乳腺癌中葡萄糖轉運蛋白-1和p53蛋白表達水平與臨床病理特征及預后的關系

管潔，戴北飛，何丹，唐磊，姚苗苗

(1.湖南航天醫院，湖南 長沙 410006；2.邵陽市中醫醫院，湖南 邵陽 422000)

乳腺癌發病率、病死率在女性惡性腫瘤中占第一位，且每年以3%～4%速度不斷增加，對女性生命健康造成嚴重威脅。細胞過度增殖與乳腺癌發生、進展關系密切，細胞增殖需大量耗氧，可致細胞缺氧而產生相關蛋白，促使細胞適應低氧環境[1-2]。葡萄糖轉運蛋白-1(GLUT-1)屬于內源性乏氧標記物，其高表達可使惡性細胞在乏氧環境下獲取能量，以快速生長、增殖、轉移、侵襲[3]。p53蛋白是重要的腫瘤基因編碼蛋白，可影響細胞的低分化，參與細胞錯配修復機制的形成，在腫瘤的發生、進展中起重要作用[4]。本研究分析了乳腺癌中p53蛋白、GLUT-1表達水平與臨床病理特征及預后的關系，為臨床診治提供新的思路。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年1月—2020年9月行手術治療的64 例乳腺癌患者的乳腺癌組織標本作為乳癌組，取距離癌組織3 cm的癌旁正常組織為癌旁組。患者年齡(57.32±2.46) 歲；病程(3.15±0.21) 年；黏液性囊腺癌2 例，單純癌35 例，硬癌3 例，侵襲性導管癌15 例，髓樣癌2 例，侵襲性小葉癌1 例，乳頭狀癌3 例，腺癌2 例，導管內癌1 例。納入標準：經病理組織檢查確診為乳腺癌；病歷資料完整。排除標準：嚴重免疫力低下；精神異常；存在血液系統疾病；術前接受化療、放療或生物免疫治療；合并其他惡性腫瘤。

1.2 方法

連續切片，每例組織蠟塊均切成4 μm厚度切片(4 塊)，用甲醛溶液固定，石蠟包埋、高溫滅菌、載玻片泡酸、多聚賴氨酸涂片等處理，DAB顯色劑(試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司)顯色，復染(蘇木精)，脫水(乙醇)，透明(二甲苯)，封固(中性樹膠)，用免疫組化法檢測。p53蛋白、GLUT兔多克隆抗體購自美國Epitomics公司。

陽性判斷標準：用上海比目儀器廠的光學顯微鏡(BMD-300E型)觀察，GLUT-1定位于細胞膜上，陽性細胞呈棕黃色顆粒狀，高倍鏡下每個切片選擇5 個視野，每個視野內細胞>200 個，陽性細胞≥10%為陽性，反之為陰性。p53蛋白定位于細胞核上，陽性細胞呈棕黃色顆粒狀。細胞著色程度：無色為0 分，黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。陽性細胞百分比：陰性為0 分，陽性細胞<25%為1 分，25%～50%為2 分，>50%～75%為3分，>75%為4分。細胞著色評分與陽性細胞百分比評分乘積≥3 分即為陽性，反之為陰性。

1.3 觀察指標

比較兩組p53蛋白、GLUT-1陽性表達率；分析p53蛋白、GLUT-1陽性表達與臨床病理特征、預后(術后1 年生存率)關系，臨床病理特征包含年齡、腫瘤部位、月經初潮年紀、腫瘤直徑、腫瘤-淋巴結-轉移(TNM)分期、淋巴結轉移等。

1.4 統計學方法

采用SPSS21.0系統軟件進行統計學分析。計數資料以百分率(%)表示，采用 χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組p53蛋白和GLUT-1陽性表達率比較

乳癌組p53蛋白、GLUT-1陽性表達率高于癌旁組，差異有統計學意義(P<0.05)(見表1)。p53蛋白、GLUT-1在乳腺癌組織和癌旁組織中表達情況見圖1-4。

