CYP2A6、ALDH2、FOSL1基因多態性對紫杉烷類基礎化療胃癌患者療效的影響

毛 靈,王立暉

江蘇省丹陽市人民醫院腫瘤內科,江蘇丹陽 212300

胃癌是消化系統中常見的惡性腫瘤，病死率較高，研究發現80%以上的患者確診時已進展至中晚期，且伴隨廣泛侵犯、遠處轉移，錯過手術根治機會[1]。化療可以緩解晚期胃癌患者的癥狀，其中紫杉烷類細胞毒藥物聯合其他化療藥(鉑類、氟尿嘧啶類)是治療中晚期胃癌的標準化療手段[2]。腫瘤細胞的基因多態性使得腫瘤細胞呈現異質性，導致化療藥物療效存在較大的個體差異，因此針對基因多態性調整化療方案對于臨床開展精準治療具有重要指導意義。乙醛脫氫酶(ALDH2)、FOS樣抗原1(FOSL1)均在腫瘤的發生、發展中發揮重要調控作用，如FOSL1為原癌基因c-Jun、KRAS的下游效應分子，可促進腫瘤細胞的增殖、分化，ALDH2基因多態性與胃癌易感性存在相關性，突變可導致乙醛代謝異常，乙醛是嚴重致癌物質，在長期飲酒、食用辛辣和腌制食物的人群中ALDH2基因突變者具有更高的胃癌發生風險[3-5]。細胞色素酶2A6(CYP2A6)基因多態性影響CYP2A6肝藥酶的表達、酶活性，可影響腫瘤化療藥物(5-氟尿嘧啶)的血藥濃度，從而影響化療藥物的治療效果[6]。本研究通過檢測ALDH2、FOSL1、CYP2A6基因多態性，并研究其與胃癌患者紫杉烷類基礎化療臨床效果的相關性，探討3者在胃癌治療中的臨床意義，為胃癌精準醫療探尋理論依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年5月至2020年4月于本院接受治療的152例胃癌患者為研究對象，均接受紫杉烷類基礎化療。本研究獲得本院倫理委員會批準。納入標準：(1)符合《胃癌診療規范(2011年版)》[7]中關于胃癌的診斷標準，經過病理切片、影像學檢測確診；(2)病理學分期為Ⅲ～Ⅳ期，不適合手術切除，至少有1個可測量病灶；(3)機體狀況可耐受化療，Karnofsky評分≥60分，預計生存期≥3個月；(4)接受化療后均可完成1年隨訪，所有患者均簽署知情同意書。排除標準：(1)治療過程中存在嚴重不良反應，如神經毒性、中性粒細胞降低、外周神經炎等，危及患者生命安全；(2)入組前接受過化療；(3)合并其他危及生命的疾病；(4)嚴重心、肝、腎功能障礙；(5)哺乳期或孕產期婦女；(6)藥物過敏或者不耐受。

1.2治療方法 紫杉烷類基礎化療，對于存在基因突變的患者，可聯合靶向治療，具體用藥方案參照《胃癌的規范化治療》[8]中的常規推薦劑量。

1.3基因型分析方法 治療前抽取患者外周靜脈血3 mL，EDTA抗凝處理，3 000 r/min離心5 min，取上清保存-20 ℃待測。通過QIAAMP DNA Blood Mini Kit試劑盒提取血漿DNA，根據Genebank發布的人CYP2A6、ALDH2、FOSL1基因序列，采用Primer 5.0軟件分別對相關位點設計引物。聚合酶鏈反應(PCR)反應體系為25.0 μL，其中含10×buffer 2.5 μL、 dNTPS 1.0 μL、DNA模板1.0 μL、引物1.0 μL、Taq DNA聚合酶0.4 μL、ddH20補足。擴增方法：95 ℃條件下預變性5 min，94 ℃變性0.5 min，55 ℃退火0.5 min，72 ℃延伸10 min，共40個循環。通過試劑盒回收目標片段，處理后通過DNA測序儀完成測定。

