TEAD4、SHP-2及Ang-2表達與口腔鱗癌病理參數和預后的關系

孟媛媛 趙亭亭 呂紅娟

口腔鱗癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）是頭頸部鱗癌中發病率最高的一種惡性腫瘤，據相關數據顯示，OSCC 發病率近年有逐漸上升趨勢［1］。臨床中對于OSCC 患者的治療方式包括外科手術、放/化療以及其他輔助治療，且獲得了較好的臨床療效，但患者五年生存率仍在50%以下［2］。如何提高改善患者預后，尋找預后評估相關指標成為臨床研究熱點。組蛋白賴氨酸去甲基化酶4A（Histone lysine demethylase 4，TEAD4）屬于TEA結構域DNA 結合轉錄因子家族（TEA domain transcription factor，TEAD）中的核心成員，在人體疾病以及各種生物學反應中具有重要的作用［3］。蛋白酪氨酸磷酸酶-2（Protein tyrosine Phosphatase-2，SHP-2）在組織、細胞中均廣泛表達，與胚胎發育、細胞遷徙、繁殖、分化等均有密切的聯系，有研究顯示，SHP-2 的異常表達與多種癌癥發生具有密切聯系［4］。促血管生成素-2（Angiopoietin-2，Ang-2）是促腫瘤血管生成的相關因子，對病理性血管生成及發育有調節作用，可影響腫瘤的惡性發展［5］。本研究將通過分析TEAD4、SHP-2 及Ang-2在OSCC 患者中的表達情況，了解三者與患者病理參與及預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2019年12月至2020年12月于河北北方學院附屬第一醫院行外科手術治療或活檢的的OSCC 患者121 例，其中男72 例，女49 例，平均年齡為（59.59±4.16）歲，根據國際抗癌聯盟（Union for International Cancer Control，UICC）［6］中分期標準分為：Ⅰ～Ⅱ期55 例，Ⅲ～Ⅳ期66 例；68 例淋巴結轉移；組織分化：低分化74 例，中-高分化47 例；腫瘤直徑≥3 cm 57 例，＜3 cm 64 例。納入標準：①均經臨床病理診斷確診為OSCC，符合《口腔鱗狀細胞癌時辰化療中國專家共識》中相關診斷標準［7］；②在檢查前均未進行放療或化療；③患者知情且同意；④臨床資料完整。排除標準：①存在血液系統或免疫系統疾病者；②合并存在心、肝、腎等嚴重原發性疾病者；③合并其他腫瘤者；④存在嚴重并發癥者。以患者術中病理送檢組織作為OSCC 組，癌旁組織（距離癌組織＞5 cm）為對照組。本研究經院醫學倫理委員會批準通過。

1.2 方法

1.2.1 資料收集

收集患者臨床資料，包括年齡、性別、腫瘤直徑、病理特征等，病理特征包括：臨床分期（Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期）、組織分化（低分化、中高分化）、淋巴結轉移。并對患者進行為期12 個月隨訪，以電話、短信、回院復查等方式了解患者預后情況，隨訪時間：2021年1月1日至2022年1月1日，根據患者預后情況進行分組：預后良好（無復發、轉移、死亡），預后不良（死亡、轉移、復發等）。

1.2.2 TEAD4、SHP-2 及Ang-2 檢測

TEAD4、SHP-2 及Ang-2 均使用免疫組化法進行檢測。獲取病理標本，使用4%甲醛固定，常規石蠟包埋，行4 mm 厚連續切片，用于后續檢查。TEAD4 以兔抗人KDM4A 多克隆抗體Abnova（上海煊翎生物科技有限公司）為一抗；SHP-2 使用兔抗人SHP-2 多克隆抗體（英國Abcam 公司）；Ang-2 以兔抗人Ang-2 單克隆抗體標記Ang-2 蛋白（武漢博士德公司）。每組實驗均設陽性對照和用PBS 緩沖液代替一抗作陰性對照，陽性對照為已知染色陽性切片。

結果判定［6］：由2 名經驗豐富病理科醫生在雙盲情況下對結果進行判斷，TEAD4 表達陽性為細胞膜或胞漿內有棕色顆粒為陽性，SHP-2 陽性為細胞質中出現棕黃色顆粒，Ang-2 以細胞質內出現棕黃色顆粒為陽性細胞。在高倍鏡下（×400）隨機選擇5 個視野對切片進行觀察，一個視野200 個細胞，一共計數1 000 個細胞。采用4 級半定量法評分。著色程度：基本不著色為0 分、淡黃色為1 分、黃色為2 分、棕黃色為3 分；陽性細胞百分比：選取有代表性的10 個高倍鏡視野，隨機計數100 個細胞，計算陽性細胞百分比，＜5%得0 分、5%～25%得1 分、25%～50%得2 分、50%～75%得3 分、＞75%得4 分；每張切片的最后得分為著色程度與陽性細胞百分比乘積，≥3 分為陽性。

1.3 統計學方法

采用SPSS 18.0 統計軟件進行統計分析，計數資料采用n（%）表示，采用χ2檢驗；并采用多元Logistic回歸分析TEAD4、SHP-2 及Ang-2 與OSCC 患者預后關系，以P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組織中TEAD4、SHP-2 及Ang-2 表達情況比較

OSCC 癌組織中TEAD4、SHP-2 及Ang-2 陽性表達均明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表1、圖1。

表1 不同組織中TEAD4、SHP-2 及Ang-2 表達情況比較［n（%）］Table 1 Comparison of TEAD4，SHP-2 and Ang-2 expression in different tissues［n（%）］

圖1 TEAD4、SHP-2 及Ang-2 免疫組化圖（SP，×400）Figure 1 Immunohistochemistry of tead4，SHP-2 and Ang-2（SP，×400）

