寶安地區亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態性與妊娠早期 甲狀腺功能紊亂的相關性研究

孟偉偉，盧小娟，廖水新

（深圳市寶安區石巖人民醫院檢驗科，廣東深圳 518108）

甲狀腺激素是調節人體代謝功能的一種內分泌激素，能夠直接參與機體代謝和相關生理活動，還可促進胎兒發育[1]。然而，妊娠早期孕婦因受體內性激素波動及自身免疫相關影響，體內甲狀腺功能有可能出現紊亂，嚴重時可導致高血壓、糖尿病、流產等[2]。葉酸也是妊娠期孕婦所需的重要營養素，孕婦葉酸攝入不足會導致胎兒出現先天性心臟病、唇腭裂等缺陷，及先兆流產、早產等不良妊娠結局[3]。亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）是葉酸代謝的關鍵酶，而MTHFR基因第677位點 C-T的突變可以降低 MTHFR 活性，導致葉酸代謝障礙。且有研究證實MTHFR基因多態性可影響妊娠期孕婦體內糖代謝，增加妊娠期糖尿病的風險[4]，而臨床有關MTHFR基因多態性與妊娠女性早期甲狀腺功能紊亂的發生報道較少。基于此，本研究探討寶安地區妊娠早期甲狀腺功能紊亂與MTHFR基因多態性的相關性，旨在為進一步探討女性妊娠早期甲狀腺功能紊亂危險因素提供依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2021年1月至2022年1月深圳市寶安區石巖人民醫院收治的妊娠早期甲狀腺功能紊亂的80 例孕婦為紊亂組，另選取同期院內檢查甲狀腺功能正常的60例孕婦為正常組作為研究對象進行回顧性分析。紊亂組孕婦年齡22～35歲，平均年齡（27.39±2.59）歲；孕周3～11周，平均孕周（7.59±1.96）周；初產婦50例，經產婦30例。正常組孕婦年齡23～35歲，平均年齡（27.59±2.24）歲；孕周3～11周，平均孕周（7.39±1.87）周；初產婦28例，經產婦32例。兩組孕婦的一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），組間具有可比性。本研究經深圳市寶安區石巖人民醫院醫學倫理委員會批準。診斷標準：紊亂組孕婦參照《妊娠和產后甲狀腺疾病診治指南（第2版）》[5]中妊娠早期甲狀腺功能紊亂的診斷標準。納入標準：①年齡22～35周歲，孕周＜12周；②均為單胎妊娠。排除標準：①妊娠前確診為甲狀腺功能紊亂者；②合并嚴重肝、腎、肺等疾病者；③合并妊娠期糖尿病者；④有不良孕產史者。

1.2 檢測方法①檢測孕婦甲狀腺功能指標。抽取孕婦空腹靜脈血5 mL，采用化學發光法檢測血清游離三碘甲腺原氨酸（FT3）、游離甲狀腺素（FT4）和促甲狀腺激素（TSH）水平，試劑由羅氏集團提供。②MTHFR基因多態性檢測[6]：對MTHFR基因多態性的 C677T位點進行檢測。收集孕婦空腹靜脈血2 mL，EDTA 抗凝，保存7 d內提取DNA。DNA濃度經測定在5～50 ng/μL為宜。PCR擴增：取50 μL DNA提取液置于1.5 mL離心管中，加入50 μL 外周血，吹打混勻后95 ℃加熱5 min。加入200 μL無水乙醇，振蕩至出現絮狀的沉淀物后倒入吸附柱 CB3（奧地利格雷那公司）中，以 12000 r/min 離心30 s，吸附柱 CB3 再次放回原來的收集管中，以 12000 r/min 離心 2 min后，放置約 3 min，使吸附材料中的漂洗液得到徹底晾干。將吸附柱 CB3 放入 1.5 mL 離心管中，室溫下放置 5 min，然后以12000 r/min 離心 2 min，將溶液全部收集到離心管中，留取上清液備用。每個反應體系總體積25 μL，包含濃度為10～100 ng/μL 的DNA模板2 μL，PCR反應液22 μL，反應酶1 μL。反應條件為50 ℃ 2 min，95 ℃3 min，隨后進行10個循環的擴增（95 ℃ 10 s，56 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s），再進行35個循環的擴增（95 ℃ 10 s，56 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s）。反應結束后在熒光定量PCR儀（上海博奧派克生物科技有限公司，型號：ABI7500型）上讀取樣品孔中的終點熒光，利用分析軟件確定各個樣本的基因分型結果。基因頻率= 基因型數/ 檢測總數×100%；基因型突變率=突變基因型人數/ 檢測總數檢測×100%。

