血液標本不同保存時間、離心時間與速度及溶血對凝血實驗檢測的影響

陶景莉

云南省曲靖市第一人民醫院 檢驗中心，云南 曲靖 655000

0 引言

凝血檢測能夠對患者是否發生血栓及凝血藥物用量進行有效的評估，凝血酶時間（thrombin time，TT）、活化部分凝血酶時間（activated partial thromboplastin time，APTT）、凝血酶原時間（prothrombin time，PT）、纖維蛋白原（fibrinogen，FIB）是主要的評估指標[1-2]。對于實驗室檢測而言，需要對一系列酶促反應終點進行監測，因而診斷結果較易受到諸多不良因素的影響，包括標本保存時間、離心時間與速度及溶血等，因此為確保獲得準確的檢測結果，則需要加強對上述因素的關注，并且采取科學有效的措施進行應對[3-4]。本文將對在進行凝血實驗檢測中標本不同保存時間、離心時間與速度及溶血對于檢測結果的影響情況進行如下分析報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年4月-2020年7月到本院門診就診及收治住院的患者共120例，男79例，女41例，平均年齡（35.5±4.9）歲。所有患者均具有正常的凝血功能，需排除存在出血傾向的患者。

1.2 方法

（1）保存時間：將120例樣本平均分成4份，在20℃～25℃的室溫環境下進行存放，存放時間分別為1h、2h、4h，分別在不同的時間點對血液樣本進行凝血四項檢測。

（2）離心速度：選取40例采集量正常的凝血標本，將所有的血液樣本進行平均分成兩份，之后分別將兩份樣本裝入干凈的塑料試管中，均對兩份樣本進行離心處理，其中的一份樣本的離心速度設定為3000r/min，另一份樣本的離心速度設定為4000r/min，取上層血清，對樣本進行凝血四項檢測。

（3）離心時間：選取40例采集量正常的凝血標本，將所有的血液樣本進行平均分成三份，之后分別將三份樣本裝入干凈的塑料試管中，均對三份樣本進行離心處理，將離心速度均設定為3000r/min，分別進行5min、10min、15min的離心處理取上層血清，對樣本進行凝血四項檢測。

（4）溶血：采集量正常的標本中溶血40例，重新抽取患者2mL的靜脈血，對其進行凝血四項檢測。

1.3 觀察指標

①在凝血實驗檢測中不同保存時間對檢測結果的影響；②在凝血實驗檢測中不同離心時間對檢測結果的影響；③在凝血實驗檢測中不同離心速度對檢測結果的影響；④在凝血實驗檢測中溶血對檢測結果的影響。

1.4 統計學處理

所有數據資料收集后采用雙錄入方式錄入Epidata，導入SPSS 22.0軟件進行統計學分析，計量資料以均數±標準差（）的形式表示，計數資料以率（%）的形式表示，分別使用t與χ2方式進行檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 不同保存時間對凝血實驗檢測結果的影響比較

在保存時間方面，即刻及1h、2h、4h標本的PT、FIB水平無差異（P＞0.05）；4h標本的APTT明顯長于2h，TT明顯長于2h，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 在凝血實驗檢測中不同保存時間對檢測結果的影響（）

表1 在凝血實驗檢測中不同保存時間對檢測結果的影響（）

注：相比于2h，#P＜0.05。

2.2 離心速度對凝血實驗檢測結果的影響比較

在離心速度方面，采取3000r/min與4000r/min的離心處理速度后觀察，兩組標本的PT、FIB、APTT、TT比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 在凝血實驗檢測中不同離心速度對檢測結果的影響（）

表2 在凝血實驗檢測中不同離心速度對檢測結果的影響（）

2.3 離心時間對凝血實驗檢測結果的影響比較

相比于離心10min與離心15min血液樣本，離心5min血液樣本的PT、APTT水平均顯著降低；相比于離心10min血液樣本，離心15min血液樣本的PT、APTT水平均顯著降低，差異具有較大顯著性（P＜0.05）；但三種離心時間的FIB、TT水平相比較則并未具有顯著的差異性（P＞0.05），見表3。

