Hepcidin-25、HbA2、PON1表達水平在預測妊娠期缺鐵性貧血中的價值

晉艷婷，趙興丹，翁艾罕，李素皎

海南省婦女兒童醫學中心輸血科，海南海口 570100

缺鐵性貧血是一種多發于婦女兒童的貧血癥，是由于缺鐵，血紅蛋白無法正常合成，紅細胞生成受限所導致。約50%的孕婦會出現貧血，且大多數為缺鐵性貧血[1]。缺鐵患者多出現面色蒼白、倦怠、食欲不佳、惡心、腹瀉、吞咽困難等癥狀[1]，久病者甚至會出現指甲皺縮、反甲、皮膚干枯、毛發干燥等[2]，致使孕婦的抵抗力下降、妊娠不良風險增加、后續生產的風險增加。孕婦輕中度貧血對胎兒的影響不大，但重度貧血會引發胎兒生長受限，甚至發生早產或死胎等不良妊娠結局。妊娠期缺鐵會對母體和胎兒造成嚴重的不良后果，因此，應高度重視妊娠期缺鐵性貧血的診療。鐵調素-25(Hepcidin-25)是一類調節鐵平衡的多肽，主要在肝臟中產生，是鐵代謝的關鍵調節因子[2]。血紅蛋白A2(HbA2)在健康成人體內占血紅蛋白總量的2.5%～3.5%[1]，缺鐵性貧血會導致HbA2水平降低[2]。氧磷酶1(PON1)是人體內重要的生物活性物質，在肝臟中合成，已有研究表明，PON1水平降低可預測患者缺鐵性貧血的發生[3]。在臨床治療上，缺鐵性貧血還容易與珠蛋白生成障礙性貧血和慢性炎癥性貧血、鐵粒幼細胞性貧血的診斷混淆，本研究探討了Hepcidin-25、HbA2、PON1在妊娠期缺鐵性貧血中的診斷效能，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年4月至2020年4月本院收治的60例妊娠期缺鐵性貧血患者作為觀察組，其中輕度貧血29例，重度貧血31例。(1)納入標準：①所有患者均參照《妊娠期鐵缺乏和缺鐵性貧血診治指南》相關標準確診為妊娠期缺鐵性貧血；②臨床各項檢查資料完整；③無妊娠期其他并發癥。(2)排除標準：①合并其他器官及系統的重大疾病；②合并血液系統其他疾病；③未滿18歲；④患有精神類疾病。選取同期60例未出現缺鐵性貧血孕婦作為對照組，孕檢各項指標均正常。兩組基線資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。所有研究對象均自愿參與本研究，且簽署知情同意書。本研究經過本院醫學倫理委員會批準。

表1 兩組基線資料比較

1.2方法

1.2.1標本采集 抽取所有研究對象孕24～28周空腹靜脈血3.0 mL，置于含分離膠與促凝劑的黃色真空采血管及乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝紫色真空采血管中，充分混勻并在2 h內送檢。分離血清，黃色真空采血管的血清標本用于檢測PON1活力，紫色真空采血管的血清標本用于HbA2、Hepcidin-25水平檢測。

1.2.2指標檢測 采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清Hepcidin-25水平，試劑盒由美國CUSABIO公司生產。采用SEBIA全自動高壓液相毛細管電泳儀(法國Sebia公司)檢測血清HbA2水平，試劑盒為儀器配套試劑盒。采用化學發光免疫分析法檢測血清PON1水平，試劑盒購自上海澤葉生物科技有限公司。所有檢測流程參照試劑盒說明書及相關標準操作規程進行。

2 結 果

2.1兩組Hepcidin-25、HbA2、PON1水平比較 觀察組的Hepcidin-25、HbA2、PON1水平明顯低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組Hepcidin-25、HbA2、PON1水平比較

2.23項指標對妊娠期缺鐵性貧血的診斷效能 Hepcidin-25、HbA2、PON1診斷妊娠期缺鐵性貧血的曲線下面積(AUC)分別為0.973、0.915、0.993，3項指標均有較好的診斷效能。見表3。

2.33項指標對妊娠期缺鐵性貧血的影響 多因素Logistic回歸分析結果顯示，Hepcidin-25≤103.22 ng/mL、HbA2≤2.21%、PON1≤556.89 U/L是妊娠期缺鐵性貧血發生的獨立危險因素(P<0.05)。其中影響最大的獨立危險因素是Hepcidin-25，最小的是HbA2。見表4。

2.4構建預測妊娠期缺鐵性貧血的Nomogram模型 將Hepcidin-25(≤103.22 ng/mL)、HbA2(≤2.21%)、PON1(≤556.89 U/L)納入Nomogram模型，構建妊娠期缺鐵性貧血的預測模型。見圖1。

注：第一行點線代表著每個影響因素對應的分數；第二行至第四行分別表示3個影響因素；第五行表示各個影響因素的總分；最后一行表示發生缺鐵性貧血的概率。每個影響因素軸線上的值向上做一條垂線對應到點線上，確定每個影響因素的分值，計算3個影響因素的總分。

