茶樹油飼料添加劑對肉仔雞生長性能、血清生化及免疫性能的影響

張玥，石青青，顧秋麗，劉夢月，楊琳燕，胡德寶，范惠章，馬學軍，馬吉飛*

（1.天津農學院動物科學與動物醫學學院/天津市農業動物繁育與健康養殖重點實驗室，天津 300384；2.天津嘉喜諾生物科技有限公司，天津 300384；3.河北康達畜禽養殖有限公司，河北 廊坊 065000）

茶樹油是從互葉白千層樹枝葉中提取的揮發性油狀液體，其中具有多種天然活性物質，主要包括4-松油醇、γ-松油醇、α-松油醇、1,8-桉葉油素、α-油烯等環烯烴類和烯醇類化合物[1]，具有較強的抗菌[2]、抗炎[3]、抗病毒[4]、抗寄生蟲[5]和調節免疫[6]等作用，具有極大的藥用價值。

在畜牧生產中使用茶樹油添加劑已逐步得到認可，丁兆坤等[7]研究發現在飼糧中添加適量茶樹油可達到顯著提高羅非魚的增重率和豐滿度的效果，王淑楠等[8]的研究表明斷奶仔豬日糧中添加適量茶樹油能提高斷奶仔豬的肝臟及胸腺指數并降低仔豬腹瀉率，郭乙冰[9]的研究表明在日糧中添加茶樹油能夠提高贛西山羊臟器指數，提高山羊的肌肉品質。綜上所述，茶樹油不僅可促進畜禽生長，而且能改善畜禽肉類的營養價值，是一種具有發展前景的天然飼料添加劑。本試驗擬通過研究茶樹油飼料添加劑對肉仔雞生長性能、血清生化指標、臟器指數以及雞新城疫病毒、H9亞型禽流感病毒和傳染性法氏囊炎病毒抗體效價的影響，為茶樹油添加劑在肉仔雞生產中的應用提供科學依據。

1 材料

試驗用茶樹油原液，由天津中澳嘉喜諾生物科技有限公司提供，生產批號為20170501；茶樹油飼料添加劑，由天津農學院研制（含茶樹油10%）；1日齡平均初始體重相近的羅斯308肉雞630只，由河北康達畜禽養殖有限公司提供；新流二聯油苗（H9）、新支二聯苗、Ⅳ系新城疫疫苗，由天津瑞普生物技術有限公司提供；雞新城疫、H9禽流感和法氏囊陽性血清及抗原，由中國獸藥監察所提供；試驗所用基礎日糧按照我國《雞飼養標準》（NY/T 33—2004）[10]標準配制，飼料由河北康達畜禽科技有限公司提供，飼糧營養水平見表1。

表1 飼料營養水平保證值 %

2 方法

2.1 試驗設計與分組

將1日齡、平均初始體重相近的羅斯308肉仔雞630只隨機分為7組，每組6個重復，每個重復15只雞。試 驗 分0~7日齡、8~14日 齡、15~35日齡、36~42日齡4個階段進行。7個組分別在飲水中添加0、50、100、200、400、800、1 600 mg·L-1茶樹油添加劑。試驗雞采用三層籠養，自由采食與飲水。試驗期42 d。按照肉仔雞常規程序免疫和飼養管理。

2.2 指標測定

2.2.1 生產性能

每日觀察各組肉仔雞的淘汰情況，記錄成活率。試驗開始時稱量肉仔雞初始體重，試驗期每日統計飼料消耗量，于35日齡測定肉仔雞空腹體重，計算1~35日齡平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。各指標計算公式：成活率=成活數量/總數量×100%；平均日增重（ADG）=肉仔雞總增重/飼喂天數；平均日采食量（ADFI）=各組總飼料消耗量/飼喂日數；料重比（F/G）=平均日采食量/平均日增重。

2.2.2 血清生化指標

分別于14日齡、35日齡，每組隨機取6只肉仔雞，翅下采血制備樣品。14日齡時測定血清中肌酐（CRE）和谷氨酸氨基轉移酶（ALT），35日齡時加測血清白蛋白（ALB）、堿性磷酸酶（ALP）、天冬氨酸氨基轉移酶（AST）、血糖（GLU）、磷（P）、總蛋白（TP）和尿素（UREA）。

2.2.3 臟器指數

于35日齡時，每組隨機取6只肉仔雞，屠宰后取心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟及法氏囊稱重，計算各臟器指數。