1.3 觀察指標①比較兩組患者基本指標。包括妊娠史、妊娠前體質量指數（BMI）、貧血史。②比較兩組孕婦MTHFR C677T基因型分布和等位基因頻率。③比較兩組孕婦甲狀腺功能指標。包括FT3、FT4、TSH。④比較紊亂組不同基因型孕婦的甲狀腺功能指標。⑤分析妊娠早期甲狀腺功能紊亂發生的相關因素。

1.4 統計學分析采用SPSS 22.0統計學軟件進行數據處理，計量資料以（±s）表示，組間比較行獨立樣本t檢驗，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗；計數資料以[例(%)]表示，組間比較行χ2檢驗；多因素分析采用非條件Logistic逐步回歸分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組孕婦基本指標比較兩組孕婦妊娠史比較，差異無統計學意義（P＞0.05），紊亂組孕婦有貧血史、妊娠前BMI＜18.5 kg/m2或＞24.0 kg/m2患者占比明顯高于正常組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組孕婦基本指標比較 [例(%)]

2.2 兩組孕婦MTHFR C677T基因型分布和等位基因頻率比較紊亂組孕婦MTHFR基因C677T位點C等位基因頻率占比明顯低于正常組，差異有統計學意義（P＜0.05）；紊亂組孕婦MTHFR基因C677T位點TT、TC基因型頻率占比明顯高于正常組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組孕婦MTHFR C677T基因型分布和等位基因頻率比較 [例(%)]

2.3 兩組孕婦甲狀腺功能指標比較紊亂組孕婦TSH水平明顯高于正常組，差異有統計學意義（P＜0.05）；兩組孕婦FT3、FT4水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表3。

表3 兩組孕婦甲狀腺功能指標比較（±s）

表3 兩組孕婦甲狀腺功能指標比較（±s）

注：FT3：游離三碘甲腺原氨酸；FT4：游離甲狀腺素；TSH：促甲狀腺激素。

組別 例數 FT3(pmol/L) FT4(pmol/L) TSH(mIU/L)紊亂組 80 13.21±2.34 8.49±2.46 3.05±1.22正常組 60 12.62±2.39 8.56±2.12 1.77±0.52 t值 1.463 1.463 7.619 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＜0.05

2.4 紊亂組不同基因型孕婦的甲狀腺功能指標比較紊亂組TT基因型、CT基因型孕婦TSH水平高于CC基因型孕婦，差異有統計學意義（P＜0.05）；不同基因型孕婦FT3、FT4水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表4。

表4 紊亂組不同基因型孕婦的甲狀腺指標比較（±s）

表4 紊亂組不同基因型孕婦的甲狀腺指標比較（±s）

注：FT3：游離三碘甲腺原氨酸；FT4：游離甲狀腺素；TSH：促甲狀腺激素。

基因型 例數 FT3(pmol/L) FT4(pmol/L) TSH(mIU/L)TT 29 4.62±0.78 8.36±1.23 3.67±0.42 CT 34 4.87±0.63 7.76±1.35 3.21±0.40 CC 17 5.02±0.81 8.46±1.43 2.37±0.45 F值 1.818 2.289 51.834 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＜0.05

