GADA、IA-2A、ZnT8A聯(lián)合IGRPA檢測(cè)在1型糖尿病診斷中應(yīng)用研究

呂宏培

大慶龍南醫(yī)院（齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院第五附屬醫(yī)院）檢驗(yàn)科，黑龍江大慶 163453

糖尿病在臨床的發(fā)病率較高，且近年因人們的生活結(jié)構(gòu)與飲食習(xí)慣的不斷轉(zhuǎn)變，促使該病的發(fā)生率呈逐年上漲趨勢(shì)[1-2]。1型糖尿病（type 1 diabetes,T1DM）為糖尿病的常見(jiàn)類型，T1DM是因胰島素的合成與分泌減少所致[3-4]。T1DM是由于自身免疫介導(dǎo)的β細(xì)胞破壞，T1DM體內(nèi)在出現(xiàn)相關(guān)癥狀前，存在多種自身抗體，如谷氨酸脫羧酶抗體（GADA）、蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶抗體（IA-2A）、鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8抗體（ZnT8A）聯(lián)合胰島特異的葡萄糖-6-磷酸酶催化亞基相關(guān)蛋白抗體（IGRPA）[5-6]。但臨床關(guān)于四者聯(lián)合檢測(cè)T1DM的研究報(bào)道較為罕見(jiàn)。基于此，本研究選取2019年6月—2021年6月大慶龍南醫(yī)院收治的43例T1DM患者、以及同期于本院行正常體檢的48名健康體檢者為研究對(duì)象，分析四種抗體聯(lián)合檢測(cè)T1DM的效果。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院收治的43例T1DM患者納為T1DM組，同期于本院行正常體檢的48名健康體檢者為健康對(duì)照組。健康對(duì)照組男25名，女23名；年齡52～76歲，平均（62.89±2.07）歲。T1DM組男27例，女16例；年齡53～77歲，平均（62.86±2.13）歲。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。具有可比性。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審批號(hào)K201904）。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：T1DM經(jīng)實(shí)驗(yàn)室相關(guān)檢查證實(shí)；健康對(duì)照組體檢者均無(wú)重大疾病；所有研究對(duì)象納入均遵循自愿原則，依從性較高，且簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在精神疾患者；存有惡性腫瘤者；合并凝血功能異常者；存在酒精、藥物依賴史者；合并嚴(yán)重的腦器質(zhì)性疾病者；存在免疫系統(tǒng)病癥者。

1.3 方法

標(biāo)本采集：采集兩組清晨空腹5 mL靜脈血于無(wú)菌容器內(nèi)，以3 000 r/min的速率，離心10 min，獲取血清后留存待檢。檢測(cè)方法：采用自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)（深圳中科優(yōu)瑞醫(yī)療科技有限公司，型號(hào)：UR-670，批準(zhǔn)文號(hào)：粵食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2012第2400986號(hào)）與自動(dòng)化酶免分析儀（HAMILTON公司，型號(hào)：194000，批準(zhǔn)文號(hào)：20182402018）測(cè)定GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA；首先分別以碳酸鹽緩沖液溶解GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA抗原，包被酶聯(lián)板，于4℃環(huán)境下過(guò)夜；次日以1%牛血清白蛋白室溫封閉6 h，干燥備用；將待測(cè)血清稀釋20倍后，于37℃環(huán)境下孵育30 min后洗版5次，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG，37℃孵育20 min，洗版5次，加入顯色劑A、B后37℃避光孵育10 min，讀取450 nm處吸光度（A）值，cutoff值為0.2，如若測(cè)定值在0.2之上則為陽(yáng)性，反之為陰性。

1.4 觀察指標(biāo)

①兩組谷氨酸脫羧酶抗體（glutamic acid decarboxylase antibody,GADA）、蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶抗體（protein tyrosine phosphatase antibody,IA-2A）、鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8抗體（zinc transporter 8 antibody,ZnT8A）與胰島特異的葡萄糖-6-磷酸酶催化亞基相關(guān)蛋白抗體（islet-specific glucose-6-phosphatase catalytic subunit-related protein autoantibody,IGRPA）檢測(cè)結(jié)果。②繪制受試者相關(guān)曲線（receiver operating characteristic curve,ROC），分析GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)T1DM的診斷效能。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用（±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用[n(%)]表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)；繪制ROC，以曲線下面積（AUC）評(píng)估，AUC≤0.5表明無(wú)診斷價(jià)值；0.5＜AUC≤0.7表明診斷價(jià)值較低；0.7＜AUC≤0.9表明診斷價(jià)值中等；AUC＞0.9則表明診斷價(jià)值較高；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果比較

