。本研究為了明確STARD8表達水平對GC患者淋巴結轉移的風險評估作用，通過ROC分析，探究腫瘤組織中STARD8表達水平對GC患者淋巴結狀態的評估價值。STARD8表達水平同樣具有區分GC淋巴結轉移發生情況的臨床意義(AUC值：0.727；敏感度：78.3%；特異性：62.3%；cut-off值：0.493)。見表2，圖2。

圖2 STARD8在GC淋巴結轉移情況中的ROC曲線

表2 STARD8高低表達組GC患者的臨床病理資料 n=38

2.3 低表達STARD8是GC患者淋巴結轉移的獨立危險因子 已通過ROC分析得知，腫瘤組織中STARD8的表達水平具有評估GC的轉移風險的作用，根據其表達水平在一定程度上能夠區分GC患者的淋巴結轉移以及遠處轉移情況。STARD8表達水平是否是GC轉移相關的獨立危險因子進一步進行分析。GC的Borrmann分型、腫瘤直徑、浸潤深度以及腫瘤組織中STARD8表達水平均可能是淋巴結轉移的危險因子，將這些變量納入多因素邏輯回歸模型進一步分析。多因素二元logistic回歸分析結果表明，GC患者的STARD8低表達(OR：12.739，95%置信區間：2.681～60.533，P=0.001)、浸潤深度T3～T4(OR：6.171，95%置信區間：1.522～25.014，P=0.011)以及腫瘤直徑≥5 cm(OR：7.600，95%置信區間：1.638～35.264，P=0.010)均是患者發生淋巴結轉移的獨立風險因子，我們證實腫瘤組織中STARD8低表達是GC患者淋巴結轉移的獨立危險因子。見表3、4。

表3 GC淋巴結轉移相關的危險因子

3 討論

GC的早期診出率較低[15]，本研究中的GC患者經統計同樣大部分屬于晚期患者。早期GC患者的治愈率能夠達到90%，和晚期GC患者的生存率之間存在顯著差異[16]。基于生物標志物在臨床上的重要意義，以及GC臨床診療的現狀，挖掘有效的生物標志物是提高GC患者篩查率和生存率的關鍵。因此本研究以尋找GC診斷標志物作為研究目的，檢測了GC患者腫瘤組織中STARD8的表達水平，并與對照組(癌旁正常組織)進行對比，我們發現GC患者腫瘤組織中STARD8出現了異常表達，且首次證實腫瘤組織中STARD8低表達具有很高的GC早期篩查價值。臨床上或可通過進一步加大樣本量，明確STARD8在GC診斷的臨界值，在今后胃部出現癌變患者的臨床診斷過程中增加檢查項目，提高GC的早期診出率，從而提高GC患者的生存率。

表4 GC淋巴結轉移相關的獨立危險因子

既往研究也表明，GC腫瘤組織中STARD8顯著低表達，且低表達STARD8和GC惡性進展相關[17]。因此，本研究不僅探究了STARD8在GC中的診斷價值，也對其和GC患者的腫瘤進展的相關性進行了研究。本研究證實了組織中STARD8表達水平在GC進展中的臨床意義：腫瘤組織中STARD8表達水平和GC患者的TNM分期、分化程度以及淋巴結轉移顯著相關，低表達組GC患者的腫瘤惡性進展程度更高，具體表現為低表達GC患者的TNM分期顯著更高、細胞分化程度顯著更低且淋巴結轉移的發生率顯著更高。此外臨床研究多次提及淋巴結轉移在GC的預后價值極高[18,19]。然而，基于淋巴結狀態臨床診斷手段的精準率并不理想的現狀，本研究注意到STARD8在淋巴結轉移狀態不同的GC患者中存在顯著差異的現象，認為這可能有助于臨床上淋巴結轉移狀態的評估。隨后我們通過ROC分析，首次驗證了腫瘤組織中STARD8表達水平不僅能夠在GC篩查中存在臨床意義，且對GC患者STARD8表達水平的監測，對于患者淋巴結轉移風險有較好的評估作用。臨床上結合影像學診斷結果以及腫瘤組織中的STARD8表達水平，對患者的淋巴結轉移進行評估，這可能有助于改善因影像學診斷的假陰性率造成的治療不及時的局限性。

基于上述發現，本研究進一步提出猜想，認為STARD8表達水平可能是淋巴結轉移相關的危險因子。因此，我們通過單因素分析和二元logistic回歸分析，探究淋巴結轉移的獨立危險因子。最終分析結果表明，腫瘤組織中的STARD8低表達(OR：12.739，95%置信區間：2.681～60.533，P=0.001)是GC患者發生淋巴結轉移的獨立危險因子。之前有研究認為，GC的腫瘤直徑、浸潤深度以及分化程度都是淋巴結轉移的獨立危險因子[20]，而在本研究中，腫瘤直徑≥5 cm(OR：7.600，95%置信區間：1.638～35.264，P=0.010)和浸潤深度T3～T4(OR：6.171，95%置信區間：1.522～25.014，P=0.011)均是淋巴結轉移的獨立危險因子，分化程度則未顯示出和淋巴結轉移的相關性。我們認為出現差異的原因可能在于潛在的納入樣本之間的異質性。總體而言，本研究明確了GC中STARD8具有較高的臨床意義，或可成為GC中使用價值極高的生物標志物。

綜上所述，本研究不僅發現GC患者腫瘤組織中STARD8的表達水平顯著下調，且其異常低表達對GC患者的篩查具有臨床價值。此外，GC患者腫瘤組織中STARD8的表達水平和患者的腫瘤惡性進展程度負相關，通過檢測STARD8的表達水平，也有助于判斷患者的淋巴結狀態，且STARD8低表達是GC患者淋巴結轉移的獨立危險因子。在今后的臨床診斷以及治療上，合理利用本研究的有關結論，有效利用STARD的臨床價值，可能在GC的臨床診治中發揮積極作用。