鹽酸小檗堿對大鼠體內低劑量阿托伐他汀的藥動學影響 及機制研究

余瑞蓮，廖輝雄，陳海珍

（1.深圳市龍華區人民醫院藥學部；2.深圳市龍華區人民醫院康復科；3.深圳市龍華區人民醫院壹城中心社康中心藥房，廣東深圳 518109）

目前，心血管疾病是導致人類死亡的主要原因，而動脈粥樣硬化是導致冠心病和卒中的主要原因，高膽固醇血癥是一般動脈粥樣硬化，特別是冠心病發展的關鍵因素[1]。在個體水平上，隨著總血清膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇水平的增加，動脈粥樣硬化過程和早發性冠心病進展的風險逐漸增加。阿托伐他汀適用于治療血脂異常并具有良好的安全性，其可通過抑制3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶的活性，有效阻斷膽固醇生物合成的早期限速步驟，在極低密度脂蛋白水平升高的情況下，阿托伐他汀會降低三酰甘油水平[2]。小檗堿是一種從傳統中藥材中分離出來的植物性生物堿，對心血管具有保護作用[3]。臨床研究表明，小檗堿可降低血漿膽固醇和葡萄糖水平，它已被用作抗炎劑、抗菌劑、抗高血壓劑、抗心律失常劑、抗腫瘤劑和抗糖尿病劑[4-6]。目前，臨床常使用小檗堿與他汀類藥物聯合治療高脂血癥[7-8]。基于此，本研究旨在探討鹽酸小檗堿對大鼠體內低劑量阿托伐他汀的藥動學影響及機制，為臨床應用小檗堿與他汀類藥物提供指導。

1 資料與方法

1.1 試驗動物一般資料60只SPF級雄性SD大鼠[周 齡10～12周，體 質 量（230±20）g]均 獲自北京晶來華科生物技術有限公司[動物批號：110324220102956362；許 可 證 號：SYXK（京）2022-0015]。動物房飼養環境為恒溫恒濕的屏障環境。將大鼠安置在公用籠子中，籠子放置在（21±2）°C的常規動物房間中，給予12 h光照/12 h黑暗循環，并提供食物和飲用水。本研究根據深圳市龍華區人民醫院動物護理和使用委員會批準的方案（醫學倫理審批號：20220112-017）進行。

1.2 試驗給藥和分組根據研究方案將大鼠分為以下3組：A組（n=20）大鼠首天單獨給予10 mg/kg 劑量的阿托伐他汀灌胃7 d；B組（n=20）大鼠首天先給予20 mg/kg劑量的小檗堿灌胃，5 min后再給予10 mg/kg劑量的阿托伐他汀灌胃7 d；C組（n=20）大鼠給予20 mg/kg劑量的小檗堿連續灌胃6 d，在第7天給藥小檗堿5 min后給予10 mg/kg劑量的阿托伐他汀灌胃。于阿托伐他汀給藥前及給藥后30 min、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h通過尾靜脈出血收集血樣，將血樣在4 °C下以2 880 r/min 離心10 min，收集上清液以獲得血漿樣本，將其保存在-80 °C直至使用。

1.3 試驗方法

1.3.1 藥物代謝動力學分析本研究使用Phoenix WinNonlin 8.1版（普林斯敦美國）藥動學軟件，以線性向上對數向下梯形法進行非隔室藥代動力學分析。評估阿托伐他汀的血漿參數，包括達到最大血漿濃度的時間（Tmax）、最大（峰值）血漿濃度（Cmax）、終末半衰期（T1/2）、從0到無窮大的血漿濃度-時間曲線下面積[AUC(0-∞)]、從0到時間t的AUC[AUC(0-t)]、清除率（CLz/F）、平均滯留時間[MRT(0-t)和MRT(0-∞)]。通過鹽酸小檗堿獲得的值來計算Cmax和AUC比率。

1.3.2 精密度和準確度取阿托伐他汀的標準儲備液用乙腈分別稀釋成濃度為15、5、1.5 μg/mL的阿托伐他汀溶液。分別取以上各濃度的阿托伐他汀溶液各10 μL，加入100 μL的空白血漿,分別配成阿托伐他汀終濃度為100、350、1 000 ng/mL的質控樣品溶液。評估樣品稀釋效果，以確保在用空白基質稀釋后可以正確測定超出校準范圍濃度上限的分析物濃度。精密度和準確度的驗收標準分別為變異系數（Coefficient of Variation）低于或等于15%和偏差在±15%以內。

1.4 統計學分析本研究中的數據全部采用SPSS 20.0統計分析軟件進行處理。計量資料采用（±s ）表示；在重復測量資料分析前，對球性條件進行驗證（Mauchly球性檢驗），即任意兩個時間點之間的差值的方差差異無統計學意義，球性條件得到滿足后可采用普通的單因素方差分析，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血漿中阿托伐他汀精確度、準確度分析阿托伐他汀的3個質控濃度100、350和 1 000 ng/mL的精密度和準確度見表1，結果表明本方法的精密度和準確度滿足要求。

表1 血漿中阿托伐他汀精確度、準確度分析（±s ）

表1 血漿中阿托伐他汀精確度、準確度分析（±s ）

質控濃度（ng/mL） 日內 日間測定濃度（ng/mL） 準確度（%）精密度（%） 測定濃度（ng/mL） 準確度（%）精密度（%）100 134.59±11.24 108.35 13.40 125.33±8.42 98.34 12.34 350 495.38±22.18 102.44 9.95 503.26±18.34 105.35 7.12 1 000 1 386.24±37.45 105.49 5.36 1 425.33±45.51 108.26 9.23

