rhIL-2聯合冷凍療法對子宮頸炎合并HPV感染患者免疫功能、氧化應激的影響

張裕龍 張裕斌 姜俊敏

HPV 作為雙鏈DNA 病毒，是誘發女性子宮頸癌及癌前病變的主要危險因素，主要表現為白帶異常、性交痛等，且極易復發，對患者身心健康及生活質量產生嚴重影響[1]。目前，現代醫學治療HPV尚未完全明確。冷凍療法作為臨床常見手段，其主要利用制冷劑快速產生的低溫對宮頸病變組織局部的血液循環產生阻滯，從而促進組織修復。而西藥作為臨床主要治療手段，其療效表現不一[2-3]。注射用重組人白介素-2（rhIL-2）作為常用藥物可有效促進淋巴細胞生長、分化，具有良好抗病毒感染作用，在改善HPV 感染方面發揮顯著效果。但有研究指出，單一治療方案雖可有效改善患者癥狀，但仍有部分患者難以達到預期療效，為進一步提高治療效果，多考慮聯合治療方案[4-5]。本研究通過rhIL-2 結合冷凍療法治療HPV 感染患者，研究其對氧化應激、炎癥因子水平的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020 年1-12 月泰和縣中醫院收治的97 例子宮頸炎合并HPV 感染患者。納入標準：（1）符合文獻[6]《HPV 感染疾病相關問題專家共識（2017）》中相關診斷標準，陰道B 超、細胞學及病理活檢等檢查確診為子宮頸炎合并HPV 感染；（2）存在接觸性出血、白帶異常等癥狀；（3）高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）為陽性。排除標準：（1）心腎等器質性功能不全；（2）合并子宮頸異常出血、子宮頸上皮內瘤變；（3）合并子宮內膜或子宮頸惡性病變；（4）妊娠期、哺乳期婦女；（5）合并免疫缺陷類疾病；（6）近1 個月接受過相關治療；（7）對本研究藥物存在禁忌證。使用隨機數字表法將患者分為對照組48 例和觀察組49 例。本研究經醫院倫理委員會批準，嚴格遵循倫理原則，患者及其家屬知情同意。

1.2 方法 對照組采用單純冷凍療法（ErbokoCA多功能冷凍治療儀）治療，于月經周期結束后3 d接受治療。根據病變范圍及深度確定不同型號的探頭，探頭消毒，將探頭面覆蓋病灶，通電制冷后接觸宮頸，使用CO2氣體冷凍病灶組織表面。治療時需將冷凍探頭接觸子宮頸2 次，3 min/次，間隔5 min 施以解凍，1 次/月。觀察組給予冷凍療法聯合rhIL-2（生產廠家：北京四環生物制藥有限公司，批準文號：國藥準字S10970017，規格：20 萬IU）治療，將100 萬U 注射用rhIL-2 結合2 mL 滅菌注射用水，經皮下注射給藥，1～2 次/周。冷凍療法同對照組。兩組均連續治療2 個月。

1.3 觀察指標及判定標準

1.3.1 比較兩組治療前后臨床體征評分 包括陰道分泌物異常、子宮頸炎癥深度、子宮頸炎癥面積。陰道分泌物異常：陰道分泌物白帶正常顏色為白色、透明且無異味，而子宮頸炎患者的白帶為有顏色或有異味。子宮頸炎癥深度：根據患者炎癥沿闊韌帶底部蔓延深度判斷子宮頸炎癥深度。子宮頸炎癥面積：根據患者炎癥沿子宮骶韌帶擴展范圍判斷子宮頸炎癥面積。根據患者臨床特征的嚴重程度進行打分，每項評分的范圍為0～5 分，評分越低，說明癥狀越輕，表示患者經治療后不良體征的改善情況越好，治療效果越好。

1.3.2 比較兩組疾病轉歸情況 包括HPV-DNA 載量和轉陰情況。HPV-DNA 載量測定：以無菌棉拭子于子宮頸管內旋轉停留幾秒后取出，以1 mL 無菌生理鹽水洗脫，提取細胞總RNA，對其含量、純度進行檢測，逆轉錄處理后獲得cDNA，使用Primer 5.0 軟件設計引物，采用2-△△Ct方法計算，內參U6。設置反轉錄反應條件：25 ℃ 10 min，40 ℃60 min，85 ℃ 5 min；設置擴增條件：94 ℃ 20 s、72 ℃30 s、60 ℃ 30 s，35個循環。RLU/CO 是HPV 檢測中的判斷標準。如果檢測樣本中RLU/CO≥1.0，則為宮頸的人乳頭瘤病毒感染為陽性，通常RLU/CO 的值越高，則表示感染的越嚴重。如果RLU/CO<1.0，則為宮頸的人乳頭瘤病毒感染為陰性。

