聯合膀胱灌注對大鼠間質性膀胱炎治療研究

于泳

黑龍江省醫院泌尿外科，黑龍江哈爾濱 150001

間質性膀胱炎（interstitial cystitis，IC），或者稱之為膀胱痛綜合征（bladder pain syndrome，BPS）[1]，是一種以長期盆腔或會陰部疼痛，并伴有各種膀胱過度活動癥狀，如尿頻、尿急，夜尿次數增多為特點的慢性疾病[2-3]。目前已有研究中，葡萄糖氨基聚糖（glycosaminoglycan，GAG）層缺損理論受到學者們一致認可，同時也被廣泛證實。GAG 中不僅包括硫酸軟骨素，還有硫酸肝素及透明質酸的成分存在，而GAG 最主要的作用是對膀胱黏膜起到保護作用[4-6］。戊聚糖多硫酸鈉（pentosan polysulphate，PPS）是一種結構與GAG 較為相似的肝素樣大分子，其可以通過對膀胱黏膜表面的GAG 起到一定補充作用[7]；透明質酸為一種與GAG 較為類似的物質[8-9]。本研究選取2021年1—2月鼠齡6～8周的30只成年SD雌性大鼠為研究對象，選擇戊聚糖多硫酸鈉和透明質酸對間質性膀胱炎大鼠進行聯合灌注干預。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

成年SD 雌性大鼠30 只，鼠齡6～8 周；體質量200～250 g，平均225 g。隨機分為空白組6 只，鼠齡6～8 周；體質量205～245 g，平均220 g。IC 組6 只，鼠齡6～8 周；體質量200～245 g，平均215 g。干預IC1組6 只，鼠齡6～8 周；體質量200～250 g，平均225 g。干預IC2 組6 只，鼠齡6～8 周；體質量200～250 g，平均225 g。干預IC3 組6 只，鼠齡6～8 周；體質量200～250 g，平均225 g。各組大鼠一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。具有可比性。

1.2 動物模型建立

選取SD 雌性大鼠，地西泮注射液（H41024255，規格2ml:10mg），劑量0.3 mL/100 g 體質量，腹腔注射，麻醉完全后，將大鼠仰臥位固定于實驗臺[10]。乙醇消毒泌尿生殖區，PE-50 導管導尿，200 μl/min 膀胱注入試劑，避免注入過快造成膀胱輸尿管反流和試劑溢出，拔除導管。灌注時間達到后重新導尿，排空膀胱[11-13]。應用硫酸魚精蛋白（protaminesulfate，PS）/脂多糖，用量為10 mg/mL，PS 1 mL，2 mg/mL 脂多糖1 mL，500 mmol/L 氯化鉀溶液1 mL，時間30～45 min。

1.3 方法

空白組：經尿道膀胱灌注0.9%生理鹽水1 mL，保留40 min，排盡藥物后用磷酸緩沖液（PBS）沖洗3次,不做任何處理，連續1周[14]。

IC 組：經尿道膀胱灌注10 mg/mL 硫酸魚精蛋白（5 mL；H11020246）1 mL，2 mg/mL 脂多糖1 mL，500 mmol/L 氯化鉀溶液1 mL，時間保留40 min，排盡藥物后用磷酸緩沖液（PBS）沖洗3 次，拔除尿管，不做特殊處理，連續1周[15]。

干預IC 組：C1 組（聯合用藥組）：在IC 組的基礎上，拔除尿管4 h后應用透明質酸0.5 mL，0.8 mg/mL，戊聚糖多硫酸鈉0.25 mg/kg，保留30 min[16]。

C2 組（透明質酸組）：在IC 組的基礎上，拔除尿管4 h 后應用透明質酸0.5 mL，0.8 mg/mL，保留30 min。

C3 組（戊聚多硫酸鈉組）：在IC 組的基礎上，拔除尿管4 h 后應用戊聚糖多硫酸鈉0.25 mg/kg，保留30 min。

1周后處死3組大鼠，取膀胱組織送病理。進一步操作：①通過HE 染色觀察研究對象IC 動物模型病理學特征；②甲苯胺藍染色檢測大鼠膀胱黏膜及黏膜下層MC 的數量，通過光鏡對MC 數進行觀察并記錄。

1.4 統計方法

采用SPSS 22.0 統計學軟件處理數據，符合正態分布的計量資料用（±s）表示，采用t檢驗；計數資料用[n(%)]表示，采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組大鼠膀胱病理學改變