2.2.4 抗體水平

采集7日齡、14日齡、35日齡和42日齡肉雞血清，對雞新城疫病毒（NDV）抗體、H9禽流感病毒（AIV）抗體和傳染性法氏囊炎病毒（IBDV）抗體水平進行檢測，檢測NDV、AIV抗體采取血凝抑制法，取潔凈的微量反應板，每孔加50 μL生理鹽水，第11孔加100 μL稀釋液。取被檢血清50 μL加入第1孔并混合均勻，從第1孔吸出50 μL加入第2孔，如此進行倍比稀釋到第10孔，從第10孔吸出50 μL棄去，第11孔和第12孔空白。給1~11孔各加4單位的抗原50 μL，第11孔不加血清，作為抗原對照，第12孔不加血清和抗原作為紅細胞對照。振蕩混勻，置37℃溫箱中或室溫下作用20~30 min。加1%紅細胞懸液，每孔加50 μL，置37℃作用20~30 min后觀察結果。待第11孔抗原對照孔的紅細胞均勻鋪在管壁（100%凝集），檢查各孔的紅細胞抑制情況。將反應板45°傾斜，沉于管底的紅細胞若沿斜面流動則表明紅細胞未被或不完全被病毒凝集，若孔底紅細胞鋪平凝固，傾斜后不流動則表明紅細胞被病毒凝集，以完全抑制紅細胞凝集的最高血清稀釋倍數作為待檢血清抗體效價。IBDV抗體檢測采取瓊脂擴散法，使用含8%的NaCl磷酸緩沖液制備瓊脂濃度1%、厚度3~4 mm的瓊脂板，梅花形打孔，將中心孔加IBDV抗原20 μL，周圍孔加入20 μL倍比稀釋的被檢血清，留1孔加雙蒸水作空白對照。37℃孵育24~48 h，觀察抗原抗體產生的白色沉淀線。

2.3 統計分析

試驗數據采用SPSS 17.0統計軟件進行方差分析，以P＜0.05為顯著水平，數據以“平均值±標準誤”表示。

3 結果與分析

3.1 生產性能

飲水中添加茶樹油添加劑對肉仔雞生產性能的影響見表2和表3。由表2和表3可知，35日齡時試驗5組、試驗6組肉仔雞體重明顯低于對照組、試驗1組與試驗2組（P＜0.05），而試驗1組、試驗2組與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）。試驗6組平均日增重、平均日采食量顯著低于對照組及試驗1~4組（P＜0.05）；料重比提高，與其他組相比差異顯著（P＜0.05）。

表2 茶樹油添加劑對肉仔雞1~35日齡體重的影響 g

表3 茶樹油添加劑對1~35日齡肉仔雞生產性能的影響

3.2 血清生化指標

飲水中添加茶樹油添加劑對肉仔雞血清生化指標的影響見表4。由表4可知，14日齡時，各組之間CRE指標無顯著差異（P＞0.05），試驗3組ALT顯著高于對照組、試驗1組、試驗4組和試驗5組（P＜0.05）。35日齡時，各組間ALB、ALP和AST指標并無顯著差異（P＞0.05）；各試驗組CRE指標顯著低于對照組（P＜0.05）；試驗5組、試驗6組ALT指標顯著高于其他各組（P＜0.05）；試驗6組GLU指標顯著高于試驗3組和試驗4組（P＜0.05），其P、TP指標則顯著高于包括對照組的其他各組（P＜0.05）；試驗4組的TP指標則顯著低于對照組（P＜0.05）；所有試驗組UREA指標均低于對照組，尤其試驗1組、試驗4組和試驗6組與對照組相比有顯著差異（P＜0.05）。

表4 茶樹油添加劑對肉仔雞血清生化指標的影響

3.3 臟器指數

飲水中添加茶樹油添加劑對肉仔雞臟器的指數影響見表5。

由表5中數據可知，心臟指數試驗6組顯著高于試驗2~4組（P＜0.05）；肝臟和肺臟指數試驗5組顯著高于對照組（P＜0.05）；各組間肉仔雞脾臟指數無顯著差異（P＞0.05）；腎臟指數試驗4組和試驗5組顯著高于對照組（P＜0.05）；試驗5組的法氏囊指數顯著高于除對照組和試驗6組外的其他各組（P＜0.05），試驗6組顯著高于試驗2組（P＜0.05）。

