液質聯用法測定皮革中鹵代雙酚類化合物*

薛建平

（1.福建省纖維檢驗中心，福建 福州 350026；2.國家紡織服裝產品質量檢驗檢測中心，福建 福州 350026；3福建省紡織產品檢測技術重點實驗室，福建 福州 350026）

四氯雙酚A和四溴雙酚A屬于鹵系阻燃劑，由于阻燃效果好、容易制備且價格適中，成為制革行業使用較為廣泛的阻燃劑。由于這兩種化合物在皮革類產品中都無法回收使用，因此不是綠色清潔的阻燃劑。此外，這兩種化合物均屬于環境激素，有研究[1,2]表明，它們會通過產品的使用、運輸、處理等過程流入到環境中，或通過接觸皮革材料直接進入人體，對人體的正常生理代謝造成干擾。

在服用產品領域中關于四氯雙酚A和四溴雙酚A的檢測僅見紡織品中四溴雙酚A的檢測的研究報道，如李志剛[3]采用液相色譜串聯質譜法檢測紡織品中四溴雙酚A，目前還缺乏皮革中的四氯雙酚A和四溴雙酚A的檢測方法。鹵代雙酚類化合物分子量大、沸點高，不適合采用氣相色譜系統進行分析，同時，皮革樣品中存在較高含量的油脂以及在鞣制加工過程中殘存的化學試劑，皮革樣品中的雜質會嚴重干擾目標化合物的測定。

高效液相色譜-串聯質譜法適用于分析分子量較高的化合物，且抗干擾能力強，可應對基質復雜的皮革樣品，因此，本文采用高效液相色譜-串聯質譜法檢測皮革中的四氯雙酚A和四溴雙酚A。

1 實驗部分

1.1 儀器、試劑和材料

配有ESI電離源的高效液相色譜儀-串聯質譜聯用儀（Agilent 1290 -6410，安捷倫公司）；超聲波發生器（PM6-2700TL，英國PRIMA儀器有限公司）；旋轉蒸發儀（R-210，瑞士buchi公司）。

四氯雙酚A標準品（上海安譜實驗科技股份有限公司）和四溴雙酚A標準品（德國Dr.Ehrenstorfer公司），純度均≥98%。乙酸乙酯、甲醇均為色譜純。Pesti Carb 石墨化碳萃取柱（500 mg/6mL）。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品提取

將皮革試樣剪成小于4 mm×4 mm的小塊，稱取0.500 g試樣，置于50 mL具密封塞的提取管中，加入20 mL甲醇，于超聲發生器中室溫下萃取20 min后轉移萃取液，然后再次轉移20 mL甲醇于提取管中超聲萃取10 min。將2次的萃取液合后，置于旋轉蒸發儀中在40 ℃溫度低真空條件下濃縮至近干，然后用2 mL乙酸乙酯溶解并加載到經甲醇活化、乙酸乙酯平衡后的石墨炭黑固相萃取小柱上，用5 ml乙酸乙酯進行洗脫并收集洗脫液，洗脫液用緩氮氣流吹干后，準確加入2 mL甲醇溶解殘留物，該溶液經有機過濾膜過濾后，供儀器分析。

1.2.2 曲線配制

基質空白加標工作曲線：用基質空白皮革樣品按1.2前處理方法提取凈化后所得的溶液稀釋標準儲備溶液，配制成濃度范圍在0.02～2.0 mg/L系列濃度的混合標準工作溶液。

1.2.3 儀器條件

色譜條件：采用ZORBAX SB-C18柱（2.1 mm×150 mm，3.5 μm）作為色譜柱；采用甲醇為流動A相，超純水為流動B相，流速為0.2 mL/min。試驗中柱溫為30 ℃；進樣體積為10 μL。優化后的洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫方法

質譜條件：采用ESI作為離子源；離子噴霧電壓4000 V；干燥氣的溫度和流速分別是350 ℃和11 L/min；霧化器壓力35 psi；利用負離子模式多反應監測對目標物進行定性定量。

2 結果與討論

2.1 質譜條件的優化

通過正離子和負離子掃描模式發現，四氯雙酚A和四溴雙酚A在負離子模式下響應較高，因此使用負離子掃描繼續對2種分析物進行質譜分析。試驗對離子對、碰撞能量、碎裂電壓、霧化器壓力和干燥氣流速等質譜參數進行了優化，最終確定的質譜掃描參數見表2。

表2 MRM檢測參數

2.2 流動相的優化

試驗分別考察了液相色譜常用的幾種流動相體系對分析物的影響，結果發現在這些流動相體系下，目標物的分離度和峰形接近，但響應值差別大。該4種流動相下目標物的質譜響應情況見表3，由結果可知，采用甲醇-純水為流動相體系，目標化合物的峰面積響應值最大。這可能是因為酸、堿或緩沖鹽的加入，抑制了分析物的離子化效率。因此，本實驗選擇甲醇-純水流動相體系，按1.2.3的儀器條件，采用甲醇-純水為流動相的目標物色譜圖見圖1。

圖1 目標化合物的分析色譜圖

表3 不同流動相體系對目標物峰面積響應的影響

2.3 前處理條件的優化

超聲波提取技術具有操作簡單、提取效率高、快速便捷的優點，因此皮革中酚類物質的提取一般采用超聲波提取技術[4,5]。本試驗采用了超聲波提取并比較了甲醇、乙腈和丙酮等常用的有機溶劑對四氯雙酚A和四溴雙酚A溶解性，發現甲醇的提取效率高于乙腈和丙酮，且提取穩定性也好。因此，試驗以甲醇為溶劑采用超聲波提取法萃取目標物。此外，由于皮革基質復雜，容易干擾定性定量測定，因此需要進行凈化處理，本試驗使用采用Pesti Carb石墨化碳萃取柱可有效凈化提取液，有較高的回收率。

2.4 定量方式的確定

由于皮革中含有干擾質譜測定的雜質較多，即使通過固相萃取柱進行凈化，但仍然可能導致較強的基質效應。試驗過程中發現，皮革基質均給四氯雙酚A和四溴雙酚A的檢測帶來較強的基質減弱效應，如果使用常規的單點外標法和工作曲線法進行定量會造成定量數值偏低。試驗采用最常用的牛皮革作為樣品基質，通過對基質空白溶液加不同的標準溶液并進行定量，可有效解決基質效應造成的定量不準確的問題。基質空白加標法配制工作曲線的線性關系見表4，兩種分析物在各自的濃度范圍內線性關系均＞99%，符合日常檢驗工作的要求。

表4 線性關系

2.5 方法定量限、回收率和相對標準偏差

以分析物的峰在譜圖中的信噪比≥10時添加的濃度來確定方法的定量限。向空白樣品中添加目標分析物，按1.2方法進行處理、分析，得到四氯雙酚A和四溴雙酚A的定量限分別為0.1 mg/kg和0.5 mg/kg。

在空白牛皮樣品中加入低、中、高三個水平的標準溶液，按優化的檢測方法進行7次平行加標回收測定。結果如表5所示，四氯雙酚A和四溴雙酚A的平均回收率在83.0%～91.1%之間，相對標準偏差為3.7%～6.3%。可見方法的準確度和精密度較好，符合日常檢驗工作的要求。

表5 回收率和相對標準偏差結果

3 結論

本文以甲醇為溶劑，超聲波提取結合石墨化碳固相萃取柱凈化，建立了液相色譜-串聯質譜法對皮革樣品進行檢測。該方法操作簡便，檢測時間較短，結果準確可靠，可用于皮革中四氯雙酚A和四溴雙酚A的測定。