空白組大鼠膀胱黏膜及黏膜下層無破損，處于完好狀態，而其他各組均可以看到明顯的膀胱黏膜處損傷，且黏膜層有連續性的損傷，黏膜下層出現不同程度的脫落現象，膀胱壁組織出現較大面積的出血及充血情況，能夠明顯看出淋巴細胞及MC 的侵襲。

2.2 各組甲苯胺藍染色MC計數結果對比

空白組膀胱黏膜固有層、逼尿肌、漿膜層與IC組相比MC 數都顯著增加，差異有統計學意義（P＜0.05）。空白組和干預IC 組比較，兩組黏膜固有層、逼尿肌和漿膜層MC 數比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 各組黏膜固有層、逼尿肌和漿膜層MC計數對比[(±s)，/HP]

表1 各組黏膜固有層、逼尿肌和漿膜層MC計數對比[(±s)，/HP]

組別空白組（n=6）IC組（n=6）干預IC組C1（n=6）C2（n=6）C3（n=6）黏膜固有層2.64±1.02 1.16±0.52 2.77±1.11 2.11±0.14 2.27±1.01逼尿肌0.99±0.63 0.33±0.18 1.18±0.59 0.68±0.17 0.43±0.51漿膜層2.36±0.97 0.06±0.05 1.62±0.84 1.27±1.01 1.02±0.44

2.3 各組大鼠膀胱中MC生長情況對比

空白組膀胱黏膜處有較少MC 存在，IC 組MC 有明顯增生出現，而通過不同方式干預的3 個干預組膀胱黏膜也發生較明顯的MC 增生情況，且明顯高于空白組，差異有統計學意義（P＜0.05）。各組大鼠膀胱肌層處可見少量MC，但差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 各組大鼠膀胱MC表達對比

