陳皮-半夏藥對治療高脂血癥作用機制的網絡藥理學分析與實驗研究

張 理

高脂血癥(hyperlipidemia)是一種常見病，是人體內脂蛋白代謝異常進而引起一系列癥狀的疾病[1]。血脂異常會增加血液黏稠度，引起動脈粥樣硬化，危害冠狀動脈及腦血管，對心、腦、腎等器官有巨大危害，臨床上常引起冠狀動脈性心臟病、腦梗死、高血壓、脂肪肝等疾病[2-3]。2012年—2015年在我國東中西部年齡≥35歲人群血脂異?；疾÷蕿?34.7%，高三酰甘油血癥、高總膽固醇血癥、低高密度脂蛋白膽固醇血癥、高低密度脂蛋白膽固醇血癥的患病率分別為 14.1%、7.5%、19.2%和6.0%，并且這一數據呈現逐年上升趨勢，而血脂異常知曉率、治療率和控制率均較低，故血脂異常的防治工作亟待加強[4]。目前西醫治療常用的降血脂藥物有5 類，分別為他汀類、貝特類、煙酸類、膽酸螯合劑和膽固醇吸收抑制劑等[5]。西藥在控制血脂異常上具有很大的局限性，如由于他汀類藥物不耐受常引起肌溶解和肝損傷事件[6]。故向傳統醫藥中尋求治療高脂血癥的安全而有效的藥物越來越受到重視[7]。中醫藥學中并無高脂血癥這一病名，《靈樞·五癃津液別》云：“五谷之津液和合而為膏者，內滲入于骨空，補益腦髓，而下流于陰股”，此處所言膏脂即與現代醫學所言“脂質”類似，故一般將其歸屬于“眩暈”“胸痹”“痰濁”“血瘀”的范疇[8]。中醫體質學辨識研究表明，血脂異常與痰濕體質密切相關[9]。陳皮、半夏是經典方劑二陳湯的主要組成部分，具有燥濕化痰、理氣和中之功效，是臨床治療高脂血癥的常用藥對。研究表明，以陳皮、半夏為主要組成的方劑能夠有效改善脂肪酸的代謝，起到降低血脂的作用[10-11]。由于中藥成分的復雜性及作用靶點的不確定性，目前針對陳皮-半夏藥對治療高脂血癥的確切機制尚不清楚。因此，本研究借助網絡藥理學的方法，從整體策略出發以探討陳皮-半夏藥對治療高脂血癥的作用機制，并采用分子對接技術對相關結果進行驗證，為后續中醫藥治療及基礎研究提供一定幫助。

1 資料與方法

1.1 核心藥物有效成分及靶點獲取 將陳皮、半夏逐次輸入到中藥系統藥理學數據庫和分析平臺(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP，https：//tcms-pw.com/tcmsp.php)[12]，根據ADME原則[13]，設置口服生物利用度(OB)≥30%，類藥性(DL)≥0.18 進行篩選，得到核心藥物有效成分及作用靶點。得到靶點的同時，在TCMSP中檢索并得到有效成分的結構式，以MOL2格式保存。將上述靶點導入到UniProt[14]網站(https：//www.uniprot.org/)進行基因映射(Gene Mapping)以獲取相應靶點的基因組。

1.2 疾病-藥物共同靶基因的獲取 在人類基因數據庫 GeneCards[15-16](https：//genecards.weizmann.ac.il/v3/)和MalaCards[17](https：//www.malacards.org/)中以“hyperlipidemia”為關鍵詞進行檢索，獲取冠心病的靶基因，將上述藥物靶基因與疾病靶基因導入到Draw Venn Diagram網站(http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/)中繪制韋恩圖，并得到疾病-藥物共同靶基因。

1.3 關鍵靶點蛋白-蛋白相互作用(PPI)網絡的構建 將上述疾病-藥物共同靶基因導入到STRING網站[18](https：//string—db.org/)中，選取物種為“Homo sapiens”，得到靶點蛋白之間的相互作用關系。導出蛋白質互作網絡文件后，利用Cytoscape軟件[19]優化圖形，并根據度值獲取PPI網絡[20]中排名前10位的關鍵基因(Hub Gene)。

1.4 基因本體(GO)和京都基因與基因組百科全書(KEGG)富集分析 將疾病-藥物共同基因導入到David數據庫中，選擇物種為“Homo sapiens”進行GO富集分析[21]與KEGG信號通路富集分析[22]。并獲取與高脂血癥密切相關的信號通路作用路徑圖。將上述結果分別導入到“微生信”網站(http：//www.bioinformatics.com.cn)進行相關結果及數據的可視化操作。