1.4療效評價 所有患者均接受紫杉烷類基礎化療8周，臨床效果分為完全好轉(CR)、部分好轉(PR)、疾病穩定(SD)和疾病進展(PD)。CR：腫瘤病灶消失，生命體征指標正常，且持續時間至少4周；PR：病灶面積縮小≥30%，持續時間至少4周；SD：病灶面積增加≤20%，減少<30%；PD：病灶面積增加≥20%，或者出現新發病灶[8]。總體客觀緩解率=(CR+PR)/總例數×100%。

1.5統計學處理 采用SPSS20.0軟件進行數據分析。計數資料以例數或百分率表示，采用χ2檢驗進行比較，采用Log-rank檢驗比較不同基因型的生存情況，采用Cox比例風險模型評估各因素對化療效果的影響。以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1CYP2A6、ALDH2、FOSL1的基因型及等位基因頻率分布情況 CYP2A6基因有3個位點存在基因多態性，rs28399433(TT型96例、TG型48例、GG型8例)、rs8192720(CC型110例、CT型38例、TT型4例)、rs8192725(CC型105例、CT型42例、TT型5例)。ALDH2基因rs671位點GG型124例、GA型18例、AA型10例。FOSL1基因有2個位點存在基因多態性，rs1892901(GG型94例、GA型40例、AA型18例)、rs637571(GG型78例、GA型62例、AA型12例)。以上各基因位點基因型的觀測值、期望值符合Hardy-Weinberg平衡定律。

2.2臨床療效 152例患者中CR 24例、PR 62例、SD 44例、PD 22例，總體客觀緩解率(CR+PR)為56.58%(86例)。

2.3化療療效的單因素分析 依據治療效果對患者進行分組，CR和PR為化療有效組(86例)，SD和PD為化療無效組(66例)。兩組患者的TNM分期、CYP2A6 rs8192725、ALDH2 rs671、FOSL1 rs1892901基因型比較，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 化療療效的單因素分析(n/n或n)

續表1 化療療效的單因素分析(n/n或n)

2.4影響化療結局的多變量Cox模型 經過多變量校正，TNM分期(HR值為2.654)、CYP2A6 rs8192725基因型(HR值為2.085)、ALDH2 rs671基因型(HR值為2.960)以FOSL1 rs1892901基因型(HR值為1.823)影響化療結局(P<0.05)，見表2。

表2 影響化療結局的多變量Cox模型

2.5CYP2A6、ALDH2、FOSL1基因多態性對預后的影響 化療結束后隨訪1年，死亡36例。CYP2A6 rs8192725基因型CC、其他(CT、TT)死亡人數分別為20、16例，生存曲線見圖1，不同基因型死亡率差異有統計學意義(χ2=4.039,P=0.045)。ALDH2 rs671基因型GG、其他(GA、AA)死亡人數分別為25、11例，生存曲線見圖2，不同基因型病死率差異有統計學意義(χ2=4.622,P=0.032)。FOSL1 rs1892901基因型GG、其他(GA、AA)死亡人數分別為16、20例，生存曲線見圖3，不同基因型病死率差異有統計學意義(χ2=6.051,P=0.014)。

