鏈霉菌Ahn75菌劑助劑的篩選及對水稻稻瘟病的防效研究

付祖姣，劉宇波，郭照輝，楊 華，羅容珺，劉 歡，畢世宇，肖 蓉，胡 展，劉萬鈞

（湖南省微生物研究院，長沙 410009）

水稻是我國主要的糧食作物，常因稻瘟病（Rice blast）的侵害導致稻谷減產、稻米品質下降，程度嚴重時甚至稻谷絕收。稻瘟病是由半知菌類叢梗孢科、梨形孢屬稻梨孢菌（Magnaporthe oryzae）侵染水稻引起的病害，因侵染時期和部位的不同可分為苗瘟、葉瘟、節瘟、穗頸瘟、谷粒瘟［1］。目前，水稻稻瘟病主要依靠化學農藥進行防治，但化學農藥的長期施用易誘發稻瘟病病原菌的抗藥性，且化學農藥對環境、土壤會造成一定的污染，給食品安全和人類健康也帶來較大的隱患［2］。因此，開發新型高效生物農藥，減少化學農藥的施用，是滿足人類健康需求和可持續農業發展的必要手段。

內生鏈霉菌（endophyticStreptomyces）是新型的水稻稻瘟病生防資源，其獨特的內生生境賦予了它豐富的抗生素生產能力和抗病能力。有研究人員從水稻中分離到了內生吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）OsiSh-2，通過其分泌的抗生素、鐵載體和多種膜降解酶能抑制稻瘟病的生長和繁殖，從而有效降低水稻葉瘟的發病率［3-5］。Patel等［6］發現，高粱內生鏈霉菌SS1、SS5和SS8不僅能抑制水稻稻瘟病病原菌的生長，誘導水稻防御基因的表達上調，還能顯著促進水稻莖的生長。Ahn75是從海南水稻莖中分離的一株內生灰褐色鏈霉菌（Streptomyces griseobrunneus），該菌株能高效抑制水稻稻瘟病菌的生長和孢子萌發，噴施水稻后能定殖在水稻的莖、葉和根部［7］，并有效降低水稻稻瘟病的發病率，提高稻谷產量，是一株具有較強生防和促生潛力的內生鏈霉菌，可用于水稻的藥肥研制。但是，目前市場上還未見有效果較好的放線菌制劑出現，且內生放線菌的田間防效與其定殖量密切相關，而其定殖水平又受環境、天氣和水稻生育期等多種因素的影響［8］。篩選能有效促進放線菌孢子萌發、改善菌劑物理性能的助劑，對于提高放線菌的定殖水平和生防效果意義重大。

灰褐色鏈霉菌Ahn75在體外能高效抑制水稻稻瘟病病原菌12個不同生理小種的生長，同時具有固氮、解鉀、產鐵載體等促生長性能，還具有較強的鎘、砷和鉛耐受性能，是一株具有較大應用潛力的生防菌株［9］。本研究以灰褐色鏈霉菌Ahn75為研究對象，通過分析不同的營養物、分散劑、潤濕劑、紫外保護劑和穩定劑等對Ahn75孢子萌發、菌劑穩定性和抗病效果的影響確定Ahn75菌劑的助劑優化配比，為放線菌Ahn75菌劑的研制和產業化提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株

拮抗菌株 Ahn75（登錄號 ：CCTCC No. M 2019890）是本研究組從海南水稻健康莖中分離的內生鏈霉菌。

1.1.2 水稻品種

選擇超優千號系列‘湘兩優900’用于稻瘟病拮抗菌株Ahn75的盆栽防效研究。該水稻品種是湖南年豐種業科技有限公司和湖南省雜交水稻研究中心培育的第五期超級稻高品質軟米，稻瘟病綜合指數為5.3～5.8，穗瘟損失率最高級7級。

1.1.3 培養基

ISP2（international streptomyces program 2）培養基［10］：1%麥芽提取物（malt extract）、0.4%酵母提取物（yeast extract）、0.4%葡萄糖，pH 7.2。固體培養基添加1.5%的瓊脂，115℃高壓滅菌20 min，用于放線菌的培養。