2.2 TEAD4、SHP-2 及Ang-2 與OSCC 患者病理特征的關系

TEAD4 在有淋巴結轉移、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期患者中陽性表達占比高于無淋巴結轉移、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期患者，SHP-2 在有淋巴結轉移、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織分化為低分化患者中陽性表達占比高于無淋巴結轉移、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織分化為中高分化患者，淋巴結轉移者Ang-2 陽性表達明顯高于淋巴結未轉移者，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 CEA、AFP、CYFRA21-1 與NSCLC 患者病理特征的關系［n（%）］Table 2 The relationship between CEA，AFP，CYFRA21-1 and pathological characteristics of NSCLC patients［n（%）］

2.3 TEAD4、SHP-2 及Ang-2 與OSCC 患者預后關系

121 例患者預后良好87 例，預后不良34 例，預后不良組臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織分化為低分化、有淋巴結轉移者組織中TEAD4、SHP-2、Ang-2陽性表達明顯高于預后良好組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 TEAD4、SHP-2 及Ang-2 與OSCC 患者預后關系［n（%）］Table 3 Relationship between TEAD4，SHP-2 and Ang-2 and prognosis of OSCC patients［n（%）］

2.4 影響OSCC 患者預后相關因素分析

待分析因素的意義及賦值見表4，經多元Logistic回歸分析可知，臨床分期、組織分化、淋巴結轉移、TEAD4、SHP-2、Ang-2 是影響OSCC 患者預后不良的獨立危險因素（P＜0.05）。見表5。

表4 待分析因素的意義及賦值Table 4 Significance and assignment of factors to be analyzed

表5 影響OSCC 患者預后多因素Table 5 Multiple factors affecting the prognosis of OSCC patients

3 討論

以往研究顯示，Hippo 信號通路可參與惡性腫瘤的發生，TEAD4 則是其中重要的轉錄因子，可與Hippo 通路中的核心成員Yes 相關蛋白（Yes-associatedprotein，YAP）/ 轉錄共激活因子PDZ 結合基序（transcriptional co-activator with PDZ-binding motif，TAZ）形成轉錄復合物，進而調控下游基因的表達［8］。而基因的異常表達也常被認為是惡性腫瘤發生、發展中的一個重要因素。有研究顯示，在前列腺癌中TEAD4 表達異常，在對患者使用特異性小分子阻斷劑抑制TEAD4 表達后，患者的癌細胞增殖也受到明顯抑制，癌細胞凋亡明顯增加［9］。本研究結果顯示，TEAD4 在OSCC 患者癌變組織中表達陽性率明顯升高，這表明TEAD4 或許可影響OSCC 發生發展。而TEAD4 表達與患者臨床分期及淋巴結轉移密切相關，說明TEAD4 可能促進癌細胞增殖、轉移，進而增加腫瘤的侵襲能力，與以往研究結果相符［10］。

SHP-2 屬于蛋白酪氨酸激酶與蛋白酪氨酸磷酸酶（protein tyrosine phosphatase，PTPs）中的一員，參與細胞的分化、增殖。以往研究顯示，SHP-2 與多種腫瘤的發生、發展存在相關性［11］。有研究顯示，在乳腺癌、胃癌、宮頸癌組織中SHP-2 為高表達，且SHP-2 突變與白血病之間密切相關［12］。何芳等［13］研究則發現，SHP-2 具有促進細胞遷移、黏附及運動的作用，側面說明SHP-2 在惡性腫瘤發展中扮演重要角色。本研究結果顯示，SHP-2 在OSCC 癌組織中為高表達，且與患者臨床分期、淋巴結轉移、組織分化程度均存在密切的聯系，說明SHP-2 可能參與OSCC 的增殖與轉移，SHP-2 或許可作為淋巴結轉移預測的相關指標。

有研究顯示，OSCC 患者的惡性進展和其腫瘤血管生成之間存在密切聯系，但有關OSCC 患者血管生成的調控機制尚未明確［14］。Ang-2 屬于促血管生成素中的一員，是近年來發現與血管生成、成熟的相關因子之一。在正常人組織中，Ang-2 主要表達于女性胎盤、卵巢組織的血管重建中，在機體正常組織中并無表達或為極低表達。在多數惡性腫瘤中，如胃癌、腦膠質瘤、肝癌等患者中Ang-2陽性表達率升高，且其表達異常發生于癌變的早期，與腫瘤侵襲程度、預后均有密切的聯系［15-16］。本研究結果顯示，Ang-2 在OSCC 癌變組織中表達上調，在正常組織中表達較低，與以往研究結果一致［17］，分析原因可能與腫瘤發展過程中新生血管生成，進而引起Ang-2 的表達增加有關。而Ang-2與患者淋巴結轉移情況密切相關，說明隨著腫瘤惡性程度增加，Ang-2 表達上調，Ang-2 可能通過參與OSCC 患者的血管生成，進而在腫瘤浸潤及轉移中發揮著作用。

通過分析患者預后情況可知，TEAD4、SHP-2、Ang-2 在預后不良患者中均為高表達，且三者與淋巴結轉移、臨床分期、組織分級均屬于影響OSCC患者預后的相關因素，與以往研究結果相符［18］，說明TEAD4、SHP-2、Ang-2 表達情況對患者預后情況評估有一定參考價值，臨床對存在相關危險因素者需引床重視，及時采取干預措施，對TEAD4、SHP-2、Ang-2 高表達者在手術治療后可合理輔助其他手段來提高患者預后。

綜上所述，TEAD4、SHP-2 及Ang-2 在OSCC癌組織中均異常高表達，與患者病理特征及預后均存在相關性，三者或許可成為OSCC 診斷及預后的相關腫瘤標記物，對臨床診療方案制定也有一定參考價值。