1.6 分子對接驗證 Discovery Studio(DS，V2016)是新一代的分子模擬軟件，采用CDOCKER模塊的動力學方法隨機搜索小分子構象，隨后采用模擬退火的方法將各個構象在受體活性位點區域進行優化[23-24]。在國內外高脂血癥的專家共識或指南中，他汀類藥物[3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑]都被推薦為一線治療藥物[25-26]。因此，本研究利用Discovery Studio(DS，V2016)對陳皮-半夏有效成分與HMG-CoA還原酶(HMG-CoA reductase)進行分子對接實驗，并以瑞舒伐他汀(rosuvastatin)作為對照。具體方法：①在DrugBank網站(https：//www.drugbank.ca/)上以關鍵詞“rosuvastatin”進行檢索以獲取瑞舒伐他汀的結構式，保存為MOL2格式，與1.1中的藥物有效成分一起導入到Open Babel GUI軟件中轉換為一個MOL2文件集。②在RCSB PDB網站(https：//www.rcsb.org/search)上以“HMG-CoA reductase”進行檢索，分別獲取β1受體與β2受體的PDB結構式。③將上述配體導入到DS軟件中，利用“prepare ligands”功能進行配體準備。同時對受體進行去除Water、Lagands Groups以及無關的側鏈等，點擊Receptor-Ligand Interactions>Define and Edit Binding Site >From Receptor Cavities在蛋白空腔中尋找有潛力的活性位點。④利用CDOCKER功能進行分子對接，并根據-CDOCKER _ INTERACTION _ ENERGY(負分子對接結合能)獲取每組對接分子中得分最好的分子構象并進行排名。分子對接構象的負分子對接結合能越大，則結合構想越穩定，反映受體分子與配體之間結合的可能性越大。

1.7 動物實驗驗證

1.7.1 實驗藥物及試劑 陳皮、半夏購自河南中醫藥大學第一附屬醫院中藥飲片室，經科室專業人員鑒定為合格藥品。陳皮、半夏等比例混合并在100 ℃下煎煮30 min，取過濾液，配制成1 mL含生藥2 g的濃縮液。總 膽 固 醇 ( total cholesterol，TC)、三 酰 甘 油 (triglyceride，TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein，LDL-C)生化檢測試劑均購自中生北控生物科技股份有限公司；蛋白激酶B1(AKT1)、絲裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、腫瘤抑制蛋白p53(TP53)、Jun原癌基因(JUN)、血管內皮生長因子A(VEGFA)、過氧化物酶體激活受體γ(PPARG)、絲裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、前列腺素內過氧化物合酶2(PTGS2)、胱天蛋白酶3(CASP3)、過氧化氫酶(CAT)蛋白抗體均購自廣州左克生物科技發展有限公司。

1.7.2 實驗動物分組及干預 無特定病原體(SPF)級雄性大鼠30只，體質量(200±20)g，適應性飼養1周后隨機分為對照組、模型組、藥物組，每組10只。實驗動物供清潔自來水和標準飼料，自由進食和飲水，室內環境溫度為22～24 ℃，濕度為50%～60%，12 h明暗交替循環(07：00～19：00)。除對照組外，其余兩組按照參考文獻中方法給予高脂飼料喂養8周后轉化為高脂血癥大鼠模型。各組給藥干預，對照組和模型組分別灌胃等劑量的生理鹽水，劑量為 10 mL/kg，按人體表面積計算，藥物組灌胃10 g/kg 陳皮-半夏湯劑，干預1周。 末次灌胃給藥后12 h，取10%水合氯醛按腹腔注射麻醉大鼠，稱取大鼠體脂量行內眥靜脈叢取血，并分離肝臟，用于檢測。本研究方案已通過河南中醫藥大學實驗動物倫理委員會審核并批準，并在實驗過程中嚴格遵守動物倫理學3R原則。

1.7.3 肝臟指數測定及病理變化比較 分離倉鼠的肝臟后稱取質量，按公式計算肝臟指數：肝臟指數=肝臟質量/體質量×100%。取新鮮肝臟組織切片，行蘇木精-伊紅(HE)染色以觀察不同組間肝臟組織病理學變化。

