lncRNA NEAT1在人腦膠質瘤中的表達水平及其臨床意義分析

姜旭東，龐玉軍，曹艷菲，張麗娜

大慶油田總醫院檢驗科，黑龍江大慶 163001

腦膠質瘤是發生在神經膠質細胞的顱內腫瘤，該疾病也是目前臨床醫學中最為常見的原發性顱內腫瘤，針對現階段疾病主要以手術切除為主，同時配合放療化療，以此改善患者疾病癥狀。而不同級別的膠質瘤患者疾病治療的存活時間不同，高級別膠質瘤患者治療后存活時間1～2 年，低級別的膠質瘤患者存活時間3～5 年[1]。長鏈非編碼核糖核酸（longnon-coding RNA，lncRNA）屬于轉錄RNA，隨著臨床腦膠質瘤研究發現lncRNA 具有較高的生物活性，在基因表達及核內運輸到細胞凋亡過程中起重要作用。核富集轉錄體1（nuclear enriched abundant transcript 1，NEAT1）屬于基因位點，通過RNA 聚合酶進行轉錄獲得[2-3]。相關研究發現NEAT1 與臨床多種疾病發生存在關聯。選取2018 年8 月—2020年8月大慶油田總醫院獲取的62份人腦膠質瘤樣本及正常人腦組織30 份，分析lncRNA NEAT1 表達水平進行，同時為人腦膠質瘤患者疾病預后提供重要技術支持。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取醫院獲取的62 份腦膠質瘤標本，同時選取同期因顱腦手術切除獲得的正常腦組織30 份。30例正常腦組織樣本中年齡24～78 歲，平均（54.15±2.65）歲；62 例人腦膠質瘤患者中男31 例，女31例；年齡39～78歲，平均（55.28±2.48）歲；WHO分級Ⅰ～Ⅱ級25 例，Ⅲ～Ⅳ級37 例，腫瘤直徑＞4 cm 22 例，腫瘤直徑≤4 cm40 例，單發腫瘤及多發腫瘤數量分別為35例、27例。所有參與研究的患者均進行術后隨訪，隨訪方式以門診復診，電話隨訪等。隨訪截止時間為2021年12月。兩組患者年齡、性別差異無統計學意義（P＞0.05）。具有可比性。本研究經過醫院醫學倫理委員會審批，通過審批后開展項目研究患者以及家屬均對研究知情，在知情同意書簽字。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①符合WHO（2007 年）神經系統腫瘤診斷標準[4]；②男女不限；③經病理診斷確診；④未接受其他治療研究。排除標準：①合并其他腫瘤癌癥者；②凝血機制異常者；③存在傳染性疾病者；④存在嚴重腎臟，心臟等功能損傷者；⑤存在慢性疾病者。

1.3 方法

提取樣本中的RNA，同時使用PCR 檢測技術進行測NEAT1 水平檢測，檢測過程中采用Trizol法對總RNA 進行獲得，在獲取RNA 過程中保證其吸光度值在1.9～2.0 階段，提取1 μl 總RNA，而后嚴格依據逆轉錄試劑盒中相應的試劑使用說明進行為cDNA 逆轉錄，完成這部分操作后，利用PCR 檢測技術進行NEAT1 水平檢測。將GAPDH作為參考基因，探針及引物系列為NEAT1 引物正向5'- TGGCTAGCTCAGGGCTTCAG-3'，反 向5'-TCTCCTTGCCAAGCTTCCTTC-3'；GAPDH 引物正向5'-TGTTGCCATCAATGACCCCTT-3'，反向5'-CTCCACGACGTACTCAGCG-3'。以2-△△Ct方 法 進 行 計算，進而獲得NEAT1表達情況。

1.4 觀察指標

比較膠質瘤患者和正常組織患者的lncRNA NEAT1 表達水平；分析腦膠質瘤生存期的影響因素。

1.5 統計方法

采用SPSS 22.0 統計學軟件對數據進行分析，計量資料樣本符合正態分布，采用（±s）表示，組間比較進行t檢驗，計數資料采用[n(%)]表示，進行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同lncRNA NEAT1 表達水平的膠質瘤患者臨床特征比較

62例腦膠質瘤患者中lncRNA NEAT1高表達35例，占比56.45%，低表達患者27 例，占比43.55%，見表1。且腦膠質瘤中lncRNA NEAT1 表達水平（0.64±0.17）ng/μl，而正常組織中lncRNA NEAT1 表達（0.10±0.08）ng/μl，比較差異有統計學意義（t=16.564，P＜0.05）。

表1 不同lncRNA NEAT1表達水平的膠質瘤患者臨床特征比較[n(%)]

2.2 人腦膠質瘤患者無進展生存期影響因素Cox回歸分析

經過多因素Cox 比例回歸分析發現，患者年齡＞60 歲，且術前KPS 評分低于80 分，WHO 分級Ⅲ～Ⅳ級及lncRNA NEAT1 表達水平高是腦膠質瘤患者無進展生存期及總生存期的獨立影響因素（P＜0.05），見表2、表3。