1.3.3 比較兩組免疫功能指標 分別于兩組治療前后采集空腹外周靜脈血5 mL，常溫靜置，高速離心（轉速：3 000 r/min，半徑：12 cm）10 min，分離上清，采用雙抗體夾心ELISA 法測定血清IgA、IgG、IgM 水平，設置酶標板為空白孔、標準孔、待測樣品孔，每孔內均加入50 μL 稀釋液，后依次加入樣品稀釋液、標準品、待測樣片各50 μL，輕晃均勻，酶標板覆膜，室溫孵育2 h。棄孔內液體，甩干，清洗反應板。加入IgA、IgG、IgM 檢測液100 μL/孔，覆膜，常溫孵育60 min，棄液體，甩干、洗滌反應板，加入100 μL/孔底物溶液，遮光顯色0.5 h，加入終止液，輕彈酶標板終止反應。酶標儀（型號iMark，Bio-RAD 公司）450 nm 處測定吸光值，由高資歷檢驗醫生嚴格遵循試劑說明書進行操作。

1.3.4 比較兩組超氧化物歧化酶（SOD）水平 分別采集兩組治療前后空腹外周靜脈血5 mL，常溫靜置，高速離心（轉速：3 000 r/min，半徑：12 cm）10 min，分離上清，采用黃嘌呤氧化酶法測定，取聚苯乙烯試管，將其分為測量管、對照管。提取樣品后，于上清中加蒸餾水，體積是上清的10 倍，將樣品配制為濃度1%。加1.0 mL 試劑盒內試劑于測量管、對照管，在試劑1、2、3、4 內各加入0.1 mL，然后測量管加入樣品50 μL，在對照管內加50 μL 蒸餾水，待加樣后，利用旋渦混勻器混勻，恒溫水浴箱內放置40 min。顯色：加入2 mL 顯色劑于對照管、測量管內，室溫放置10 min。在波長550 nm，1 cm 光徑條件下比色，根據分光光度計算。

1.3.5 比較兩組治療前后丙二醛（MDA）水平 采用硫代巴比妥酸法測定，取用聚苯乙烯試管，將其分為標準管、標準空白管及測量管、測量空白管，分別在標準管中加入10 nmol/L 四乙氧基丙烷0.1 mL與試劑盒試劑，加0.1 mL 無水乙醇、試劑于標準空白管，加入0.1 mL 肌肉組織勻漿上清液、試劑于測量管，測量空白管加肌肉組織勻漿0.1 mL 的上清液與試劑，充分混勻，標準管、標準空白管、測量管均置入3 mL 的硫代巴比妥酸與1 mL 的雙蒸水，依次加入3 mL 硫代巴比妥酸與50%冰醋酸1 mL 于測量空白管內。混勻，保鮮薄膜扎緊試管口，留一針孔，95 ℃水浴40 min，使用后流水進行冷卻，高速離心10 min，分離上清，加入比色皿內待檢，使用蒸餾水調零分光光度計算出MDA 值。

1.3.6 比較兩組療效 治療后評估兩組臨床療效，顯效：子宮頸光滑、陰道分泌物恢復正常，兩組子宮頸糜爛面積縮小≥80%；有效：陰道分泌物減少，子宮頸糜爛面積縮小≥50%；無效：陰道分泌物未減少甚至增加，子宮頸癥狀無明顯變化甚至加重。總有效=顯效+有效。

1.4 統計學處理 采用SPSS 20.0 軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（±s）表示，比較采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗。以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 兩組一般資料比較，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組臨床體征評分比較 治療前，兩組陰道分泌物異常、子宮頸炎癥深度、子宮頸炎癥面積評分比較，差異均無統計學意義（P>0.05）；治療后，觀察組陰道分泌物異常、子宮頸炎癥深度、子宮頸炎癥面積評分均低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表2。

表2 兩組臨床體征改善評分比較[分，（±s）]

表2 兩組臨床體征改善評分比較[分，（±s）]

2.3 兩組疾病轉歸情況比較 治療前，兩組HPVDNA 載量比較，差異無統計學意義（P>0.05）。治療后，觀察組HPV-DNA 載量低于對照組，HPV 轉陰率高于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表3。