燕麥培養基［11］：30 g 燕麥片用純水煮沸 1 h，4層紗布過濾除去沉淀，加入100 mL榨取的新鮮西紅柿汁和15 g瓊脂粉，純水定容至1 000 mL，pH 7.2，115℃高壓滅菌20 min。將其用于水稻稻瘟病病原真菌稻梨孢的孢子制備。

1.1.4 助劑

營養物質包括丙氨酸（alanine）、組氨酸（histi-dine）、酵母提取物、麥芽提取物、蛋白胨（peptone）、葉面肥（foliar fertilizer）；分散劑包括木質素磺酸鈉（sodium lignosulfonate）、木質素磺酸鈣（calcium lignosulfonate）、Morwet D425、吐溫80（Tween 80）；潤濕劑包括拉開粉（Nekal）、Morwet EFW、十二烷基硫酸鈉（dodecyl sulfate，sodium salt，SDS）；紫外保護劑包括糊精（dextrin）、維生素C（VC）、維生素B2（VB2）、熒光素鈉（sodium fluorescein）；穩定劑包括羧甲基纖維素鈉（carboxymethylcellulose sodium）、海藻酸鈉（sodium alginate）、海藻酸鉀（potassium alginate）、黃原膠（xanthan gum）。所有助劑均為市售分析純或工業純。

1.2 研究方法

1.2.1 放線菌孢子懸浮液的制備

放線菌的孢子具有比菌絲更強的抗逆性能，且生存時間較長，故本文選擇放線菌的孢子作為主要活性成分，用于放線菌劑助劑的篩選。

將放線菌Ahn75接入ISP2培養基，28℃培養3～5 d，待培養皿上布滿孢子，用稱量勺刮取孢子粉至無菌的10 mL離心管中，用水溶液懸浮，配制Ahn75的孢子懸浮母液。對孢子懸浮母液進行十倍梯度稀釋并涂布ISP2平板，3 d后統計平板菌落數，計算孢子懸浮母液中孢子的含量。使用時用無菌水將孢子懸浮液稀釋至合適的含量。

1.2.2 放線菌孢子促萌發營養物質的篩選

丙氨酸、組氨酸等游離氨基酸和葉面肥可促進農作物生長，常用作肥料或肥料添加劑，而麥芽提取物、酵母提取物和蛋白胨常用作放線菌、細菌培養的C/N源。本研究選擇這些可促進農作物生長或促進微生物生長的營養物質作為研究對象，分析它們對Ahn75孢子萌發的影響，篩選適合放線菌孢子萌發的最佳營養助劑。配置5.00%氨基酸、5.00%葉面肥、1.00%麥芽提取物、1.00%蛋白胨、0.50%酵母提取物的營養物質水溶液，均121℃高壓滅菌20 min。在 1.5 mL EP 管中分別加入 50 μL無菌的營養物質水溶液、5 μL 109CFU/mL的孢子懸浮液、445 μL無菌水，混勻，28℃靜置培養，分別在24 和48 h取10 μL培養液滴于載玻片上，蓋上蓋玻片，在相差顯微鏡下觀察孢子的萌發情況，隨機統計6個視野中萌發和未萌發的孢子數，并根據公式計算孢子的萌發率。空白對照采用等體積無菌水替代營養物質，其他處理方法與樣品處理一致。每個處理重復3次。

孢子萌發率按以下公式計算［12］：孢子萌發率（%）＝萌發孢子數/（未萌發孢子數+萌發孢子數）×100。

1.2.3 放線菌菌劑潤濕劑、分散劑的篩選

放線菌菌劑最佳分散劑、潤濕劑根據劉振華等［13］、李姝江等［14］、王劍等［15］的研究選擇吐溫80、木質素磺酸鈉、木質素磺酸鈣、Morwet D425、拉開粉、Morwet EFW、SDS進行篩選。將不同種類的分散或潤濕劑以0.50%的質量分數加入ISP2培養基中，進行高壓滅菌后制備該培養基的固體平板，然后取0.1 mL 102和103CFU/mL的孢子懸浮液分別涂布于含有不同潤濕劑、分散劑的ISP2平板上28℃培養36～48 h。對照為不加其他物質的ISP2平板，其余操作與處理一致。每個處理重復3個平板，記錄每個平板的菌落形成單位數（CFU值）。孢子萌發率（%）＝處理平板上的菌落數／對照平板上的菌落數×100。