表2 人腦膠質瘤無進展生存期影響因素Cox回歸分析

表3 人腦膠質瘤總生存期影響因素Cox回歸分析

3 討論

據現階段流行病學調查顯示，膠質瘤發病年齡多處于20～50 歲之間，而且發病峰值以30～40 歲為主，通常情況下兒童會發生該疾病?；加心z質瘤疾病逐漸增多且男性患病數量遠高于女性，依據臨床發病情況數據統計顯示，膠質瘤總體年發病率數據為3～8/10 萬，而其中星形細胞瘤占比17.4%，室管膜瘤占比10.2%，髓母細胞瘤占比9.5%，少突膠質細胞瘤占比5.8%。疾病的發生嚴重影響了患者的身體健康，降低患者的生活質量，而且該疾病治療過程中預后較差，且預后參考指標較少，因此加強可預測膠質瘤預后生物學指標研究實現腦膠質瘤疾病預后有效性，是現階段臨床醫學工作者重點關注的問題[5-6]。

lncRNA 屬于長鏈非編碼RNA，相關學者在研究中發現該物質在劑量補償效應，遺傳調控，細胞生長周期及分化等各個階段均參與生命活動，現階段臨床醫學生物學已經對其進行有效研究，發現其不具有蛋白質編碼功能[7]。隨著近年來臨床醫學逐漸深入研究，發現腫瘤組織內部NEAT1 表達發生異常，而NEAT1 表達異常對腫瘤患者體內的細胞增殖情況，分化情況及凋亡情況起到重要影響，與人腦膠質瘤患者疾病治療預后有密切關聯[8]。王小剛等[8]在報道中發現人腦膠質瘤組織的IMP3 和IGF2 的表達水平對于腦膠質瘤患者疾病治療后3 年內生存時間起到嚴重影響，這一研究結果的提出進一步為lncRNA NEAT1 在人腦膠質瘤患者預后生存研究奠定了基礎。嚴華等[9]在研究中發現lncRNA NEAT1 表達情況在胃癌中對于患者臨床病理參數及患者疾病預后有重要關聯。胃癌患者體內lncRNA NEAT1 表達水平相較于正常人明顯增高，針對該種情況臨床研究中發現lncRNA NEAT1 表達的增高主要是由于EZH2靶基因參與細胞增殖，促進了癌細胞的增殖分化，因此這些結果可以充分說明NEAT1 物質參與了多種腫瘤及癌癥的發生[10-12]。

本研究中主要利用定量逆轉錄PCR 技術對腦膠質瘤患者及正?；颊吣X組織的lncRNA NEAT1 表達情況進行研究，通過研究發現，人腦膠質瘤患者腦組織中該物質的表達水平高于正常腦組織，依據WTO 進行分級，發現高級別膠質瘤中該物質的表達水平明顯高于低級別腦膠質瘤中的表達情況。62例腦膠質瘤患者中lncRNA NEAT1 高表達35 例，占比56.45%，低表達患者27 例，占比43.55%，且人腦膠質瘤中lncRNA NEAT1表達水平（0.64±0.17）ng/μl，而健康人腦組織中lncRNA NEAT1表達（0.10±0.08）ng/μl。李芳芳等[13]同樣在肝細胞癌中發現lncRNA NEAT1，而且由于lncRNA 具有較好的生物穩定性，因此可以針對癌癥診斷提供重要指導作用[14]。lncRNA NEAT1 與肝癌患者的腫瘤分化情況及臨床特征情況存在重要關聯，因此利用lncRNA NEAT1 可以有效實現癌癥疾病的診斷，本研究結果同樣為此次研究數據奠定了有效基礎。而且本研究利用Cox 多比例回歸分析，發現腦膠質瘤患者年齡＞60 歲，且術前KPS 評分低于80 分，WHO 分級Ⅲ～Ⅳ級及lncRNA NEAT1 表達水平高是腦膠質瘤患者無進展生存期及總生存期的獨立影響因素（P＜0.05），lncRNA NEAT1 表達水平越高，患者疾病預后越差。相關學者在研究中膠質瘤組織lncRNA NEAT1 的表達水平（2.893±0.296）ng/μl，顯著高于正常人表達（1.000±0.297）ng/μl（P＜0.05）[15]，這一數據與本研究數據高度相似，這一結果表明lncRNA NEAT1 與腦膠質瘤的發生及進展存在密切關聯。

綜上所述，lncRNA NEAT1 表達水平的高低對于人腦膠質瘤患者疾病預后有重要影響，高表達患者預后效果差，而且因素分析過程中發現術前KPS評分低于80 分，WHO 分級Ⅲ～Ⅳ級及lncRNA NEAT1 表達水平高及年齡超過60 歲是導致患者危險預后的重要獨立性因素，而lncRNA NEAT1 低表達，可實現患者術后生存時間延長。因此針對人腦膠質瘤臨床疾病預后觀察過程中可以將lncRNA NEAT1 表達情況作為生物學標志指標，為臨床人腦膠質瘤患者疾病預后提供重要指導。