2.2 大鼠阿托伐他汀的藥動學參數分析通過藥動學軟件對阿托伐他汀進行藥動學參數的計算，A組、B組和C組大鼠阿托伐他汀在體內藥代動力學參數的比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 大鼠阿托伐他汀的藥動學參數分析（±s ）

表2 大鼠阿托伐他汀的藥動學參數分析（±s ）

Tmax：達到最大血漿濃度的時間；Cmax：最大（峰值）血漿濃度；T1/2：終末半衰期；AUC(0-∞)：從0到無窮大的血漿濃度-時間曲線下面積；AUC(0-t)：從0到時間t的AUC；CLz/F：清除率；MRT：平均滯留時間，即MRT(0-t)和MRT(0-∞)。

參數 A組 B組 C組 F值 P值Tmax（h） 0.56±0.18 0.52±0.17 0.55±0.15 9.634 0.845 Cmax（ng/mL） 302.64±83.29 322.47±77.24 314.58±82.16 12.058 0.074 T1/2（h） 11.46±3.25 12.52±2.78 10.86±1.75 11.416 0.127 AUC(0-t)（h·ng/mL） 113.26±72.43 1 258.53±95.31 121.34±63.27 13.225 0.886 AUC(0-∞)（h·ng/mL） 1 735.29±241.66 1 972.34±255.18 1 942.37±288.65 8.631 0.521 CLz/F（L/H/kg） 11.72±3.28 10.49±2.85 12.65±3.05 10.462 0.362 MRT(0-t)（h） 3.74±0.75 3.82±0.81 3.99±0.70 9.557 0.851 MRT(0-∞)（h） 16.24±5.24 15.44±4.23 13.89±4.75 12.055 0.603

2.3 大鼠體內阿托伐他汀濃度分析分析不同時間大鼠體內阿托伐他汀的濃度，在給藥后第30 min 、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h和12 h，A組、B組和C組大鼠阿托伐他汀血藥濃度比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表3。

表3 大鼠體內阿托伐他汀濃度分析（ng/mL，±s ）

表3 大鼠體內阿托伐他汀濃度分析（ng/mL，±s ）

注：在重復測量資料分析前，對球性條件進行驗證（Mauchly球性檢驗），即任意兩個時間點之間的差值的方差差異應無統計學意義，球性條件得到滿足后可采用普通的單因素方差分析。

時間 A組 B組 C組 F值 P值30 min 246.18±24.52 265.37±28.24 255.19±26.43 11.625 0.523 2 h 185.35±26.38 196.62±24.33 211.35±28.37 9.775 0.083 4 h 117.36±18.49 123.57±17.43 115.34±18.29 13.026 0.071 6 h 93.26±11.35 94.41±14.33 105.35±16.45 10.856 0.092 8 h 85.33±9.46 97.25±10.54 103.57±11.36 8.451 0.136 10 h 76.25±7.26 71.57±8.33 83.25±9.57 11.733 0.258 12 h 70.25±5.33 67.36±4.22 65.22±3.51 12.528 0.084

3 討論

阿托伐他汀吸收迅速，2～3 h內即可達到血漿峰濃度，因為其相對較長的半衰期，阿托伐他汀的降脂作用不受一天中給藥時間的影響[9]。阿托伐他汀可被細胞色素P450（CYP）3A4和P-450 3A5代謝為鄰羥基阿托伐他汀和對羥基阿托伐他汀，這兩種活性代謝物延長了阿托伐他汀對3-羥基-3-甲基戊二酰-CoA（HMG-CoA）還原酶的作用，導致酶抑制的半衰期為20～30 h；阿托伐他汀的臨床劑量范圍為10～80 mg/d，以酸形式給藥；阿托伐他汀酸具有高溶解性和滲透性，口服后藥物即可完全被人體吸收[9]。小檗堿是從中藥小檗堿中提取的一種異喹啉類生物堿，具有多種藥理作用[10]。小檗堿通過腸道微生物群的硝基還原酶將自身轉化為二氫小檗堿，其在溶液中不穩定，通過氧化在腸組織中恢復為小檗堿。CYP酶是重要的氧化酶，可幫助代謝大部分的臨床治療常用藥物[11]。藥物代謝分為Ⅰ期代謝和Ⅱ期代謝，CYP酶主要參與藥物的I期代謝，其中CYP3A4是關鍵的同工酶之一，廣泛分布于小腸和肝臟，參與臨床60%以上藥物的代謝[12]。藥物對CYP3A4的誘導或抑制可能會影響與它們共同給藥的藥物的藥代動力學，從而改變它們的療效或毒性。眾所周知，小檗堿和他汀類藥物通過CYP3A4代謝，競爭結合CYP3A4的活性位點[13]。本研究通過改變在大鼠體內灌胃鹽酸小檗堿時間探討對低劑量阿托伐他汀的藥動學影響，結果表明大鼠在單次及多次灌胃小檗堿后,阿托伐他汀體內藥代動力學參數的改變無統計學意義（P＞0.05）。另外，本研究在給藥小檗堿鹽酸后，0～12 h內檢測了阿托伐他汀在大鼠體內的濃度變化，結果顯示在30 min內阿托伐他汀的體內濃度達到峰值，2 h后開始下降，在第12 h維持在60～70 ng/mL。 與A組大鼠相比，B組大鼠和C組大鼠多了鹽酸小檗堿的灌胃，但試驗結果為鹽酸小檗堿對低劑量的阿托伐他汀血藥濃度沒有影響（P＞0.05）。

本研究結果提示臨床在聯合使用鹽酸小檗堿和阿托伐他汀時，正常用量下小檗堿可能不會對阿托伐他汀的藥動學造成影響,但由于本研究是在大鼠體內進行的，與人體內的藥動學變化是否一致，仍需進一步地研究。