根據含有不同潤濕劑、分散劑平板上孢子萌發率水平的高低篩選有助于放線菌孢子萌發的最佳潤濕劑和分散劑。

1.2.4 放線菌菌劑紫外保護劑的篩選

根據王劍等［15］、羅洋等［16］的研究分別檢測糊精、VC、VB2、熒光素鈉等紫外保護劑對鏈霉菌Ahn75孢子萌發及其對紫外線耐受性能的影響，篩選對Ahn75孢子萌發抑制小且可有效保護孢子抗紫外線照射的保護劑。

試驗先將不同的紫外保護劑以0.50%的質量分數加入ISP2培養基中，并制備該培養基的固體平板，然后取 0.1 mL 102和 103CFU/mL的孢子懸浮液涂布于該平板上，28℃培養36～48 h。對照為不加其他物質的ISP2平板。每個處理重復3個平板，記錄每個平板的菌落形成單位數（CFU值）并根據1.2.3方法計算孢子的萌發率。

選擇萌發水平最高的紫外保護劑，分別以不同的質量濃度加入ISP2培養基中進行孢子萌發試驗，篩選紫外保護劑的最佳促萌發質量濃度。

同時，將各紫外保護劑分別按最佳促萌發質量分數加入102～103CFU/mL的孢子懸浮液中，混合均勻后在超凈工作臺紫外燈（254 nm，15 W 光強，120 lx）下35 cm處照射2 min，取0.1 mL孢子懸浮液涂布于ISP2平板上，28℃培養36～48 h，記錄每個平板的菌落形成單位數（CFU值）。對照1取0.1 mL不加紫外保護劑且未經紫外線照射的孢子懸浮液涂布ISP2平板，對照2取0.1 mL不加紫外保護劑但經紫外線照射2 min的孢子懸浮液涂布ISP2平板。每個處理重復3次，統計每個平板的菌落形成單位數（CFU值），并根據1.2.3方法計算孢子萌發率，分析不同紫外保護劑處理下，孢子在紫外線照射下的萌發水平。

1.2.5 放線菌菌劑穩定劑的篩選

根據張建萍等［17］的研究，選擇羧甲基纖維素鈉、海藻酸鈉、海藻酸鉀、黃原膠等作為放線菌制劑的穩定劑材料，分別將不同穩定劑以0.15%的質量分數加入ISP2培養基中，并制備該培養基的固體平板。取 0.1 mL 102和103CFU/mL 的孢子懸浮液涂布于該平板上，28℃培養36～48 h，記錄每個平板的菌落形成單位數（CFU值）。對照采用等體積無菌水代替穩定劑。計算不同穩定劑下Ahn75孢子的萌發率，分析不同穩定劑對孢子萌發的影響。

將穩定劑與109CFU/mL的孢子懸浮液混勻，在0～60 min內的不同時間吸取懸浮液中段液體，測定其在370 nm 波長處的吸光值，根據時間和吸光值的變化繪制圖表，并分析不同穩定劑對孢子懸浮液的穩定性能。

1.2.6 潤濕劑和紫外保護劑質量分數的優化

將促萌發效果最佳的潤濕劑、分散劑分別以0.01%、0.02%、0.05%、0.10%、0.25%、0.50%的質量分數加入ISP2固體培養基中，將最佳紫外保護劑分別按0.01%、0.02%、0.05%、0.10%、0.25%、0.50%、1.00%的質量分數加入ISP2固體培養基中，按1.2.3的方法進行孢子萌發率的檢測，分析潤濕劑、分散劑和紫外保護劑的最佳促萌發含量。