3 討論

間質性膀胱炎病因復雜，機制不清，療效不佳，且發病率逐年升高，嚴重影響患者生活質量[9]。許源城等[17]觀察沙培林(SapylinOK-432)膀胱灌注對環磷酰胺誘導間質性膀胱炎大鼠模型的治療作用。結果發現與對照組比較，治療組尿動力學參數中排尿間隔[(307.60±835)s vs (20 140±9.33)s]和膀胱容量明顯改善[(115±0.12)mL vs (0.61±008)mL]，病理炎癥程度明顯下降，肥大細胞浸潤數量明顯減少[(425±2.45)個vs(15.30±375)個]，膀胱組織勻漿炎癥因子濃度下降（P＜0.05）。可見沙培林膀胱灌注能有效改善間質性膀胱炎大鼠的炎癥和尿頻尿急癥狀。本研究中空白組黏膜固有層(2.64±1.02)/HP、逼尿肌(0.99±0.63)/HP 和漿膜層肥大細胞數(2.36±0.97)/HP；IC 組黏膜固有層(1.16±0.52)/HP、逼尿肌(0.33±0.18)/HP 和漿膜層 肥 大 細 胞 數(0.06±0.05)/HP；C1 組 黏 膜 固 有 層(2.77±1.11)/HP、逼尿肌(1.18±0.59)/HP 和漿膜層肥大細胞數(1.62±0.84)/HP；C2 組黏膜固有層(2.11±0.14)/HP、逼尿肌(0.68±0.17)/HP 和漿膜層肥大細胞數(1.27±1.01)/HP；C3 組黏膜固有層(2.27±1.01)/HP、逼尿肌(0.43±0.51)/HP 和漿膜層肥大細胞數(1.02±0.44)/HP。張祥等[18]探索IC 大鼠膀胱組織中細胞間黏附分子-1 與膀胱炎癥反應的關系及其作為IC 治療新靶點的價值所在。選擇雌性SD 大鼠分為對照組模型組和抗體治療組，腹腔注射環磷酰胺聯合膀胱灌注魚精蛋白和脂多糖構建IC 的大鼠模型模型，鼠膀胱灌注抗ICAM1 抗體進行治療為抗體組，比較各組大鼠膀胱組織的炎癥反應程度、肥大細胞浸潤數目及膀胱組織中P2X3PGE2EP2 受體腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）和ICAM1 的表達水平。結果發現，模型組大鼠膀胱組織炎癥程度、肥大細胞浸潤數目及P2X3PGE2EP2 受體TNFa和ICAM1的表達水平均顯著高于對照組；當1C模型大鼠給予抗體治療后，所有指標較模型組均顯著顯下降且同對照組相近。ICAM-1 與膀胱組織炎癥程度和肥大細胞浸潤數目均呈正性相關。謝偉杰等[19]觀察環孢素A（腫瘤壞死因子-α（cyclosporine A,CsA）在透明質酸酶誘導的大鼠間質性膀胱炎/膀胱疼痛綜合征（IC/BPS）中的治療作用，將45 只成年雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠（200～250 g）分為對照組15 只（膀胱灌注生理鹽水）、模型組15 只（膀胱灌注透明質酸酶）、CsA 治療組15 只（膀胱灌注透明質酸酶+CsA）。采用長期（1 個月）間歇灌注透明質酸酶（4 g/L）構建大鼠IC/BPS 模型，尿流動力學檢測膀胱功能，VonFrey 刷檢測泌尿生殖區疼痛變化，硝酸還原酶法測定膀胱組織NO 的含量，逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）誘導型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase, iNOS）、白介素-6（interleukin-6, IL-6）、白介素-10（interleukin-10, IL-10）及白介素-17（interleukin-17, IL-17）mRNA 表達，ELISA 法檢測膀胱組織IL-6、IL-10 及IL-17 含量。結果發現，與對照組相比，模型組膀胱大鼠膀胱iNOS、IL-6、IL-10、IL-17 mRNA 表達均顯著升高（P＜0.05），在予以CsA 治療后，其mRNA 表達均顯著下調（P＜0.05）。模型組膀胱一氧化氮（Nitric oxide,NO）含量(9.73±2.62)μmol/g；IL-6含量(125.4±11.25)μg/g；IL-10含量(64.05±6.26)μg/g；IL-17 含量(90.61±10.49)μg/g；排 尿 時 間 間 隔(148.23±40.75)s；膀 胱 容 量(0.41±0.06)mL。對照組膀胱NO 含量(1.31±0.55)μmol/g；IL-6 含 量(55.18±5.07)μg/g；IL-10 含 量(32.12±3.82)μg/g；IL-17 含量(44.45±4.92)μg/g；排尿時間間隔(441.90±34.96)s；膀胱容量(1.27±0.10)mL。與對照組比較，模型組大鼠膀胱NO、IL-6、IL-10、IL-17 含量均明顯升高，排尿時間間隔縮短，膀胱容量降低，疼痛評分顯著增加（P＜0.05）。與模型組相比，CsA治療組大鼠的膀胱組織NO、IL-6、IL-10、IL-17含量均顯著減少（P＜0.05），分別為(3.97±1.71)μmol/g、(62.29±6.68)μg/g、(33.51±5.77)μg/g、(51.88±6.67)μg/g，排尿時間間隔及膀胱容量明顯增加（P＜0.05），分別為(422.06±42.22)s、(1.14±0.15)mL，疼痛評分也明顯下調（P＜0.05）。

本研究內容是兩種黏膜保護劑聯用是否能有效降低間質性膀胱炎的炎癥反應。結果發現，空白組無論是膀胱黏膜還是黏膜下層都無破損，IC組及IC 干預組膀胱黏膜均可以看出明顯損壞，且黏膜層存在連續性破損伴黏膜下層脫落的情況，組內大鼠可以明顯看出膀胱壁組織存在大面積的出血、充血情況。空白組無論是膀胱黏膜固有層還是逼尿肌、漿膜層與IC 組相比MC 數都顯著增加（P＜0.05）。空白組和干預1 組比較，兩組黏膜固有層、逼尿肌和漿膜層MC 數對比，差異無統計學意義（P＞0.05）。通過對各組MC 的研究發現，空白組膀胱黏膜處有較少MC 存在，IC 組MC 有明顯增生，通過不同方式干預3 個干預組膀胱黏膜發生較明顯的MC 增生，且明顯高于空白組（P＜0.05）。各組大鼠膀胱肌層處可見少量MC，差異無統計學意義（P＞0.05）。

綜上所述，間質性膀胱炎通過膀胱灌注兩種黏膜保護劑PPS及透明質酸聯用替代葡萄糖氨基聚糖層，借助MC 與間質性膀胱炎的炎癥反應有密切關系。GAG 替代的黏膜保護劑能降低患者炎癥反應，減少患者膀胱黏膜及黏膜下層的MC。