1.7.4 生化檢測 內眥靜脈叢血以3 000 r/min離心10 min后取上清液，以全自動化儀檢測血清TG、TC、HDL-C、LDL-C水平。檢測過程中嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.7.5 蛋白質免疫印跡法(Western Blot)檢測相關蛋白 取肝組織于冰上剪碎后、裂解，蛋白質定量(BCA)法測定蛋白濃度，進行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，電壓設置為80 V、30 min和110 V、60 min，根據Maker的移動情況，終止電泳。用醋纖維素轉膜，加入稀釋一抗，4 ℃孵育過夜，TBST洗膜3次后加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的二抗中反應2 h，再用 TBST 洗膜3次，加增強型化學發光試劑(ECL)顯示劑顯色，暗室膠片曝光。使用Western Blot法檢測肝臟組織中蛋白表達情況，初步驗證富集分析結果。使用Image J軟件對蛋白條帶進行量化處理，目標蛋白表達量通過β-actin校正。

浮選尾礦熔煉合金100 g，熔煉中還原劑配比為尾礦干基20%，真空度為102 Pa，溫度1 000～1 100 ℃，蒸餾45～90 min，浮選尾礦熔煉合金各組分分析結果見表3，試驗結果見表4。

2 結 果

2.1 核心藥物的有效成分及靶標 從TCMSP網站共得到陳皮有效成分5個、半夏有效成分13個，詳見表1。再將上述有效成分分別輸入到TCMSP網站再次檢索，得到有效成分作用靶點，去重后共計123個，然后再將這些靶點導入到UniProt網站轉化為相應的基因Symbol。

表1 陳皮-半夏藥對有效成分

2.2 疾病-藥物共同靶基因 從GeneCards網站獲取到高血壓病靶基因1 389個，將疾病與藥物靶點導入到Draw Venn Diagram網站進行韋恩圖分析，得到疾病-藥物共同靶基因69個。詳見圖1。

圖1 陳皮-半夏藥對與高脂血癥交集基因Venn圖

2.3 關鍵靶點PPI網絡 將上述69個共同基因導入到STRING數據庫后得到關鍵PPI網絡圖(見圖2)。在PPI網絡中，靶點以節點顯示，以邊相連接，關鍵靶點的邊更加密集，節點也就越大，表示在PPI網絡所起到的作用就越重要。將PPI網絡以TSV格式保存后，利用Cytoscape軟件中的Hub插件，根據度值得到排名前10位的Hub基因(核心基因)，詳見圖3。

圖2 疾病-藥物交集基因PPI網絡

圖3 根據PPI網絡得到的Hub基因

2.4 GO富集分析與KEGG通路富集分析 將上述疾病-藥物交集靶基因導入到David數據庫進行GO富集分析，包括3個方面，即生物過程(biological process，BP)、細胞組分(cellular component，CC)和分子功能(molecular function，MF)，詳見圖4。KEGG富集分析主要涉及癌癥相關信號通路(pathways in cancer)、乙型肝炎信號通路(hepatitis B)、非酒精性脂肪肝信號通路(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)、腫瘤壞死因子(TNF)信號通路(TNF signaling pathway)、甲狀腺激素信號通路(thyroid hormone signaling pathway)、脂肪細胞因子信號通路(adipocytokine signaling pathway)等，詳見圖5。其中與高脂血癥密切相關的非酒精性脂肪肝信號通路作用路徑詳見圖6，圖中紅色五角星代表藥物靶點。

圖4 GO富集分析結果

圖5 KEGG信號通路富集分析結果

圖6 非酒精性脂肪肝信號通路作用圖

2.5 陳皮-半夏藥對成分-靶點-通路網絡分析 為了更清晰地展現陳皮-半夏藥對成分、靶點與通路之間的關系，使用 Cytoscape 軟件構建通路-活性成分-核心靶點網絡(見圖 7)。網絡圖包含節點與邊，白色節點代表藥物有效成分，綠色節點代表中藥名稱，黃色節點代表靶基因，紅色節點代表信號通路。網絡圖可以直觀展示出陳皮-半夏具有通過多成分、多靶點、多通路相互協調作用于高脂血癥的特點。

圖7 陳皮-半夏藥對成分-靶點-信號通路網絡圖

2.6 分子對接驗證結果 根據分子對接方法進行分子驗證，得到HMG-CoA還原酶分子對接構象180個。每組分子對接結果取負分子對接結合能分值最高的，共得到18個對接結果，排名前10位的包括MOL005828、MOL002776、MOL006937、MOL005815、446157(rosuvastatin)、MOL000359、MOL003578、MOL005030、MOL000358、MOL001755。對結果進行可視化，得到分析熱圖(Heatmap)，詳見圖8。其中排名前6位的結合構象以3D圖及2D圖展示(見圖9)。在3D圖中可見配體與靶蛋白結合的具體位置關系，而在2D圖中可見配體與靶蛋白形成的作用力類型及結合位點(氨基酸、殘基等)。