1.2.7 盆栽試驗

將水稻種子在純水中浸泡30 min，剔除空秕粒后倒掉純水，用75%的乙醇表面消毒5 min，然后用1% NaClO浸泡5 min，無菌水清洗3～5次。將表面消毒后的種子裝入雙層塑料濾水籃的上層，加無菌水浸沒水稻種子，30℃催芽1 d。將催芽的種子轉移至每盆裝有800 g泥土的陶瓷盆中，每盆2顆，每個處理重復3次，以無菌水處理為空白對照。所有盆栽在自然狀態下培養。

分別將各種助劑按最佳質量濃度與Ahn75孢子懸浮液混合，制備含有不同助劑的Ahn75菌劑，保持菌劑中Ahn75孢子含量不低于1×108CFU/mL。同時，按王玉雙等［18］的方法在燕麥培養基上培養水稻稻瘟病病原真菌稻梨孢菌株，待菌株充分產孢后，每皿用5 mL無菌水洗下孢子，制成每毫升105個病原真菌孢子的懸浮液。

將分蘗期水稻盆栽移至溫室中，分別將上述Ahn75菌劑噴施于不同的盆栽，空白處理以等體積純水代替。5 d后，將制備的稻瘟病孢子懸浮液噴施于所有盆栽，并保持90%以上濕度24 h以上，10 d后依據國際稻瘟病圃IRBN的標準統計各處理水稻葉瘟發病情況［19］，并根據以下公式計算水稻葉瘟發病率和病情指數，評估助劑協同Ahn75防治水稻葉瘟的效果。

發病率（%）=（發病株數/調查總株數）×100；

病情指數 =［ Σ（ 各病級植株數 × 各級代表數值）/調查總植株數×最高級別值］×100；

發病率防治效果（%） =［（對照發病率-處理發病率）/對照發病率］×100；

病情指數防治效果（%）=［（對照病指數-處理病指數）/對照病指數］×100。

1.2.8 數據統計和分析

采用Excel軟件對數據進行處理和統計，采用SPSS19.0軟件（Duncan法）對不同處理間的差異進行0.05和0.01水平顯著性分析。數值采用平均值±標準差（）表示。

2 結果與分析

2.1 營養物質對放線菌孢子萌發的影響

分別檢測丙氨酸、組氨酸、麥芽提取物、酵母提取物、蛋白胨、水稻葉面肥對鏈霉菌Ahn75孢子萌發的影響，結果顯示，與對照相比，營養物質對Ahn75孢子的萌發有不同程度的促進作用（圖1、表1）。培養24 h后，葉面肥處理下的孢子萌發顯著，肉眼可見培養液中有明顯的菌絲團出現，相差顯微鏡下可觀察到數團菌絲球。通過統計萌發孢子和未萌發孢子數量可得出葉面肥培養下的孢子萌發率達到（54.33±11.43）%。此外，與對照相比較，蛋白胨、酵母提取物、丙氨酸、組氨酸和麥芽提取物均能顯著促進鏈霉菌孢子的萌發，但其促進水平顯著低于葉面肥（表1）。當培養時間延長至48 h時，酵母提取物的促孢子萌發效果與葉面肥相當，均達到90%以上。兩者之間的萌發率經過統計分析，差異不顯著。其次為蛋白胨，0.10%的質量分數下培養的孢子萌發率為（67.92±8.29）%。0.50%組氨酸對孢子萌發的影響與0.10%的麥芽提取物效果相當，并優于0.50%的丙氨酸（表1）。綜合顯微觀察和統計的結果，可選擇葉面肥或酵母提取物作為Ahn75的營養助劑。

圖1 不同營養物質對Ahn75孢子萌發的影響（400×）Fig. 1 Effects of different nutrients on Ahn75 spore germination (400×)

表1 不同營養物質培養下鏈霉菌Ahn75孢子的萌發水平Tab. 1 The germination levels of Streptomyces Ahn75 spores cultured with different nutrients unit: %

