LncRNA MT1JP在肺腺癌中的表達及臨床意義

卞春安，林超宇，田曉奇

(南京醫科大學第四附屬醫院胸外科，江蘇 南京 210031)

2021年美國癌癥年報報道，肺癌已連續10余年占據全球癌癥發病率及死亡率的榜首，其中以非小細胞肺癌中的肺腺癌類型發病率上升最為顯著，目前其已成為發病率最高的肺癌病理類型[1-3]。伴隨著分子生物學日新月異的進展，目前肺腺癌的相關驅動基因及長鏈非編碼RNA(lncRNA)的相關實驗和臨床試驗進展迅速，但肺腺癌的總體生存率仍然較低，尤其是中晚期肺癌患者的5年生存率不到15%[4-6]。晚期肺癌的侵襲和轉移是影響患者生存時間的關鍵因素，但目前明確的發病和侵襲轉移機制仍然不明確[7-8]。因此，為了使肺腺癌患者能夠得到早期診斷和精準化、個體化治療，改善患者的生存質量、延長患者的生存期，不斷篩查新的生物標志物和作用靶點就顯得十分重要。

近年來，作為表觀遺傳學重要方向的lncRNA越來越引起人們的重視。研究發現，lncRNA能夠對多個系統腫瘤的發生發展起到促癌或抑癌作用，通過表觀遺傳學等機制直接或間接參與對癌細胞的生長、浸潤與轉移等多種惡性生物學行為的分子調控[9-11]。隨著對lncRNA更深入的研究，科學家發現其在惡性腫瘤的早期診斷及臨床靶向治療方面具有巨大的潛力。因此，積極深入探索lncRNA在肺腺癌發生發展中的作用及其分子調控機制，對進一步提高我國肺腺癌的診治水平具有重要意義。

LncRNA MT1JP是一種新發現的lncRNA，在肝癌、胃癌、結腸癌中低表達，且起著抑癌的作用[12-15]，但其在肺腺癌組織中表達情況如何，對肺腺癌生物學功能的影響如何，尚鮮見相關報道。本研究著重探討lncRNA MT1JP在肺腺癌組織中的表達情況，研究其與患者臨床病理特征的關系，以期為肺腺癌的診治提供新的方向。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究回顧性分析2019年1月至2021年12月在南京醫科大學第四附屬醫院胸外科經手術病理確診的43例肺腺癌患者的病歷資料。其中男26例，女17例；年齡34～74歲，平均55.3歲。所有患者術前均未經過放化療、靶向治療、免疫治療等其他治療，術前相關檢查未見明顯的心、肝、肺、腎功能障礙，遠處轉移或其他影響疾病預后的嚴重疾病。本研究所采用的肺腺癌組織標本及其配對的癌旁組織標本從體內取出后在10 min內迅速凍存到液氮中，以用于后續總RNA的提取實驗。肺腺癌樣本在采集前均向患者說明情況并簽訂了知情同意書，并獲得了醫院倫理委員會的批準。術后定期對患者進行隨訪，隨訪時間為患者死亡或隨訪截止日。

1.2方法 采用實時熒光聚合酶鏈式反應(qRT-PCR)法檢測lncRNA MT1JP在肺腺癌組織及其癌旁組織中的表達水平。將保存的組織樣本從液氮中取出后，立即和液氮一起放在研缽中進行研磨，利用Trizol法提取總RNA，使用NanoDrop ND-1000進行RNA濃度和純度的測定，用RNA反轉錄試劑盒將選取的OD260/OD280值接近2.0的RNA反轉錄成cDNA。利用Primer5.0設計引物。LncRNA MT1JP的正義引物為5′-TCGAAATGGACCCCAACTA-3′，反義引物為5′-TGCACTTCTCCGACGTCC-3′；β-actin的正義引物為5′-GTGGCCGAGGACTTTGATTG-3′，反義引物為5′-CCTGTAACAACGCATCTCATATT-3′。根據PCR試劑盒說明配置反應體系，每組設置3個重復，反應條件按照引物不同退火溫度給予相應程序設置。以β-actin為參照基因，采用2-△△Ct法計算lncRNA MT1JP的相對表達水平。

2 結 果

2.1肺腺癌組織與癌旁組織中lncRNA MT1JP表達水平比較 肺腺癌組織中lncRNA MT1JP相對表達水平明顯低于對應的癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.05)。見圖1。

2.2LncRNA MT1JP在肺腺癌組織中的表達與臨床病理特征的關系 不同腫瘤大小、術后TNM分期及淋巴結是否轉移患者lncRNA MT1JP在肺腺癌組織中的表達水平比較，差異均有統計學意義(χ2=5.562、11.667、7.525，P<0.05)，見表1。

表1 LncRNA MT1JP在肺腺癌組織中的表達患者臨床病理參數情況[n(%)]

續表1 LncRNA MT1JP在肺腺癌組織中的表達患者臨床病理參數情況[n(%)]

3 討 論

隨著環境污染的加劇和社會生活壓力的增大，世界和中國的腫瘤發病譜也隨之改變，肺癌已經成為目前世界上發病率和死亡率最高的惡性腫瘤，嚴重危脅人民生命健康安全[16]。有研究顯示，以肺腺癌為主的非小細胞肺癌的預后無明顯改善[17-19]。直到近年來薄層CT的廣泛使用使得更多的早期肺癌被發現并得以早期干預治療，以及許多針對EGFR、KARS等肺腺癌驅動基因的靶向治療藥物的研發成功，大大地改善了肺腺癌患者的預后[20-21]。但對于中晚期肺腺癌患者而言，術后容易復發轉移，總體預后不佳[22]。肺腺癌的發生發展涉及多步驟、多階段的演化，包括多種基因的異常表達和表觀遺傳學的變化[23]。LncRNA在肺腺癌的發生發展過程中具有重要的作用[24]，對深入研究肺腺癌的發病機制、及早診治具有重要意義。

LncRNA MT1JP是一種新發現的lncRNA，在膀胱癌、肝癌、胃癌、結腸癌、乳腺癌中低表達，且起著抑癌的作用[25-26]。有研究表明，lncRNA MT1JP通過與TIAR相互作用來調節P53信號通路發揮抑癌作用[27]。祁海燕等[28]發現lncRNA MT1JP可能通過上調P53表達抑制葡萄膜黑色素瘤細胞的轉移和侵襲。國內馬吉勇等[29]研究表明，lncRNA MT1JP可能是通過mRNA-423-3p/Bim 軸途徑在肺腺癌中發揮抑癌作用的，即通過下調mRNA-423-3p的表達激活上調抑癌基因Bim的表達，間接抑制了肺腺癌的發生發展。本研究結果表明，肺腺癌組織中lncRNA MT1JP相對表達水平明顯低于對應的癌旁組織，推測lncRNA MT1JP的表達缺失可能與肺腺癌的惡性生物學行為有關。另外，lncRNA MT1JP在肺腺癌中的低表達與腫瘤大小、淋巴結轉移情況、TNM分期等臨床病例特征具有明顯的相關性。LncRNA MT1JP在肺腺癌中具體確切的調控機制有待于后期進一步的實驗研究。

綜上所述，lncRNA MT1JP在肺腺癌組織中相對低表達，并且與患者腫瘤的惡性生物學行為有關。LncRNA MT1JP可能參與了肺腺癌的發生發展，有望成為肺腺癌診斷和預后判斷的新靶點。