圖8 全部分子對接結果熱圖分析

圖9 配體-靶蛋白對接模式3D圖及2D圖(A&a為MOL005828與HMG-CoA還原酶對接結果；B&b為 MOL002776與HMG-CoA還原酶對接結果；C&c為MOL006937與HMG-CoA還原酶對接結果；D&d為 MOL005815與HMG-CoA還原酶對接結果；E&e為瑞舒伐他汀與HMG-CoA還原酶對接結果；F&f為MOL000359與HMG-CoA還原酶對接結果)

2.7 動物實驗結果

2.7.1 陳皮-半夏對大鼠體質量及肝臟指數影響 3組小鼠基礎體質量一致，造模后，模型組大鼠體態較對照組臃腫，行動遲緩且不喜活動，體質量及肝臟指數明顯偏大，差異均有統計學意義(P<0.05)。藥物組體質量、肝臟指數較模型組明顯降低，差異均有統計學意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 3組大鼠體質量及肝臟指數比較(±s)

2.7.2 3組大鼠肝臟組織病理學變化比較 對照組可見肝細胞排列整齊，結構正常，無炎性浸潤和壞死；模型組可見肝細胞排列紊亂，脂肪細胞空泡樣變性及脂質沉積，出現明顯炎性浸潤和壞死灶；藥物組可見脂肪浸潤和少量脂肪細胞空泡，肝細胞炎性浸潤和壞死灶顯著減輕。詳見圖10。

圖10 各組大鼠肝組織病理學變化

2.7.3 陳皮-半夏對血脂水平影響 模型組TG、TC、LDL-C較對照組明顯升高，HDL-C較對照組明顯降低，差異均有統計學意義(P<0.05)；藥物組TG、TC、LDL-C較模型組明顯降低，HDL-C較模型組明顯升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。提示陳皮-半夏藥對可以有效降低高脂血癥大鼠血液TG、TC、LDL-C水平，升高HDL-C水平。詳見圖11。

＊與對照組比較，P<0.05；#與模型組比較，P<0.05。圖11 3組血清TG、TC、HDL-C、LDL-C水平比較

2.7.4 陳皮-半夏對目標基因蛋白表達量的影響 與對照組比較，模型組肝臟組織中AKT1、VEGFA、PPARG蛋白表達量明顯降低，而MAPK3、TP53、JUN、MAPK8、PTGS2、CASP3蛋白表達量明顯升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。與模型組比較，藥物組肝臟組織中AKT1、VEGFA、PPARG蛋白表達量明顯升高，而MAPK3、TP53、JUN、MAPK8、PTGS2、CASP3蛋白表達量明顯降低，差異均有統計學意義(P<0.05)。動物實驗結果與網絡藥理學分析結果基本吻合。詳見表3、圖12。

表3 3組Hub基因蛋白表達量比較(±s)

圖12 各組大鼠肝臟Hub基因蛋白表達量熱圖

3 討 論

基于整體觀念，中醫藥在復雜疾病的治療中具有一定的優勢，然而中藥治療疾病具有多成分、多靶點、多通路的作用機制，限制了其進一步的發展與推廣[27]。目前的還原主義研究策略仍然難以揭開這種整體醫學的面紗[28]。網絡藥理學可以基于靶分子、生物功能和生物活性化合物生成復雜的相互作用網絡，符合中醫藥的天然特性，并能從分子水平方面系統地闡明中醫藥的作用機制，逐漸成為中醫藥研究的一個具有光明前景的整體策略[29-30]。另外，在中藥有效成分中發現，基于網絡藥理學的方法有望突破對跨多個信息層的藥物作用的理解。網絡藥理學在細胞或表型網絡的背景下考慮藥物反應，是傳統還原論研究方法的替代補充[31]。這種方法有效地彌合了現代醫學與中醫藥之間的鴻溝，極大地促進了中醫藥協同作用的研究[32]。