表3 3項指標對妊娠期缺鐵性貧血的診斷效能

表4 3項指標診斷妊娠期缺鐵性貧血的多因素Logistic回歸分析

2.5Nomogram模型校正曲線及臨床凈收益分析 內部驗證結果顯示，Nomogram模型預測出現妊娠期缺鐵性貧血的C-index 為0.764(95%CI：0.413～1.201)。校正曲線顯示觀測值與預測值之間保持較好一致性。見圖2。Nomogram模型預測妊娠期缺鐵性貧血出現的風險閾值為>0.086，Nomogram模型提供了臨床凈收益。此外，DCA 曲線顯示該Nomogram預測模型的臨床應用價值較高，凈收益均高于Hepcidin-25、HbA2、PON1。見圖3。

圖2 Nomogram模型校正曲線

注：①代表Nomogram預測模型；②代表當所有患者用常規方法去預測并進行治療，所獲得的臨床收益；③代表假設所有患者都不進行預測，也不治療，所獲得的臨床收益為0;④為Hepcidin-25；⑤為HbA2；⑥為PON1。

3 討 論

妊娠期缺鐵性貧血作為影響孕婦健康和生命的危險因素，是一種妊娠期常見的并發癥，尤其多發于孕中晚期。孕早期食欲不振、妊娠反應帶來的身體不適，以及胎兒發育、孕婦血容量增加導致了血液稀釋，鐵吸收減少，使孕婦血紅蛋白合成不足、紅細胞生成不足，最終引發了貧血[1]。我國妊娠期缺鐵性貧血發病率較高且逐年遞增[2]。鐵缺乏會影響到新生兒長期的健康。臨產時缺鐵性貧血會導致孕婦剖宮產的概率增加，增加生產風險。即使在孕晚期糾正貧血也可能無法阻止不良妊娠結局的發生。目前，臨床用于確診缺鐵性貧血的手段是骨髓穿刺涂片，需要對患者進行侵入性操作，其應用具有很大的局限性。因此，尋找一個合適的可用于無創診斷缺鐵性貧血的指標是現階段亟待解決的大問題。

相關研究數據表明，妊娠期缺鐵性貧血患者血清Hepcidin-25水平下降，低血清水平Hepcidin-25是孕婦發生妊娠期缺鐵性貧血的獨立危險因素[3]，本研究也驗證了這一結論。觀察組的血清Hepcidin-25水平明顯低于對照組，且ROC曲線顯示該指標對妊娠期缺鐵性貧血也有較好的診斷效能。多因素Logistic回歸分析結果顯示，血清Hepcidin-25≤103.22 ng/mL為孕婦發生妊娠期缺鐵性貧血的獨立危險因素。Hepcidin-25為膳食鐵吸收和體內鐵分布的中心調節劑，導致血清Hepcidin-25水平下調最重要的因素是缺鐵。肽激素通過結合作用來降低血液循環中的鐵，調節鐵輸出蛋白及鐵轉運蛋白。缺鐵是導致貧血的重要原因，而孕婦出現貧血的主要原因在于孕婦特殊的鐵需求，發育中的胎兒需要較多的鐵元素。吸收的鐵不足以滿足懷孕后期的需求，進而引發母體出現了缺鐵性貧血的癥狀。

相關研究表明，HbA2可作為監測妊娠期缺鐵性貧血的指標[4]。本研究通過ROC曲線分析及多因素Logistic回歸分析，發現HbA2≤2.21%也是妊娠期缺鐵性貧血發生的獨立危險因素。本研究結果表明，觀察組的HbA2水平明顯低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。這一表現的原因正是由于鐵供給與需求的失衡[5-7]，影響了血紅蛋白的正常生成[8-10]。因此，可以根據患者的HbA2水平，在宏觀上預測缺鐵性貧血癥的發生。

PON1在肝臟中分泌，在血液中緊密固定在高密度脂蛋白上，可抑制低密度脂蛋白的氧化修飾，并水解具有生物活性的溶血磷脂等脂質過氧化物[11-15]。以往研究表明PON1水平在妊娠期缺鐵性貧血患者中明顯降低[16-21]，本研究也證實了這一觀點。本研究進一步分析了PON1的診斷效能，并進行了多因素Logistic回歸分析，結果顯示PON1在妊娠期缺鐵性貧血中具有較好的診斷效能，且PON1≤556.89 U/L是妊娠期缺鐵性貧血的獨立危險因素。

在以上分析結果的基礎上，利用3項指標構建Nomogram模型，Nomogram模型預測出現妊娠期缺鐵性貧血的C-index 為0.764(95%CI：0.413～1.201)。校正曲線顯示觀測值與預測值之間保持了較好一致性。Nomogram模型預測妊娠期缺鐵性貧血出現的風險閾值為>0.086，Nomogram模型提供了臨床凈收益。Nomogram模型臨床凈收益均高于Hepcidin-25、HbA2、PON1。綜上所述，本研究證實，Hepcidin-25、HbA2、PON1在妊娠期缺鐵性貧血患者中的水平均與健康對照者差異有統計學意義(P<0.05)，構建Nomogram模型可用于臨床對妊娠期缺鐵性貧血的預測。

本研究在既往研究基礎上，既驗證了前人研究的準確性，還使用建模的方法對患者患病的風險因素進行進一步分析，并采用新穎的Nomogram模型預測了妊娠期缺鐵性貧血出現的風險，該模型可以通過整合不同的相關變量，來生成臨床事件發生的單個數值概率[22-23]，滿足對生物和臨床整合模型需求，推動個性化醫療，以協助臨床決策[24-25]。從而實現對不同孕期患者進行分層對癥治療，通過膳食和藥物補充患者缺少的鐵元素，從根本上改善患者的病情。