2.2 不同潤濕劑、分散劑對放線菌孢子萌發的影響

分別檢測4種分散劑和3種潤濕劑對鏈霉菌Ahn75孢子萌發率的影響，結果顯示（表2），液體分散劑吐溫80、木質素磺酸鈉、木質素磺酸鈣在0.50%的質量分數下均與Ahn75孢子具有較佳的生物相容性，孢子萌發率為93.50%～94.73%，其中吐溫80表現最佳，但三者處理下的孢子萌發率與對照的統計學分析顯示差異不顯著（P＞0.05），而0.50% Morwet D425則完全抑制了孢子的萌發，培養4 d后，孢子萌發率依然為0。在潤濕劑中，3種被檢潤濕劑對孢子萌發均有一定程度的抑制，其中，0.50%拉開粉對孢子萌發影響最小，其2 d的萌發率為（89.78±5.28）%；0.50% SDS處理下，孢子萌發率雖然與拉開粉處理下的孢子萌發率沒有顯著性差異，但其萌發時間與對照和拉開粉相比延長了2 d；而Morwet EFW則完全抑制了鏈霉菌孢子的萌發，培養4 d后的孢子萌發率依然為0。因此，上述7種分散潤濕劑中，吐溫80作為易獲得且對孢子萌發影響小的物質，可選作Ahn75孢子的分散劑。

在此基礎上，本文繼續考察了不同質量分數的吐溫80對Ahn75孢子萌發的影響，結果顯示（表3），當吐溫80的質量分數為0.050%時，Ahn75孢子萌發率最高，達到（124.49±4.92）%，比對照萌發水平提高了24.49%。因此，吐溫80為Ahn75孢子分散劑的最佳質量分數為0.050%。

表3 不同質量分數的吐溫80處理下Ahn75孢子的萌發水平Tab. 3 The germination levels of Ahn75 spores treated with different concentrations of Tween 80 unit: %

2.3 不同紫外保護劑對放線菌孢子萌發及紫外保護的影響

分別檢測了4種常規紫外保護劑對Ahn75鏈霉菌孢子萌發的影響，結果顯示（表4），糊精和熒光素鈉能顯著促進Ahn75孢子的萌發（P＜0.05），其中糊精的促萌發效果最顯著（P＜0.01），在0.50%糊精處理下，Ahn75孢子萌發率達到（141.77±4.76）%，比對照孢子萌發率提高了41.77%，而VC和VB2對孢子萌發的影響差不多，低于對照和其他處理，但與對照相比差異不顯著（P＞0.05）。

表4 不同紫外保護劑處理下Ahn75孢子的萌發水平Tab. 4 The germination levels of Ahn75 spores treated with different UV protective unit: %

通過檢測不同質量分數糊精對Ahn75孢子萌發的影響，發現糊精質量分數在0.50%以上時，能顯著促進Ahn75孢子的萌發，且1.00%的糊精比0.50%的糊精具有更顯著的促孢子萌發效果（表5）。因此，可選擇質量分數為1.00%的糊精作為紫外保護劑。

表5 不同質量分數的糊精處理下Ahn75孢子的萌發水平Tab. 5 The germination levels of Ahn75 spores treated with different concentrations of dextrin unit: %

考慮到紫外保護劑對菌劑更重要的作用是其對功能菌株的紫外保護功能，故本研究繼續考察了各紫外保護劑在質量分數為1.00%時Ahn75孢子紫外線照射后的萌發水平，結果如表6所示。從表6中可知，與未經紫外線照射的對照1相比，經紫外線照射2 min后的對照2孢子萌發率顯著降低（P＜0.01），存活率僅為（45.31±3.93）%，但添加了糊精并經紫外線照射后的孢子萌發率比未添加紫外保護劑但經紫外線照射的CK2孢子萌發率顯著提高（P＜0.05），說明糊精能有效保護Ahn75孢子免受紫外線照射的傷害。此外，VB2的添加與CK2相比，孢子萌發差異不顯著，而VC和熒光素鈉的添加使Ahn75孢子萌發率顯著降低。由此可見，VB2、VC和熒光素鈉不能保護Ahn75孢子免受紫外線傷害。

