淺談新冠病毒的檢測(cè)

楊 然 李韶山

（華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 廣東廣州 510631）

新冠病毒感染人體后，會(huì)在鼻腔、咽部、下呼吸道等處“定居”并進(jìn)行繁殖。通過采集鼻咽拭子等標(biāo)本進(jìn)行病毒核酸檢測(cè)，是目前盡早確定是否感染新冠病毒最有效的檢測(cè)方法。開展大規(guī)模的核酸檢測(cè)有利于精準(zhǔn)防控、早診早治，維護(hù)群眾的身體健康；同時(shí)也利于保障人員的合理流動(dòng)，推動(dòng)社會(huì)經(jīng)濟(jì)復(fù)蘇及人們生活秩序的恢復(fù)。

1 新冠病毒的核酸檢測(cè)

新冠病毒的核酸檢測(cè)其實(shí)就是對(duì)其遺傳物質(zhì)RNA進(jìn)行檢測(cè)，其方法是實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法。新冠病毒通過呼吸道感染人體，所以從呼吸道采集樣本。目前常規(guī)的樣本類型大致有2類：①用咽拭子在人的上呼吸道（咽部或鼻腔）擦拭采集。②收集下呼吸道痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。通常肺部灌洗液和痰液中的病毒含量高于鼻咽等呼吸道拭子，而呼吸道拭子中的病毒量會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于血液。出于大量采集樣本需要便攜與快捷的考慮，大多核酸檢測(cè)通常采取咽拭子在人的上呼吸道擦拭采集。采集到的樣本將被低溫封存，并送到專門的檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)。

新冠病毒的核酸檢測(cè)步驟為：①?gòu)牟杉臉悠诽崛NA。②將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA：加入逆轉(zhuǎn)錄酶、Oligo（dT）引物、dNTP。根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，Oligo（dT）引物與病毒RNA 3′端相結(jié)合，逆轉(zhuǎn)錄酶在此結(jié)合處開始，以RNA為模板沿著5′→3′端合成堿基互補(bǔ)的DNA鏈，即cDNA。③PCR擴(kuò)增，通常采取探針法，即以新冠病毒cDNA某一高度保守基因序列區(qū)域?yàn)闄z測(cè)靶標(biāo)，通過PCR擴(kuò)增，使這段靶標(biāo)數(shù)量呈指數(shù)級(jí)式增加，通過檢測(cè)靶標(biāo)的熒光信號(hào)來(lái)確定樣本中是否有病毒核酸。中國(guó)疾病預(yù)防控制中心推薦選用的新型冠狀病毒的檢測(cè)靶標(biāo)是核殼蛋白N，全長(zhǎng)99個(gè)堿基對(duì)（bp），與之對(duì)應(yīng)的正向引物、反向引物、熒光探針，同時(shí)還需加入DNA聚合酶、dNTP。

2 新冠病毒核酸檢測(cè)中的“假陽(yáng)性”與“假陰性”

新冠病毒核酸檢測(cè)的“假陽(yáng)性”是指患者沒感染新冠病毒，但核酸檢測(cè)出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。“假陽(yáng)性”的出現(xiàn)通常是由于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)過程中標(biāo)本間的交叉污染或?qū)嶒?yàn)室核酸污染造成的。在技術(shù)層面上講，只要實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格落實(shí)質(zhì)控工作，可有效避免“假陽(yáng)性”的產(chǎn)生。

“假陰性”是指患者的臨床癥狀、肺部影像學(xué)結(jié)果甚至流行病學(xué)史都支持為新冠肺炎，但患者病毒核酸檢測(cè)結(jié)果為“陰性”，檢測(cè)結(jié)果與臨床不符。通常“假陰性”產(chǎn)生原因有：①病毒入侵人體初期，人體內(nèi)病毒載量尚未達(dá)到可檢測(cè)的程度。在病毒潛伏期、輕度癥狀、嚴(yán)重癥狀的不同時(shí)期，人體的不同部位（如鼻咽部、口咽部、氣管、支氣管和肺泡）的病毒載量會(huì)存在差異。所以，采樣時(shí)機(jī)和采樣部位的不同可能導(dǎo)致所采集的標(biāo)本中沒有足夠量的病毒。②采樣不規(guī)范、采集部位不正確，導(dǎo)致樣品中被病毒感染的細(xì)胞太少或沒有，則有可能造成“假陰性”。③任何檢測(cè)方法都有其檢測(cè)下限，如果患者標(biāo)本內(nèi)的病毒達(dá)不到所使用試劑和方法的檢測(cè)下限，則會(huì)出現(xiàn)假陰性。

由于“假陽(yáng)性”和“假陰性”的存在，為避免出現(xiàn)誤差，實(shí)驗(yàn)室操作過程需要避免樣本之間的交叉污染和陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物及陽(yáng)性對(duì)照引起的實(shí)驗(yàn)室污染，實(shí)驗(yàn)過程中合理的陰性、陽(yáng)性對(duì)照設(shè)置是實(shí)驗(yàn)質(zhì)控與結(jié)果有效的保證。

新冠病毒的核酸檢測(cè)已經(jīng)是比較成熟的檢測(cè)方法了，只要在咽喉部位擦拭幾秒鐘就可以采集到標(biāo)本。通過分析判斷是否有新冠病毒的核酸成分，可以盡早發(fā)現(xiàn)感染者，甚至在感染者出現(xiàn)癥狀前就可以檢測(cè)到陽(yáng)性。感染者在隔離治療后，若其咽拭子檢測(cè)陰性說(shuō)明病毒已經(jīng)清除，不具有傳染性了。目前兩次咽拭子核酸檢測(cè)陰性是確診病例和無(wú)癥狀感染者解除隔離的標(biāo)準(zhǔn)之一。

3 新冠病毒的抗原、抗體檢測(cè)

核酸檢測(cè)是對(duì)病毒的核酸進(jìn)行檢測(cè)，而抗原檢測(cè)則是對(duì)新冠病毒表面的核衣殼蛋白（N蛋白）進(jìn)行檢測(cè)。因新冠病毒核衣殼蛋白表達(dá)量較高、更易突變，對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)可直接反映是否感染新冠病毒。此外，因抗原檢測(cè)無(wú)需進(jìn)行核酸檢測(cè)所需的PCR擴(kuò)增等過程，檢測(cè)速度更快、操作更便捷，有助于提高檢測(cè)效率；但準(zhǔn)確度較低，一般用于感染早期。

核酸檢測(cè)與抗原檢測(cè)都是對(duì)新冠病毒進(jìn)行直接檢測(cè)，而抗體檢測(cè)則是通過特定的抗原與待測(cè)樣品中的抗體發(fā)生免疫反應(yīng)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中的抗體進(jìn)行檢測(cè)；抗體檢測(cè)是通過抗原-抗體特異性免疫反應(yīng)來(lái)間接判斷是否感染新冠病毒的一種檢測(cè)方式。