表5 茶樹油添加劑對35日齡肉仔雞臟器指數的影響

3.4 抗體水平

肉仔雞血清抗體效價檢測結果見表6~表8，14日齡時試驗5組和試驗6組AIV抗體水平顯著高于對照組（P＜0.05），試驗6組NDV抗體水平顯著高于對照組（P＜0.05），試驗4組和5組NDV抗體水平顯著低于對照組（P＜0.05）；35日齡時，試驗1~3組的AIV抗體水平顯著低于對照組（P＜0.05），NDV、IBDV抗體水平各組間無顯著差異（P＞0.05）；42日齡時，試驗1組、試驗2組和試驗5組的AIV抗體水平顯著高于對照組（P＜0.05），除試驗4組和試驗6組NDV抗體水平顯著低于對照組（P＜0.05）外，其他各組NDV與IBDV抗體水平與對照組無顯著差異（P＞0.05）。

表6 茶樹油添加劑對肉仔雞血清AIV抗體水平的影響 lb

表7 茶樹油添加劑對肉仔雞血清NDV抗體水平的影響 lb

表8 茶樹油添加劑對肉仔雞血清IBDV抗體水平的影響 lb

4 討論

4.1 茶樹油添加劑對肉仔雞生產性能的影響

植物精油是植物生長過程中產生的天然油性物質，含有大量的萜、烯、酚和酮等生物活性成分，作為添加劑能夠對細菌進行選擇性抑制[11]，其獨特的氣味能刺激禽類采食，改善腸道微生物群結構以及絨毛形態[12]，提高禽類腸道內消化酶的活性[13]，從而提高機體對營養物質的吸收，有利于禽類生長。有研究發現使用含有香芹酚和百里香酚成分的包被植物精油能夠提高麻黃肉雞全期末重[14]，飼糧中添加復合植物精油可提高中后期肉雞體重、增重及飼料轉化率[15]。在本試驗中，35日齡時試驗1組和試驗2組肉仔雞的體重與對照組相比沒有顯著差異，除試驗6組外各組之間料重比的差異也并不顯著。然而隨著茶樹油添加劑劑量增加，肉仔雞體重呈下降趨勢，飼料的轉化率降低，添加劑量至1 600 mg·L-1時肉仔雞料重比與其他各組相比顯著升高，可能是因為肉仔雞在飲水過程中攝入過量油劑導致機體代謝負擔增加，對生長發育有一定負面影響。但整體看來，當茶樹油添加劑使用量低于100 mg·L-1時，肉仔雞的料重比和末期體重與對照組相比并沒有顯著差異。

4.2 茶樹油添加劑對肉仔雞血清生化指標的影響

血清生化指標能夠反映動物機體代謝和組織細胞通透性[16]。ALT和AST為細胞內酶，正常情況下多存在于肝細胞與心肌細胞，而在血清中的活性很低。但當機體組織細胞受損造成通透性增大時，血清中轉氨酶水平會升高，因此轉氨酶的活性能夠反映機體肝臟和心臟的健康狀況。有研究表明使用適量植物精油復合物能夠增強肝細胞膜的穩定性，降低血清轉氨酶活性[17]。本試驗中，在35日齡時試驗1~4組ALT與AST水平與對照組相比沒有顯著差異，而當添加劑劑量超過400 mg·L-1時，試驗組ALT水平顯著高于對照組，可能與攝入茶樹油過量造成機體肝臟細胞損傷有關。ALP由成骨細胞和肝膽合成分泌，能夠反映骨組織新陳代謝的情況[18]。試驗中試驗1~4組的ALP水平雖與對照組相比沒有顯著差異，但均高于對照組，說明在適當劑量下使用茶樹油添加劑對肉仔雞的骨骼發育具有一定作用。血清中TP、ALB含量常作為反映動物機體蛋白質代謝水平和氨基酸平衡狀況的指標[19]。試驗中試驗1~3組的TP含量與對照組相比雖差異不顯著但均高于對照組；而各試驗組的ALB水平與對照組相比沒有顯著差異，說明適當劑量的茶樹油添加劑能夠在一定程度上提高機體總蛋白生成效率，促進肉仔雞的生長發育。CRE是在肌肉中從磷酸肌酸轉化而成，其血清水平取決于機體內肌酐的產量和腎臟代謝能力。在本試驗中各試驗組的CRE水平均顯著低于對照組，說明添加茶樹油對肉仔雞腎臟排氮功能有一定影響。UREA是蛋白質代謝的產物，如果機體UREA水平較高，表示機體內蛋白質分解速度變慢，腎功能發生障礙[20]。結果表明，各試驗組的UREA含量全部低于對照組，證明使用茶樹油在一定程度能夠促進腎臟代謝，提高蛋白質分解效率。GLU作為體內代謝過程中的重要物質，P是機體參與代謝過程、調節酸堿平衡和構成組織的重要物質，兩者都是能夠反映機體能量代謝情況的指標。試驗中，35日齡時，試驗1~5組的GLU與P水平與對照組之間沒有顯著差異，說明在一定劑量范圍內使用茶樹油對肉仔雞的整體能量代謝情況并無影響。