表6 不同紫外保護劑對Ahn75孢子抗紫外線保護水平Tab. 6 The UV protection levels of different UV protective on Ahn75 spores unit: %

綜合各紫外保護劑對Ahn75孢子萌發及紫外線保護的水平，本文選擇糊精作為Ahn75菌劑的紫外保護劑。

2.4 不同穩定劑對放線菌孢子萌發及孢子懸浮液穩定性的影響

分別檢測羧甲基纖維素鈉、海藻酸鈉、海藻酸鉀和黃原膠4種穩定劑與Ahn75孢子的生物相容性，結果顯示，4種穩定劑中，海藻酸鈉對鏈霉菌孢子的生物相容性最佳，當用質量分數為0.15%的海藻酸鈉處理時，Ahn75孢子萌發率為（97.67±17.59）%，其次為海藻酸鉀和羧甲基纖維素鈉，黃原膠處理下孢子萌發率最低（表7）。但各穩定劑處理后的孢子萌發率經統計學分析，差異均不顯著。

表7 不同穩定劑處理下Ahn75孢子的萌發水平Tab. 7 The germination levels of Ahn75 spores treated with different stabilizers unit: %

根據生物相容性結果，本文選擇羧甲基纖維素鈉、海藻酸鈉和海藻酸鉀三種穩定劑，分析了它們對孢子懸浮劑的穩定性能，結果如圖2所示。從圖2可看出，加入海藻酸鈉后，孢子懸浮液在370 nm處的吸光度值下降最緩慢，30 min后才降至最低值，而加入羧甲基纖維素鈉和海藻酸鉀后，孢子懸浮劑的吸光度值分別在2 min和15 min內降至最低值。該結果說明，加入海藻酸鈉的孢子懸浮液的穩定性維持時間最長，其次為羧甲基纖維素鈉和海藻酸鉀。

圖2 不同穩定劑處理下Ahn75孢子懸浮液的吸光度變化曲線Fig. 2 The absorbance curves of Ahn75 spore suspension mixed with different stabilizers

綜合穩定劑和Ahn75孢子的生物相容性及其對孢子懸浮液的穩定水平，可選擇海藻酸鈉作為Ahn75孢子的穩定劑。

2.5 Ahn75菌劑對水稻稻瘟病的生物防效

考慮到吐溫的分散促萌發效果較好，本文將Ahn75菌劑以適量孢子和0.05%的吐溫水溶液進行基本配置，然后分別將葉面肥或酵母提取物、糊精和海藻酸鈉按最佳含量與Ahn75孢子吐溫懸浮液混合，配制成含0.50%葉面肥、0.05%酵母提取物、1.00%糊精、0.15%海藻酸鈉和混合助劑的Ahn75菌劑。分蘗期噴施處理盆栽水稻，發現葉面肥等助劑均能顯著降低水稻葉瘟的發病率和病情指數（表8），其中葉面肥、酵母提取物和混合助劑對葉瘟發病率的影響最顯著，生物防效達25.91%～31.81%，而酵母提取物、糊精和混合助劑對葉瘟病情指數影響最顯著，生物防效達31.36%～38.06%。

表8 添加不同助劑的Ahn75菌劑處理后水稻葉瘟發病情況Tab. 8 Incidence of rice leaf blast treated with Ahn75 agents with different adjuvants unit: %

3 討論

利用生防微生物活體對植物病害進行生物防治，不僅可以避免化學農藥和農用抗生素造成的自然選擇壓力，還可增加土壤有益微生物的豐度，有效改善土壤的微生態結構，其前景廣闊［20］。但微生物制劑的防效受田間環境和定殖水平等因素影響存在不穩定性［21］。選擇合適的微生物助劑，除了可改善微生物產品的分散性、懸浮率、穩定性等性能［13］，還能增加制劑的表面張力和滲透能力［21］，最終提高功能微生物的藥效［22］，是潛力巨大的微生物產品能否走向市場最為關鍵的一步。