TCMSP是中國藥科大學基于中草藥系統藥理學框架建立的一種中藥系統藥理數據庫和分析平臺。通過ADME原則篩選，可以得到中藥的有效成分及對應的靶點。陳皮與半夏中主要包含谷甾醇(sitosterol)、檸檬酸(citromitin)、川陳皮素(nobiletin)、黃芩苷(baicalin)、黃芩素(baicalein)等有效成分。研究表明谷甾醇在內的植物甾醇能夠有效降低低密度脂蛋白含量，能有利改變脂質譜，達到抗血脂藥物的功效，并具有良好的人體耐受性和安全性[33-34]。川陳皮素是具有重要生物學特性的多酚化合物，主要通過抑制肝脂肪酸合成和增加脂肪酸氧化來預防肝臟脂肪變性，從而起到降低血脂作用，同時還具有胰島素增敏、降血壓、抗炎及抑制動脈粥樣硬化的特性[35]。動物實驗表明，川陳皮素可以通過調節大鼠AdipoR1和gp91(phox)表達來減輕高脂飲食誘導的非酒精性脂肪肝疾病，也可以改善肥胖低密度脂蛋白受體基因敲除(LDLR-/-)小鼠的代謝綜合征和動脈粥樣硬化，干預甚至逆轉肥胖癥[36-37]。黃芩苷最早從中藥黃芩中發現，可改善高脂飲食誘導的腸道微生態和異常代謝，減少由腸道菌群通過膳食纖維的發酵而產生短鏈脂肪酸，還可以調節SirT1 / STAT3途徑并抑制肝葡萄糖過多產生[38-39]?？梢?，陳皮-半夏藥對中的多種成分對血脂代謝有作用。

PPI網絡主要考察靶蛋白之間的相互作用關系，在PPI網絡中根據連接度值得到排名前10位的Hub基因為AKT1、MAPK3、TP53、JUN、VEGFA、PPARG、MAPK8、PTGS2、CASP3、CAT。AKT1的激活誘導細胞脂肪酸以及細胞膜磷酸甘油酯的濃度增加，還參與胰島素介導的作用，例如脂肪生成、葡萄糖攝取以及葡萄糖轉化為脂肪酸和膽固醇等過程，并具有明顯抗動脈粥樣硬化作用[40-41]。Heinonen等[42]通過比較腺病毒VEGFA基因轉移對載脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)、LDLR-/-小鼠的動脈粥樣硬化和脂蛋白的影響，發現VEGFA基因轉移在所有模型中均引起脂蛋白分布的動脈粥樣硬化改變。VEGFA轉移還降低了脂蛋白脂肪酶(LPL)活性，這可能是所觀察到的脂質分布變化的基礎。長期以來，脂肪組織的生長被認為是有血管生成依賴性的，正常脂肪組織的功能依靠與血管在細胞因子、外泌體等方面的正?；樱苌蓾摿Σ蛔惚徽J定為脂肪組織功能障礙的“不祥三聯征”之一[43]。Cardona 等[44]通過對74例代謝綜合征病人口服60 g脂肪超負荷，然后測定TC、TG、HDL-C、載脂蛋白A1、載脂蛋白B、尿酸和尿酸排泄的基線濃度，發現代謝綜合征病人中Pro12Ala PPARG序列變異體與餐后高脂血癥的風險相關，表明PPARG與脂蛋白清除率的調節密切相關。

