程序性死亡配體-1在肺腺癌組織中的表達(dá) 及其與臨床病理特征的關(guān)系

吳皓明

（常州市第一人民醫(yī)院病理科，江蘇常州 213000）

肺癌是全世界最常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，也是發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，占新發(fā)惡性腫瘤的11.4%[1]。肺癌包括非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）和小細(xì)胞肺癌兩種亞型，其中NSCLC約占85%[2]。根據(jù)不同組織學(xué)類型，NSCLC又分為鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、支氣管肺泡癌、間變性和大細(xì)胞癌。NSCLC的治療方法主要包括化療、放療、靶向及免疫治療等，傳統(tǒng)治療手段存在高耐藥性和嚴(yán)重不良反應(yīng)，這使得新興的免疫療法成為NSCLC最受關(guān)注的治療方法之一[3]。近年來(lái)，隨著對(duì)腫瘤微環(huán)境研究的不斷深入，腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸機(jī)制成為了研究的熱點(diǎn)，其中包括程序性死亡受體-1（programmed death factor-1，PD-1）和程序性死亡配體-1（programmed death ligand-1，PD-L1）。PD-1/PD-L1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制通過(guò)抑制免疫細(xì)胞活化、增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞耐受作用，從而幫助腫瘤細(xì)胞逃避免疫系統(tǒng)的殺傷清除[4]。腫瘤免疫逃逸對(duì)腫瘤治療和預(yù)后有重要作用，是腫瘤個(gè)體化治療的重要靶點(diǎn)。本研究采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)肺腺癌組織中PD-L1的表達(dá)情況，同時(shí)結(jié)合肺癌患者的臨床病理特征分析兩者之間的關(guān)系，旨在為肺腺癌的免疫治療提供指導(dǎo)建議和理論依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2019年1月至2021年4月常州市第一人民醫(yī)院手術(shù)切除后病理確診的肺腺癌患者99例作為研究對(duì)象，進(jìn)行回顧性研究。其中男性患者54例，女性患者45例；年齡31～84歲，平均年齡（64.53±9.79）歲；腫瘤部位位于左側(cè)肺部51例，右側(cè)肺部48例；腫瘤大小＜3 cm 51例，≥3cm 48例；病變組織分化程度：低分化42例，中分化和高分化57例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移73例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①手術(shù)切除組織經(jīng)病理檢查明確診斷為肺腺癌；②臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他惡性腫瘤患者；②術(shù)前進(jìn)行放療、化療、靶向治療、免疫治療等抗腫瘤治療；③全身性明顯病變。

1.2 研究方法①實(shí)驗(yàn)方法：將99例肺腺癌手術(shù)切除標(biāo)本，取腫瘤部分放置10%甲醛緩沖溶液中2.5～3 h進(jìn)行固定后，分別于75%、85%、95%、100%濃度的乙醇中脫水1 h。脫水后組織浸入二甲苯中30 min～1 h，組織經(jīng)二甲苯浸潤(rùn)透明后，置于融化的石蠟內(nèi)，使石蠟充分滲入組織中，使用的石蠟熔點(diǎn)為56 ℃，總浸蠟時(shí)間為3 h。常規(guī)石蠟包埋法制作成蠟塊，使用切成4 μm白片。切片放入烘箱62 ℃加熱烘烤1 h，在二甲苯溶液中脫蠟10 min/次，共3次。無(wú)水乙醇中浸泡5 min/次，共2次；95%乙醇中浸泡5 min/次，共2次；75%乙醇中浸泡5 min/次，共2次。取出切片在自來(lái)水中震蕩沖洗3次，10 s/次。取抗原修復(fù)液于修復(fù)槽中，提前預(yù)熱至75 ℃，將放有切片的染色架放入修復(fù)液中加熱至97 ℃，修復(fù)30 min，待抗原修復(fù)液冷卻至75 ℃，取出染色架放入Wash緩沖液中冷卻，待玻片冷卻后采用Dako公司商業(yè)化抗體（克隆號(hào)：22C3）在Autostainer Link 48染色平臺(tái)染色，進(jìn)行PD-L1的檢測(cè)。