2.5 妊娠早期甲狀腺功能紊亂發生的多因素Logistic分析以妊娠早期甲狀腺功能紊亂發生作為因變量，將以上差異有統計學意義（孕前BMI、貧血史、MTHFR基因C677T位點基因型）作為自變量，并對其進行賦值，妊娠前BMI（18.5～24.0 kg/m2＝0，＜18.5 kg/m2或＞24.0 kg/m2＝1）、貧血史（無＝0，有＝1）、MTHFR基因C677T位點基因型（CC＝0，TT、TC＝1）。經多因素Logistic回歸分析證實，妊娠前BMI＜18.5 kg/m2或＞24.0 kg/m2、有貧血史、MTHFR基因C677T位點是影響妊娠早期甲狀腺功能紊亂發生的危險因素（P＜0.05），見表5。

表5 妊娠早期甲狀腺功能紊亂發生的多因素Logistic分析

3 討論

甲狀腺功能紊亂為妊娠早期常見的并發癥，可增加流產、早產、先兆子癇和甲狀腺功能亢進危象的發生率，同時也會增加胎兒甲狀腺功能減退、智力低下的發生風險。對妊娠早期甲狀腺功能紊亂進行早期預測和干預，可能會降低其發生率[7]。路娜等[8]研究顯示，MTHFR基因多態性與甲狀腺疾病形成有關。而MTHFR是葉酸代謝的主要酶類，當其基因發生突變，會直接影響葉酸代謝過程中甲硫氨酸循環的過程。張菘等[9]研究發現，MTHFR基因677處C-T的突變是導致MTHFR的酶活性下降的主要原因。

本研究結果發現，紊亂組孕婦MTHFR基因C677T位點C等位基因頻率占比及TT、TC基因型頻率占比明顯高于正常組；同時，本研究發現，紊亂組孕婦TSH水平明顯高于正常組，CT及TT基因型孕婦TSH水平較CC基因型孕婦更高，而不同基因型孕婦FT3、FT4水平比較，差異無統計學意義。這提示妊娠早期甲狀腺功能紊亂的孕婦MTHFR基因多態性分布與正常孕婦相比存在一定差異，TT基因型孕婦TSH水平整體偏高。此項結果雖然與過往研究存在一定差異，但也在一定程度上說明證實了該基因突變可能與導致甲狀腺激素的異常存在一定關系。雖然過往有關研究中無專項針對MTHFR基因與甲狀腺功能紊亂發病的研究，但結合吳云等[10]研究結果來看，葉酸、半胱氨酸異常都能造成甲狀腺代謝異常，而MTHFR是葉酸代謝的主要酶類，因此，MTHFR基因突變造成的葉酸活性變化也可影響甲狀腺功能[11]。

本研究證實，妊娠前BMI＜18.5 kg/m2或＞24.0 kg/m2、有貧血史、MTHFR基因C677T位點突變是影響妊娠早期甲狀腺功能紊亂發生的危險因素。孕期相關激素分泌水平的變化及孕期對甲狀腺激素需求增加等均是導致母體內分泌功能紊亂的主要因素，而母體BMI指標異常與有貧血史會直對自身激素分泌造成影響。但MTHFR基因突變直接對母體葉酸代謝活性產生影響，葉酸代謝與同型半胱氨酸代謝密切相關，葉酸代謝異常能引起同高半胱氨酸血癥，而機體內長期處在高半胱氨酸水平，會使機體產生氧自由基、炎癥因子，從而損傷孕婦免疫功能；而妊娠早期甲狀腺功能紊亂的發病機制之一是自身免疫損傷，因此MTHFR基因突變在引起半胱氨酸血癥的同時也可能引發甲狀腺功能紊亂。

綜上所述，MTHFR基因C677T位點多態性與妊娠早期甲狀腺功能紊亂發生相關。因此，女性在備妊娠前可進行MTHFR基因C677T多態性檢測以對妊娠早期甲狀腺功能進行初步判斷，妊娠后加強甲狀腺功能監測并作對應處理。