圖1 CYP2A6基因rs8192725位點CC基因型、其他基因型的生存曲線

圖2 ALDH2基因rs671位點GG基因型、其他基因型的生存曲線

圖3 FOSL1基因rs1892901位點GG基因型、其他基因型的生存曲線

3 討 論

化療是中晚期胃癌的常見治療手段，其中紫杉醇聯合鉑類、氟尿嘧啶類藥物已廣泛用于晚期胃癌的治療[9]。多項研究發現，晚期胃癌患者接受以紫杉醇為基礎的化療方案，隨訪3～5年，病死率均較高，因此研究影響患者療效的相關因素對于個性化治療具有重要意義[10-11]。基因多態性已成為影響化療藥物療效、毒性等的重要因素，如CYP2A6突變導致肝藥酶CYP2A6活性改變，突變型胃癌患者相對野生型患者具有更低的5-氟尿嘧啶血藥濃度，從而降低化療藥療效[12]。本次研究結果發現，CYP2A6基因有3個位點存在基因多態性，rs28399433、rs8192720、rs8192725，其中CYP2A6 rs8192725基因型(HR值為2.085)是影響化療結局的獨立危險因素，攜帶突變等位基因的雜合子(TC)及突變純合子(TT)對含紫杉烷類基礎化療方案的敏感率均低于野生純合子(CC)，且隨訪1年，CYP2A6 rs8192725位點CC基因型的病死率顯著低于其他基因型(TC、TT)，表明等位基因T→C突變會降低化療效果。楊鐵健等[13]研究發現，CYP2A6 rs8192725位點基因突變可影響CYP2A6 mRNA的表達，從而影響胃癌患者術后接受以替吉奧為基礎的輔助化療的預后，因此可基于個體基因組差異而指導臨床化療方案的制訂，從而實現化療的最大生存獲益。

醛類物質是嚴重的致癌物質，ALDH2可促進乙醛、其他脂肪族醛轉變成非毒性的乙酸鹽，ALDH2基因突變可影響轉變效率，進而調控腫瘤的發生、發展，且研究已證實ALDH2基因多態性與胃癌易感性存在相關性[13]。本次研究發現，ALDH2 rs671基因型(HR值為2.960)是影響化療結局的獨立危險因素，攜帶突變等位基因的雜合子(GA)及突變純合子(AA)對含紫杉烷類基礎化療方案的總體客觀緩解率均低于野生純合子(GG)，且隨訪1年，ALDH2 rs671位點GG基因型的病死率顯著低于其他基因型(GA、AA)，表明突變等位基因A會降低化療效果。ALDH2 rs671位點的野生純合子(GG)具有正常的催化乙醛活性，突變雜合子型GA的催化乙醛活性下降，而純合突變則失去催化乙醛活性，乙醛可進一步導致DNA損傷，其中N(2)-亞乙基-2，-脫氧鳥苷為DNA損傷產物，故而突變型具有更高的腫瘤發生風險[14]。研究認為[15]，ALDH2 rs671位點的等位基因G突變為A，使得谷氨酸突變成賴氨酸，導致相應蛋白質的結構功能域發生改變，增加了DNA損傷修復能力，故而此類患者對含紫杉烷類基礎化療藥物的敏感性明顯降低。

FOSL1 mRNA可在胃癌、乳腺癌、卵巢癌等惡性腫瘤中異常表達，體外研究證實鱗狀細胞癌細胞系中FOSL1基因高表達，可促進腫瘤細胞的生長、增殖、侵襲等[16]，其中胃癌高表達可調節PI3k/Akt 、p53信號通路而促進胃癌的發生、發展。本次研究結果顯示，FOSL1基因的rs1892901、rs637571位點存在基因多態性，其中FOSL1 rs1892901基因型(HR值為1.823)與化療結局密切關聯，該位點純合突變基因型(GG)病死率均低于其他基因型(P<0.05)，表明純合突變可降低紫杉烷類基礎化療療效，增加胃癌患者死亡風險。FOSL1基因編碼的亮氨酸拉鏈蛋白參與JUN家族蛋白形成異聚體，調控腫瘤細胞的增殖、分化，盧敏瑩等[17]和劉凱華等[18]通過體外細胞實驗證實經miR-200c-3p靶向野生型FOSL1可增加乳腺癌對化療的敏感度，過表達的FOSL1可上調乳腺癌細胞對化療藥物的耐受程度，結合本次研究結果可推測FOSL1基因rs1892901位點多態性影響胃癌對含紫杉烷類基礎化療藥的靈敏度，從而影響胃癌患者的療效。另外，本次研究存在一定局限性，納入樣本量有限，研究結果可能存在一定程度偏倚。ALDH2、FOSL1、CYP2A6基因多態性在化療靈敏度方面的相互作用尚不明確，所以下一步應該擴大樣本量、多樣性進行充分論證。

綜上所述，胃癌患者CYP2A6、ALDH2、FOSL1基因多態性可影響紫杉烷類基礎化療的療效以及生存率，提示可根據患者基因型來指導個體化治療。