②結(jié)果判定：PD-L1免疫組化檢測(cè)時(shí)，利用胎盤(pán)組織在PD-L1染色呈強(qiáng)陽(yáng)性的特點(diǎn)，將胎盤(pán)組織作為陽(yáng)性對(duì)照。使用腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性細(xì)胞比例（TPS）作為PD-L1的判定標(biāo)準(zhǔn)，腫瘤組織細(xì)胞膜出現(xiàn)PD-L1染色即為陽(yáng)性細(xì)胞，結(jié)合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)定表達(dá)水平，PD-L1染色陽(yáng)性率以50%為界限，TPS≥50%為PD-L1高表達(dá)組，反之為低表達(dá)組。肺腺癌的分化程度分為三類：低分化（指腫瘤細(xì)胞呈片狀、實(shí)質(zhì)狀排列，分化差，僅有灶性腺樣結(jié)構(gòu)或黏液分泌，細(xì)胞異型性明顯，核分裂象多見(jiàn)，壞死比較明顯）、高分化（指腫瘤細(xì)胞腺上皮多數(shù)呈乳頭狀、管狀、肺泡狀排列，核分裂象少見(jiàn)，細(xì)胞異型性不明顯）、中分化（指腫瘤細(xì)胞分化程度介于前兩者之間）。上述免疫組化和肺腺癌分化程度判讀，由2名病理科醫(yī)師采用雙盲法 進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，PD-L1的表達(dá)強(qiáng)度和肺腺癌臨床病理特征等計(jì)數(shù)資料用[例（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PD-L1在肺腺癌組織中的表達(dá)水平99例肺腺癌患者中PD-L1低表達(dá)79例（79.8%）、高表達(dá)20例（20.2%）。

2.2 PD-L1表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系分析不同PD-L1表達(dá)水平患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；低分化程度、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移肺腺癌患者PD-L1高表達(dá)率分別高于中、高分化程度、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 PD-L1表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系分析[例（%）]

3 討論

癌癥是嚴(yán)重威脅人類健康的疾病，而肺癌發(fā)病率較高已經(jīng)成為全球關(guān)注的公共健康問(wèn)題[5]。肺癌患者早期發(fā)病隱匿，約75%患者確診時(shí)已是中晚期，預(yù)后較差[6]。早期肺癌主要采用手術(shù)治療，局部晚期或晚期肺癌主要采用化療、放療、靶向治療等方法，然而傳統(tǒng)治療方法存在高耐藥性和不良反應(yīng)，使得新興的免疫治療成為廣泛關(guān)注的焦點(diǎn)。

程序性死亡受體-1（PD-1）和程序性死亡配體-1（PD-L1）是目前常用的腫瘤免疫檢查點(diǎn)抑制劑，PD-1是一種跨膜蛋白，多表達(dá)于機(jī)體活化的樹(shù)突狀細(xì)胞、自然殺傷（NK）細(xì)胞、B/T淋巴細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg），可以縮短淋巴細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞的接觸時(shí)間[7]。PD-L1是PD-1最主要的配體，表達(dá)于腫瘤表面的PD-L1與免疫細(xì)胞表面的PD-1結(jié)合后，通過(guò)負(fù)向調(diào)控抗原抗體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，阻斷免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別，使免疫系統(tǒng)不能有效的殺傷腫瘤細(xì)胞，從而抑制免疫反應(yīng)，造成腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展[8]。另一方面，腫瘤微環(huán)境中多種細(xì)胞因子和外泌體誘導(dǎo)PD-L1的表達(dá)，增強(qiáng)其對(duì)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的抑制，促進(jìn)腫瘤的免疫逃逸[9]。

Lisberg等[10]研究發(fā)現(xiàn)，PD-L1陽(yáng)性者接受免疫治療有效率相對(duì)較高，而PD-L1陰性者則對(duì)治療無(wú)明顯反應(yīng)。目前，我國(guó)已批準(zhǔn)多種適用于肺癌治療的PD-1/PD-L1抑制劑，主要有國(guó)外原研藥納武利尤單抗、阿替利珠單抗、帕博利珠單抗及國(guó)內(nèi)創(chuàng)新藥卡瑞利珠單抗、信迪利單抗、替雷利珠單抗等。有研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織的炎癥微環(huán)境可以促進(jìn)腫瘤的免疫逃逸，抗炎藥聯(lián)合免疫治療可能會(huì)提高肺癌患者的預(yù)后[4]。

本研究結(jié)果顯示，PD-L1在腫瘤組織低分化患者和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)顯著高于中、高分化患者和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），在肺腺癌患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與徐子涵等[11]的研究結(jié)果一致。這可能與PD-L1高表達(dá)和腫瘤負(fù)荷及累及范圍有關(guān)，其幫助腫瘤細(xì)胞躲避免疫監(jiān)視，從而有利于腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

綜上所述，PD-L1高表達(dá)與肺腺癌患者腫瘤低分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，可能參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，PD-L1的表達(dá)水平可能作為病情嚴(yán)重程度評(píng)價(jià)及預(yù)后預(yù)測(cè)的因子。但本研究樣本量較小，研究人群較為單一，還需進(jìn)一步的研究對(duì)這一結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。