GO分析是基于分子效團的生物信息學工具，使用本體論代表生物學知識來提供有關基因產物功能的信息，并以結構化的方式用核心實體來表示生物學功能[45]。GO富集分析結果顯示陳皮-半夏藥對具有酶結合、RNA聚合酶Ⅱ轉錄因子調控、配體激活序列特異性DNA結合、類固醇激素受體結合等生物功能，主要涉及胞漿、核質、核染色質、內質網、線粒體等細胞組分，從而參與對藥物的反應、老化、缺氧反應、膽固醇代謝過程、凋亡過程的負調控等生物過程。GO富集分析結果提示陳皮-半夏藥對中能夠從分子、細胞等多個層面干預血脂的代謝。KEGG是系統分析基因功能與基因組信息的數據庫，整合了基因組學、生物化學和系統功能組學的信息，有助于研究者將基因及表達信息的過程作為一個網絡進行整體研究。KEGG富集分析結果顯示，陳皮-半夏藥對除了可以直接通過非酒精性脂肪肝信號通路以外，還可以通過多個信號通路對血脂代謝起到協同作用。在非酒精性脂肪肝信號通路路徑中，主要涉及ACDC、JUK、Akt、CASP3、CASP8等靶點，并與PI3K-AKT等信號通路形成交互關系，對血脂異常、血糖代謝障礙等在內的代謝綜合征具有多路徑干預作用，還可以介導細胞凋亡，以及協調免疫細胞浸潤而起到抗炎作用。肝臟是人體脂質重要的代謝器官，肝炎發生常伴隨脂質等物質的代謝異常，也會導致炎性因子等失衡。相反，陳皮-半夏藥對有效成分也可能通過調節乙型肝炎信號通路來間接影響肝細胞的代謝狀態，從而促進脂質代謝[46]。研究表明，巨噬細胞引起的代謝炎癥和脂肪細胞-巨噬細胞相互作用在肥胖癥中具有首要的重要性。脂肪細胞和巨噬細胞之間涉及游離脂肪酸和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)旁分泌建立的惡性循環，加劇了脂肪組織中的炎癥反應。此外，缺氧以及較高濃度的游離脂肪酸會加劇肥胖癥中巨噬細胞介導的炎癥反應。故陳皮-半夏藥對有效成分很有可能通過TNF信號通路降低巨噬細胞介導的脂肪組織炎癥反應，從而減少脂肪在人體局部的堆積[47]。另外，炎癥、纖維化和血管生成受損被認定為脂肪組織功能障礙的“不祥三聯征”。炎癥和血管生成、重塑不當都可以驅動纖維化，進而促進免疫細胞向脂肪貯庫的遷移，并阻礙進一步的血管生成[48]。如前所述，陳皮-半夏藥對有效成分對炎癥及血管生成均具有調節作用，故可以認為在TNF信號通路與血管內皮生長因子信號通路方面具有協同作用。大量臨床觀測及研究顯示，人體甲狀腺激素缺乏時常導致肥胖癥及代謝綜合征等[49]。目前，對于甲狀腺激素的認識方面也早已轉為治療方面。相關研究表明谷甾醇可以刺激甲狀腺激素的釋放，而β-谷甾醇早已被相關指南推薦為治療高脂血癥的藥物[50]。另外，陳皮-半夏藥對的多種成分還可以通過多個靶點直接參與到脂肪細胞因子信號通路，對人體脂質的攝取、分布、代謝、排泄起到重要作用[51]。

分子對接技術是應用計算機模擬程序，通過定義結合位點來預測配體與目標蛋白質結合的可能性及空間構象[52-53]?；诜肿訉蛹夹g，可以對成分-靶點-信號通路網絡圖中的有效成分與目標靶點進行模擬對接，并通過對相關結合參數及結合構象的分析，有助于具有臨床潛力的有效成分發現及藥物設計、前導優化等[54]。通過將陳皮-半夏有效成分與HMG-CoA還原酶進行分子對接，發現多種成分的對接構象優于或類似于瑞舒伐他汀，如川陳皮素、黃芩苷等。在結合位點上主要集中在TLE746、GLY748等，而作用力主要是以范德華力、氫鍵為主。分子對接結果證明陳皮-半夏藥對有效成分能夠通過與HMG-CoA還原酶結合，從而起到降低血脂的作用。

動物實驗顯示，陳皮-半夏藥對可有效改善高脂血癥大鼠血脂代謝情況，能明顯降低其體質量及肝臟指數。肝臟組織病理切片觀察結果顯示，應用陳皮-半夏藥對煎煮劑灌服后，大鼠肝臟組織炎癥浸潤及脂質沉積情況明顯好轉。Western Blot 實驗顯示陳皮-半夏能夠明顯升高AKT1、VEGFA、PPARG等蛋白表達量，并明顯降低MAPK3、TP53、JUN、MAPK8、PTGS2、CASP3等蛋白表達量。表明陳皮-半夏藥對可以通過降低相關炎性因子的表達，并促進脂代謝正調控蛋白的表達，從而起到降血脂作用，這與生物富集結果基本一致。

4 小 結

本研究通過網絡藥理學的方法探討了陳皮-半夏藥對中多種活性成分通過多靶點、多通路協同作用于高脂血癥的網絡機制，分子對接顯示部分有效成分與HMG-CoA還原酶對接良好，發現陳皮-半夏藥對中的川陳皮素、黃芩苷等有效成分是其發揮降脂作用的潛在分子基礎。動物實驗表明，陳皮-半夏對高脂血癥小鼠血脂代謝有明顯改善效果，并能有效調控大鼠肝臟相關基因的表達量。本項研究將為后續的中醫藥治療及進一步的基礎研究提供一定幫助。