4.3 茶樹油添加劑對肉仔雞臟器指數的影響

研究表明在肉雞飼養過程中添加抗氧劑能夠減輕自由基對機體的損傷，有效地預防和治療例如腹水綜合征等肺動脈高壓等血管性疾病[21]。本試驗中試驗1~4組在肺臟指數方面與對照組沒有顯著差異，而心臟指數都低于對照組，這可能與茶樹油對機體內自由基的清除和抗氧化能力增強有關。肝臟是消化系統中最大的消化腺，具有儲存糖元、分泌膽汁、合成分泌性蛋白質等功能[22]。有研究表明[8]使用茶樹油飼喂的斷奶仔豬其肝臟及胸腺指數有所提高。在本試驗中，除試驗1組外，其他試驗組隨著添加劑用量增大肝臟指數都高于對照組，可能是因為茶樹油富含的萜烯類和醇類等多種有效活性成分對機體具有調節代謝的作用。腎臟是機體內重要的代謝器官，負責將代謝產物排出體外，維持機體水分、電解質和酸堿的平衡[23]。在本試驗中，雖然試驗1~3組的腎臟指數與對照組之間沒有顯著差異，但隨著茶樹油添加劑用量的增加，試驗組的腎臟指數也隨之升高，試驗4組和5組腎臟指數與對照組相比出現顯著差異，說明茶樹油對促進動物腎臟的生長、維持動物機體內環境穩定有一定的積極作用。法氏囊是禽類中樞免疫器官，脾臟屬于外周免疫器官。研究結果表明，澳洲茶油精油能夠在肉雞養殖中后期促進肉雞法氏囊、脾臟的發育[24]。在本試驗中，使用茶樹油添加劑的試驗組脾臟指數與對照組相比雖無顯著差異，但基本都高于對照組，試驗5組（800 mg·L-1）和試驗6組（1 600 mg·L-1）的法氏囊指數高于對照組但差異并不顯著，說明茶樹油可在一定程度上促進肉仔雞脾臟和法氏囊發育。

4.4 茶樹油添加劑對肉仔雞AIV、NDV和IBDV抗體效價的影響

有研究表明，在飼糧中添加50~150 mg·kg-1桉樹精油可提高肉雞生長性能，顯著提高肉雞的抗氧化機能，提高肉雞免疫器官指數和血清新城疫抗體效價[25]；在肉仔雞日糧中添加牛至油，精油試驗組肉雞血清中新城疫抗體效價顯著提高，免疫器官指數相對增加[26]。本試驗在注射新流二聯油苗7 d后，試驗5組和試驗6組肉仔雞AIV抗體水平基本高于對照組，但差異不顯著；42日齡時所有試驗組AIV抗體水平基本皆高于對照組；而接種Ⅳ系新城疫疫苗后，7日齡時除試驗6組外其他各試驗組NDV抗體水平與對照組相比沒有顯著差異，42日齡時試驗1~3組和試驗5組NDV抗體水平與對照組沒有顯著差異。IBDV主要感染未成熟的B細胞或B細胞前體細胞[27]，而法氏囊是B細胞發育成熟的場所，其發育情況直接關系到肉雞B細胞的增殖與發育。試驗中42日齡時各試驗組IBDV抗體水平檢測結果基本全部高于對照組，說明使用茶樹油添加劑飼喂肉仔雞一定時間后能夠促進肉雞B細胞的增殖與發育。綜合來看，茶樹油添加劑的使用劑量為50~200 mg·L-1時對肉仔雞抗體效價有提升效果。

5 結 論

試驗結果表明，在飲水中加入50~400 mg·L-1茶樹油添加劑對肉仔雞生產性能無有益影響，但能夠促進肉仔雞生長發育，增強肉仔雞免疫能力；茶樹油添加劑劑量超過400 mg·L-1時則會超過肉仔雞耐受量，造成不良反應。根據試驗結果，肉仔雞飲水中茶樹油添加劑的適宜添加量應低于200 mg·L-1。