某院皮膚科門診男性患者人乳頭瘤病毒基因亞型分析

蔣 惟，陳火英，于弘智，莫麗軍，王 迪，韋傳東

桂林醫學院第二附屬醫院檢驗科，廣西桂林 541199

人乳頭瘤病毒(HPV)是一類雙鏈環狀DNA病毒。具有獨特的嗜上皮性，感染分層鱗狀上皮，包括皮膚和黏膜[1]，引起各種良性和惡性疾病。對女性而言，HPV感染主要導致宮頸癌，對于男性，HPV感染常引起生殖器疣，比如尖銳濕疣。迄今為止，已發現200多種HPV亞型，其中約40種可導致生殖道感染[2]。以尖銳濕疣為主的生殖器疣，其在皮膚科門診的檢出率越來越高，HPV檢測也越來越得到醫患的重視。本研究回顧性分析本院2019年1月至2021年7月男性HPV感染和型別分布情況，為男性HPV感染引起的相關性傳播疾病的早期篩查、預防、診斷提供理論依據，以及為男性HPV疫苗的研發提供流行病學數據。

1 資料與方法

1.1一般資料 301例受檢者均來自2019年1月至2021年7月到桂林醫學院第二附屬醫院皮膚科門診就診的疑似HPV感染男性患者，為桂林臨桂地區及周邊縣市的常住人口。年齡范圍15～85歲，平均年齡32.15歲。標本分別取自患者皮損部位的組織，包括尿道口、冠狀溝、肛周、包皮等處。采集的標本立即放入專用標本采集管[亞能(深圳)生物技術有限公司]提供的HPV 23分型細胞保存管中，冷藏保存待測。

1.2試劑與儀器 HPV DNA基因分型檢測試劑盒[亞能(深圳)生物技術有限公司]，旋渦振蕩器(Thermo Scientific公司，型號：88880018)，高速離心機(湖南湘儀開發有限公司，型號：H1650)，干式恒溫儀(上海一恒科技有限公司，型號：TU-100C)，普通PCR擴增儀(BIO-RAD，型號：S1000)，迷你離心機(北京五洲東方有限公司，型號：MiNiQ)，分子雜交儀(興化市分析儀器廠，型號：FYY-3)。

1.3方法 按照試劑盒說明書提取HPV DNA，將0.5 mL洗脫液轉移至1.5 mL離心管中，13 000 r/min離心10 min，棄上清液后加入100 μL裂解液，100 ℃金屬浴加熱100 min，13 000 r/min離心10 min，保留上清液。使用Bio-rad普通PCR擴增儀進行擴增，50 ℃ 15 min，95 ℃ 10 min，然后94 ℃ 10 s解鏈，42 ℃ 90 s退火，72 ℃ 30 s延伸重復10個循環；接著94 ℃ 10 s解鏈，42 ℃ 60 s退火，72 ℃ 20 s延伸重復30個循環。FYY-3型分子雜交儀進行反向雜交，條件為51 ℃ 2 h，然后洗膜、孵育、顯色判讀。本研究使用的HPV基因分型檢測試劑盒能同時檢測23種基因型，包括低危亞型(HPV 6、11、42、43、81、83)和高危亞型(HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73和82)。

1.4統計學處理 采用SPSS24.0統計軟件和Excel對數據進行統計學分析，計數資料以例數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1HPV檢出率及型別分布情況 301例男性患者共檢測出235例HPV陽性，陽性檢出率為72.98%。檢出率前6位的HPV亞型依次是HPV6(66.38%)、HPV11(50.21%)、HPV52(21.70%)、HPV16(19.15%)、HPV51(16.60%)，HPV43和HPV59(并列第六，均為15.74%)。見表1。

表1 男性HPV陽性患者各型別檢出率

2.2HPV型別感染類型分布情況 同時感染兩種及以上HPV亞型即為多重感染。235例HPV陽性標本中，單一感染106例，占45.10%；多重感染129例(54.90%)。見表2。

表2 不同感染類型占比情況

2.3不同感染亞型中高、低危亞型分布情況 235例陽性標本中，單一感染中的低危亞型占81.13%(86/106)，與高危亞型比較有統計學意義(χ2=82.189，P<0.05)。多重感染中，以高低危混合感染為主，占80.62%(104/129)(混合亞型與低危亞型比較，χ2=117.802，P<0.05；混合亞型與高危亞型比較，χ2=145.409，P<0.05)。見表3?；旌细腥局械臀喰皖l次出現排前2位的分別是HPV 6和HPV 11，高危亞型頻次出現排前2位的分別是HPV 16和HPV 18；而組合亞型出現最多的是二重感染HPV 6+HPV 52，為5例(5/34，14.71%)，三重及以上感染中未發現相同組合亞型。見表4。