表3 兩組疾病轉歸情況比較

2.4 兩組免疫功能比較 治療前，兩組IgA、IgG、IgM 水平比較，差異均無統計學意義（P>0.05）；治療后，觀察組IgA、IgG、IgM 水平均高于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表4。

表4 兩組免疫功能比較[g/L，（±s）]

表4 兩組免疫功能比較[g/L，（±s）]

2.5 兩組氧化應激指標比較 治療前，兩組氧化應激指標水平比較，差異無統計學意義（P>0.05）；治療后，觀察組SOD 水平高于對照組、MDA 水平低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表5。

表5 兩組氧化應激指標比較（±s）

表5 兩組氧化應激指標比較（±s）

2.6 兩組療效比較 觀察組治療總有效率為93.88%，高于對照組的77.08%，差異有統計學意義（χ2=5.538，P<0.05），見表6。

表6 兩組療效比較[例（%）]

3 討論

有研究指出，HPV 感染與化學刺激、病毒感染或宮頸損傷等因素具有緊密關聯，其發病率相對較高；另外，機體發生HPV 感染后侵犯炎癥組織，從而引發子宮頸疾病[7-8]。目前，臨床尚無可根治HPV 感染的手段，多以藥物為主要原則，但單一使用療效欠佳，故尋求合理的診療對策對改善預后具有重要意義[9-10]。

冷凍療法利用溫度變化對病變組織血液循環產生阻滯，繼而破壞病變組織細胞，達到治療目的[11]。有研究指出，對子宮頸炎合并HPV 感染患者給予冷凍療法，可在降低神經敏感性、不適感的同時達到收縮血管止血的目的[12-13]。rhIL-2 作為趨化細胞因子，在誘導細胞毒性T 細胞、自然殺傷細胞等活性增加清除機體內腫瘤細胞的同時增強抗病毒、抗菌感染作用；另外，rhIL-2 具備免疫調節作用，可監視機體免疫狀態，加速機體免疫力提升[14-15]。有研究指出，rhIL-2 可促進宮頸糜爛上皮的修復，控制疾病進展，加速疾病轉歸[16-17]。本文研究結果顯示，采用rhIL-2 聯合冷凍療法治療，子宮頸炎合并HPV 感染患者臨床體征評分、HPV-DNA 載量降低，提示聯合治療可顯著提升臨床療效，有效改善HPV-DNA 載量，提高HPV 轉陰率。分析其原因可能與rhIL-2 對病毒感染產生的抵抗作用有關，可抑制病毒、細菌感染，可由此證實藥物聯合治療方案的可行性。

本研究指出，rhIL-2 聯合冷凍療法治療子宮頸炎合并HPV 感染，患者IgA、IgG、IgM、SOD 水平升高，MDA 水平降低，且聯合療效優于單純冷凍療法治療，可改善機體免疫能力，減輕氧化應激反應，對促進疾病轉歸具有重要意義。分析其原因或與rhIL-2 改善巨噬細胞或漿細胞的活性激活相關。由此推測機體免疫及氧化應激可能參與宮頸HPV 感染進展，并發揮重要作用。作為體液免疫功能指標，IgA、IgG、IgM 水平變化與機體免疫狀態存在相關性[17-18]。有研究指出，免疫功能改善對降低HPV感染復發風險具有重要裨益。rhIL-2 聯合冷凍療法治療子宮頸炎合并HPV 感染過程中能增強細胞免疫，從而使患者IgA、IgG、IgM 水平升高[19]。研究指出，HPV 感染致使機體處于高氧化應激狀態，造成氧化-抗氧化防御失衡，從而影響各種疾病的發生、發展[20]。SOD、MDA 作為臨床常用氧化應激指標，臨床可通過測定其水平變化對機體氧化應激程度做出直觀反應。其中SOD 可清除機體內氧自由基，MDA 在反映機體脂質過氧化程度的同時對氧自由基水平做出反映。SOD 水平升高，可以起到防止細胞和組織受到氧化性損傷的作用；MDA 水平的下降，可以提高抗氧化酶的活性，減少組織細胞自由基生成增加及失控的可能[21-22]。

綜上所述，rhIL-2 聯合冷凍療法治療子宮頸炎合并HPV 感染，改善患者癥狀體征，提升機體免疫力，減輕氧化應激反應，降低病毒載量。分析其機制可能與調節免疫功能及氧化應激指標水平相關，值得臨床推薦與應用。雖研究認為給予子宮頸炎合并HPV 感染患者rhIL-2 聯合冷凍療法聯合治療效果顯著，但本文研究中未對遠期預后進行分析，致使研究存在不足，需進一步研究評估。