表1 p53蛋白和GLUT-1陽性表達率比較單位：例(%)

圖1 乳腺癌組織p53蛋白陽性表達(SP×500)

圖2 癌旁組織p53蛋白陰性表達(SP×500)

圖3 乳腺癌組織GLUT-1陽性表達(SP×500)

圖4 癌旁組織GLUT-1陰性表達(SP×500)

2.2 p53蛋白和GLUT-1的表達與乳腺癌患者臨床病理特征關系

p53蛋白、GLUT-1陽性表達與乳腺癌TNM分期和淋巴結轉移有關，差異有統計學意義(P<0.05)；p53蛋白、GLUT-1陽性表達與乳腺癌年齡、月經初潮年紀、腫瘤直徑、腫瘤部位無關，差異無統計學意義(P>0.05)(見表2)。

表2 p53蛋白和GLUT-1陽性表達與乳腺癌患者臨床病理特征關系

2.3 p53蛋白和GLUT-1陽性表達與乳腺癌預后的關系

乳腺癌患者術后1 年生存率為79.69%(51/64)。p53蛋白陽性表達者術后1年生存率為70.00%(28/40)，低于陰性表達者的95.83%(23/24)，差異有統計學意義(χ2=4.691，P=0.030)；GLUT-1陽性表達者術后1年生存率為70.73%(29/41)，低于陰性表達者的95.65%(22/23)，差異有統計學意義(χ2=4.218，P=0.040)。

3 討 論

乳腺癌的發生、進展與抑癌基因、原癌基因的缺失、失活、突變等基因變化關系密切，基因水平異常是惡性腫瘤發生、進展的核心因素，基因表達調控異常或基因突變會增加癌細胞過度擴增風險，促使癌細胞進展[5-6]。

GLUT-1是人體葡萄糖跨膜轉運的主要載體，主要在胎盤、細胞膜、血腦屏障中分布，當機體發生惡性腫瘤時，無糖酵解增加，細胞內GLUT-1代謝增強，使GLUT-1呈高表達[7]。p53屬于抑癌基因，其中野生型p53基因能調控細胞凋亡、生長，發揮抑癌作用，當轉變為突變型p53后，會改變原先抑癌作用，誘導異常基因表達，促使腫瘤發生、進展[8]。本研究結果顯示，乳癌組p53蛋白、GLUT-1陽性表達率較癌旁組高；p53蛋白、GLUT-1陽性表達與乳腺癌TNM分期和淋巴結轉移有關，且p53蛋白、GLUT-1陽性表達者術后1 年生存率均低于陰性表達者。提示乳腺癌中p53蛋白、GLUT-1呈高表達，其表達水平與腫瘤TNM分期、淋巴結轉移和預后密切相關。無限增殖是惡性腫瘤的重要特點，DNA復制期細胞數目明顯增加，造成局部微環境處于嚴重缺氧狀態，并可經兩條不同途徑共同促使GLUT-1過量表達。其中一條途徑是氧濃度降低，激活細胞內缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)，可結合GLUT-1增強子上HIF-lα的DNA結合位點，引起GLUT-1 5′端的增強子序列活化，造成GLUT-1的mRNA過度表達，并促使其產物大量合成。另一條途徑是缺氧對線粒體氧化磷酸化形成抑制，可致GLUT-1內在活性改變，還可刺激其由細胞內囊泡內轉移至細胞膜，增加GLUT-1 mRNA的穩定性和刺激GLUT-1基因轉錄[9]。p53是GLUT-1的上游調控因子，能夠通過組織特異性對GLUT-1基因轉錄形成抑制，降低GLUT-1表達，但當p53蛋白出現突變，上述作用則會喪失。乳腺癌發生后機體多伴有p53 DNA結合區突變，影響p53抑制GLUT-1基因引物轉錄活性，加快葡萄糖代謝，為細胞腫瘤生長提供能量，促使腫瘤進展[10]。

綜上所述，乳腺癌中p53蛋白、GLUT-1呈高表達，其表達水平與腫瘤嚴重程度和預后密切相關。