表3 不同感染類型高低危亞型分布情況(n)

表4 高低危混合感染中亞型出現頻次情況

續表4 高低?；旌细腥局衼喰统霈F頻次情況

2.4HPV感染年齡分布情況 HPV陽性高峰年齡段為20～29歲和30～39歲，陽性率分別為34.04%(80/235)、26.81%(63/235)。各年齡段陽性率以<20歲(93.10%)和≥60歲(90.48%)最高。見表5。

表5 HPV感染年齡分布情況

3 討 論

HPV感染在人群中具有普遍性，目前主要偏向于女性HPV感染的研究和疫苗的研發，而男性HPV的研究較少。隨著近幾年男性患者HPV感染率的增多，尤其男-男性行為的增加，使得高危型HPV在男性中的感染率進一步提高[3]，故對男性HPV感染進行研究，能夠為男性患者的HPV檢測、治療、生殖器官腫瘤預防和疫苗的研發提供流行病學數據。

本研究結果顯示，本院HPV感染率為72.98%，與重慶地區(70.52%)和杭州地區(68.02%)相近[4-5]，低于鄂州地區(84.93%)[6]，高于溫州(40.59%)[7]、長春(59.95%)[8]、山東(57.80%)[9]。23種HPV亞型在235例陽性患者中全部檢出，最常見的HPV亞型依次為6、11、52、16、51、43、59，與以往文獻報道不一致。宛傳丹等[10]在常熟地區的研究結果顯示，最常見的HPV亞型為6、11、39、52、66；馮莉亞等[11]在浙江地區的研究結果顯示，最常見的HPV亞型為6、11、52、51、16、81；方炳雄等[12]在潮汕地區的研究結果顯示，最常見的HPV亞型為6、11、16、51、52。上述研究說明HPV的感染率、感染型別分布在不同地區人群中存在一定的差異性，原因可能與生活習性和外來人員占比有關。有研究證明女性HPV感染具有民族差異性[13-14]。HPV E6、E7蛋白是其致癌蛋白，在不同種族中的表達有差異[15]。男性HPV感染是否具有民族差異缺乏數據支持，還需要大數據收集，從宿主和病毒兩方面進行流行病學和病因機制的研究。HPV 6、11、52這3種亞型幾乎存在于所有地區的男性感染，這也為男性HPV疫苗的研發提供了數據支持。研究發現本院男性HPV陽性患者中，單一感染到十重感染都存在。而單一亞型感染占45.11%(106/235)，其中感染低危亞型的以HPV 6和HPV 11感染為主。雙重及以上多重感染以高低危混合感染為主，且以低危亞型為主，其中HPV 6和HPV 11出現頻次最多(110/364，30.22%)；另外，高危亞型在混合感染中以HPV 16、HPV 18出現頻次最多(46/364，12.64%)。統計顯示二重混合感染中以HPV 6+HPV 52為主，說明HPV 52在組合亞型中為優勢亞型，值得關注。同時，四重感染及以上均為高低?；旌细腥荆胰馗腥疽陨暇鶡o相同組合亞型，故感染的重數越多，不同亞型均有機會出現，這進一步體現了HPV感染在男性患者中的復雜性。

本研究還顯示，男性檢測人數及陽性主要感染人群都集中在20～29歲年齡段(34.04%)和30～39歲年齡段(26.81%)，與以往研究基本一致[7-8,11-12]。可能與該年齡段男性處于婚育最佳年齡及社會活動頻繁有關。值得關注的是，<20歲年齡段人群的陽性率超過90%，八重感染中，<20歲年齡段人群感染率也達到50%(2/4)，分析認為這與青少年性知識及防護意識缺失有關；同時，>60歲年齡段人群的陽性率也在90%以上，九重和十重感染雖各只有1例，但都出現在>60歲年齡段人群，分析認為這與老年人基礎疾病高發，免疫力下降，衛生習慣不良，以及思想守舊、耽誤就醫有很大的關系[16]。而HPV多重感染是尖銳濕疣復發的高危因素[17]，故在做好20～29歲和30～39歲這兩個年齡段的HPV防治工作外，青少年及老年人群的HPV防治也是不能輕視的。

綜上所述，本院男性HPV感染人群中以HPV 6、11亞型感染為主，好發于20～39歲年齡段。單一感染以低危型為主，多重感染中，以高低?；旌蠟橹?。本研究結果可為男性HPV疫苗及HPV感染的治療提供流行病學數據。本研究是回顧性研究，男性配偶感染情況和免疫細胞功能等資料未納入研究范圍，存在一定局限性。