不過，對于以活菌為主要有效成分的微生物產品來說，功能微生物在制劑中的存活水平是其發揮作用的前提。為了更好地利用水稻內生鏈霉菌Ahn75阻斷稻瘟病病原菌孢子在水稻葉片上的傳播，本研究以Ahn75的孢子為研究對象，通過液體和固體兩種培養方式檢測了不同助劑對鏈霉菌孢子萌發的影響，分析了紫外保護劑和穩定劑對孢子懸浮液性能的影響，并評估了各助劑對Ahn75生物防效的影響。研究發現，營養物質普遍能促進鏈霉菌孢子的萌發，以營養成分豐富的葉面肥、酵母提取物的促萌發效果最顯著，而常用于放線菌和細菌培養的營養成分蛋白胨和麥芽提取物以及葉面肥中常出現的促生長氨基酸組氨酸和丙氨酸雖也能促進孢子的萌發，但效果卻遠低于葉面肥和酵母提取物，可能營養物質豐富的營養成分更有助于孢子的萌發。此外，在幾種被檢的其他助劑中，大部分物質對Ahn75的孢子未表現出顯著的促萌發和抑制萌發作用，但分別可用于分散劑和紫外保護劑的吐溫和糊精卻具有顯著的促孢子萌發作用。吐溫80是一種最常用的乳化劑，它不僅可以降低懸浮液的表面張力，提高孢子在水中的分散度, 而且能促進某些真菌孢子的萌發［23］。張擁軍等［24］也發現糊精與粘帚霉孢子具有較好的生物相容性，且能有效保護其孢子免受紫外線的傷害。而兩個潤濕劑候選物質Morwet D425和EFW卻表現出了與其他研究者不一致的結果。本研究發現，Morwet D425和EFW以0.50%的質量分數存在時能完全抑制Ahn75孢子的萌發。潘以樓等［25］也發現，Morwet D425和EFW在12.5～100.0 g/L的質量濃度下能完全殺滅短小芽孢桿菌TW-2的菌體和芽胞。但也有研究發現，Morwet D425和EFW與枯草芽孢桿菌B99-2、B5具有較好的生物相容性，并被用于這兩株生防菌可濕性粉劑的助劑［16，26］。由此可知，同樣的助劑不一定適配不同的功能微生物，對于每一種功能微生物來說，都需要篩選最合適的助劑。

此外，本文還進一步通過盆栽試驗證實了助劑對Ahn75孢子懸浮液的增效作用，特別是酵母提取物和混合助劑對鏈霉菌孢子抗稻瘟病的增效作用顯著高于其他單一助劑。綜合考慮各助劑對菌劑抗病性能和物理性狀的作用，可以確定將酵母提取物、吐溫、糊精和海藻酸鈉一起與鏈霉菌孢子進行復配，是生產鏈霉菌菌劑的最佳選擇。

本文在微生物制劑主要性能檢測中發現，雖然助劑與鏈霉菌孢子生物相容性都表現出較好的效果，但助劑對菌劑性能，特別是抗紫外線性能和穩定性能的改善還有待加強。與化學農藥和其他微生物菌劑相比，該菌劑對水稻稻瘟病的防治效果還達不到市場應用需求。可能原因有三：一是拮抗菌株接種頻率過低，菌株在水稻內部定殖數量可能有限，導致能在水稻體內發揮作用的功能菌株豐度較低；二是本次助劑篩選范圍不夠廣，可用助劑的使用質量分數有待進一步優化，特別是紫外保護劑對菌株的紫外防護功能還有待提升，能促進鏈霉菌孢子定殖水稻組織的助劑還有待進一步篩選；三是內生鏈霉菌定殖水稻的最佳時期和環境條件等有待進一步探究，獲得內生菌定殖水稻的最佳條件可使用最少量的菌劑達到最大的生物防效，不僅節約了微生物菌劑的成本，還能提高其生物防效。

未來農業生產中生物產品的施用將主要依賴于無人機作業，以避免傳統人工噴施勞動強度大、效率低等問題。因此，為潛在生防微生物菌株篩選能提高微生物液體菌劑的分散性、穩定性、環境耐受性和定殖力的助劑將是未來生物制劑的主要研究方向之一。