T1DM組的GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA陽(yáng)性率均高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果對(duì)比［n（%）］

2.2 GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)T1DM的診斷效能比較

ROC曲線顯示：四種抗體聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.900（95%CI：0.828～0.972），高于四種抗體單獨(dú)檢測(cè)。見(jiàn)表2、圖1。

圖1 GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA單獨(dú)以及聯(lián)合檢測(cè)T1DM的ROC圖

表2 GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA單獨(dú)以及聯(lián)合檢測(cè)T1DM的診斷效能

3 討論

糖尿病在臨床的患病率處于較高水平，且近年受人們飲食習(xí)慣、生活結(jié)構(gòu)等因素的影響，促使該病的患病率逐年上漲，進(jìn)而促使T1DM的患病率亦隨之上漲[7]。因T1DM患者早期無(wú)明顯特異性癥狀，從而造成臨床的早期診斷率較低[8-9]。相關(guān)研究表明，T1DM患者出現(xiàn)臨床癥狀前的免疫破壞時(shí)期，其血清內(nèi)多出現(xiàn)多種抗胰島細(xì)胞自身抗體[10]。通過(guò)對(duì)此種抗體進(jìn)行早期的檢測(cè)，能夠有效檢出T1DM，從而可指導(dǎo)臨床施行針對(duì)性的治療，及時(shí)控制患者病情，延長(zhǎng)其生存周期。

GADA是破壞胰島細(xì)胞，引起T1DM的關(guān)鍵抗原，其在T1DM早期出現(xiàn)，持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)，屬最具特異性的自身抗體[11-12]。IA-2A表達(dá)于正常人腦、垂體、胰腺與腦力組織，其主要在腦以及胰島組織內(nèi)表達(dá)[13-14]。IA-2A廣泛存在于55%～75%T1DM新發(fā)患者，為胰島素依賴性T1DM相關(guān)自身抗體檢測(cè)的主要靶標(biāo)之一[15]。ZnT8A對(duì)胰島β細(xì)胞存在高度的特異性，其可能是T1DM得到一種重要標(biāo)志物，為現(xiàn)階段所用診斷試劑的重要補(bǔ)充[16-17]。IGRPA是表達(dá)于胰島β細(xì)胞之中得到胰島特異蛋白質(zhì)，其較少表達(dá)于α細(xì)胞。本研究結(jié)果顯示，T1DM組的GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA陽(yáng)性 率[65.12%（28/43）、46.51%（20/43）、79.07%（34/43）、76.74%（33/42）]均高于健康對(duì)照組（P＜0.05）。董倩等[18]研究顯示，1型糖尿病組的GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA陽(yáng)性檢出率[53.33%（24/45/）、28.89%（13/45/）、71.11%（32/45）、77.78%（35/45）]均高于正常對(duì)照組，與本研究結(jié)果類似。由此充分的提示，在T1DM患者機(jī)體內(nèi)，上述四種抗體均呈現(xiàn)出過(guò)高的陽(yáng)性表達(dá)。本研究ROC曲線顯示：四種抗體聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.900（95%CI：0.828～0.972），顯著高于四種抗體單獨(dú)檢測(cè)，由此表明，四種抗體聯(lián)合檢測(cè)可更精準(zhǔn)的檢出T1DM，從而能夠更精準(zhǔn)地指導(dǎo)臨床施行個(gè)體化治療，以此在早期及時(shí)的對(duì)患者治療，最大程度地確保患者的身心健康。

綜上所述，GADA、IA-2A、ZnT8A與IGRPA四種抗體在T1DM患者機(jī)體內(nèi)呈現(xiàn)出過(guò)高的陽(yáng)性表達(dá)，四種抗體聯(lián)合可明顯提高檢出精準(zhǔn)率。