表3 在凝血實驗檢測中不同離心時間對檢測結果的影響（）

表3 在凝血實驗檢測中不同離心時間對檢測結果的影響（）

2.4 溶血對凝血實驗檢測結果的影響比較

在溶血方面，正常標本的TT明顯短于溶血標準本，APTT與PT明顯長于溶血標準本，差異顯著（P＜0.05）；但兩組標本的FIB水平無差異（P＞0.05），見表4。

表4 溶血對凝血實驗檢測結果的影響比較（）

表4 溶血對凝血實驗檢測結果的影響比較（）

3 討論

研究表明，凝血標本的收集與前處理過程將會對實驗室檢測結果的準確性造成較大的影響，并且也是凝血四項檢測結果準確性與可靠性的質量控制關鍵[5]。就一般情況而言，檢驗科對臨床實驗室檢查的質量控制進行把控；然而通過臨床實踐證明，檢驗過程將會受到諸多不良因素的影響，并且經觀察顯示，約60%的檢驗誤差發生于檢驗前，因此為確保檢驗結果的準確性與可靠性，則需要加強對標本采集與運送的質量控制[6-7]。PT能夠對身體凝血指標情況進行良好的反映，而其中所包含的INR可用于監測服用抗凝劑的情況[8]。PT時間變長的主要原因在于缺少先天性凝血因子Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及纖維蛋白，若人體內缺少維生素K，則會缺少凝血因子，從而會延長PT[9]，例如服用抗凝劑、體內纖溶過分亢進、嚴重的肝臟病變。而當人體內出現血栓、血液處于高凝情況時，則會使得PT縮短。APTT能夠對人體內源性凝血功能的情況進行真實的反饋，可用于監測使用肝素量情況，當人體內缺少血漿因子Ⅷ、Ⅸ及XI的時，則會使得APTT在較大程度上延長[10-11]。例如對于患有XI因子缺乏癥及血友病的患者，其APTT明顯較長。當人體處于高凝情況時，APTT則會顯著縮短，例如人體內凝血因子的活性增強以及血液中有促凝物質等，均會導致APTT縮短。TT表示纖維蛋白原轉化為纖維蛋白人體處于血中纖維蛋白及纖維蛋白原降解產物（FDPs）的增多、異常血紅蛋白血癥、DIC纖溶亢進期及低纖維蛋白原血癥均可以導致體內TT的升高，人體內TT的降低并沒有顯著的臨床意義[12]。PT能夠對人體內纖維蛋白的水平進行真實反饋，對于患有急性心肌梗死的患者，其PT會顯著延長，而原發性纖溶癥、肝硬化、DIC等疾病均可會縮短PT[13]。

相關學者的研究結果顯示，當血液離開機體后，其本質便會開始發生變化，并且伴隨著存放時間的不斷延長，凝血因子將會逐漸消耗，最后甚至消失，進而會對檢測結果造成較大的不良影響[14]。本研究的結果顯示，在20℃～25℃的室溫環境下，相比于即刻檢測結果，存放1h后所得的檢測結果并未表現出明顯的差異性；但相比較于存放于2h所檢測的結果，存放4h后檢測APTT則表現出明顯延長的情況，TT則表現出顯著短的情況；存放4h與2h的PT與FIB檢測結果并未表現出明顯的差異性，分析原因在于長時間保存在室溫條件下，易變凝血因子Ⅷ及Ⅴ因子對熱表現出不穩定現象，導致凝血因子的活性不斷喪失，從而對凝固時間產生影響，由此可知，在室溫條件下伴隨著存放時間的不斷延長，雖然對凝血因子的APTT與TT會產生一定的影響，但并未對整體產生較大的不良影響。

在臨床檢驗中標本發生溶血是一種較為常見的情況，通過研究表明，導致溶血發生的因素包括采血方式不當或離心操作不當，并且當發生溶血后，血液標本中的紅細胞會發生破裂，血紅蛋白會溢出；當成熟紅細胞發生破裂后，將導致血小板第Ⅲ因子相似凝血活性的磷脂的含量在較大程度上提升，從而將會在較大程度上對凝血四項的檢測結果造成較大的不良影響[15-16]，正如本研究的結果顯示，正常標本的TT明顯短于溶血標準本，APTT與PT明顯長于溶血標準本，差異有統計學意義；但兩組標本的FIB水平無差異，由此提示當標本發生溶血后將會導致APTT與PT縮短，使得TT延長，從而影響檢測結果的準確性。

在實驗室檢測中檢驗人員將血漿作為檢測標本，因此在進行檢驗前需要對血漿進行離心處理，依據標準可知，臨床中主要使用3000r/min離心15min的“低速離心”模式[17]。對于本研究而言，檢驗人員對比4000r/min離心5min模式，通過結果可知，3000r/min離心15min與4000r/min離心5min后兩組標本的PT、FIB、APTT、TT均無差異，由此提示加快離心速度，縮短離心處理時間，將不會對檢測結果造成較大的不良影響，可在一定程度上取代3000r/min離心15min的“低速離心”模式。

基于上述論述，為確保檢測結果的準確性，在采集患者的血液樣本后，需要將其存放于密閉環境中，并且需要及時將其送至檢驗科進行相應的檢測；同時樣本采取人員需要掌握正確的采集方式，并且在采集血液樣本后需要進行正確的存放，從而能夠避免血液樣本發生變質；除此之外，在檢驗過程中，檢驗人員還需要嚴格按照標準方式進行檢測與記錄，確保檢測的準確性。

除上述措施外，為了確保凝血檢驗中的各項目數據的準確性，還需要確保檢測工作的細致性與全面性，尤其是細節方面，主要包括如下內容：第一，確保采血流程的規范性。在進行凝血檢驗工作前，檢測人員需按照規范的流程進行采集血液工作。采血的過程需要由專人執行操作，以便能夠確保樣本數據的準確性。不論是血液的采集還是運輸、保存，相關人員均需要嚴格依據要求與標準嚴格執行，及時將采集的標本送至檢驗科，以防止紅細胞受到破壞，從而確保檢驗數值的準確性[18]。第二，提高標本的處理技術性。對標本的處理對凝血檢驗項目存在較大的影響，尤其是離心處理的工作有嚴重的影響，本研究的結果對其進行了證實。為了減少標本處理對檢驗的不良影響，在檢測前需要對檢測設備進行徹底消毒清潔，盡量避免標本過度振蕩或受到不良刺激；謹慎使用抗凝劑，特別是需要加強對使用量的關注；離心處理的時候需要加強對血漿的含量的關注；離心處理后避免標本日曬或受到其他污染。第三，嚴防溶血標本。患者的靜脈血本身在檢驗前就需要進行檢查，要防止因為離心或其他的原因而導致標本溶血，若標本已出現溶血情況，則需要重新抽取靜脈血行凝血檢驗，以此確保凝血檢驗結果的準確性[19]。第四，應當避免人為因素的影響。檢驗工作應該由擁有豐富經驗、技術優良并且責任心強的專業人員來執行操作。第五，使用規范的抗凝劑。在血液樣本采集后，為避免其發生凝固情況，則規范的抗凝劑使用必不可少，在血液采集前8h需要告知患者禁食禁飲，樣本保持空腹狀態，避免對血液標本產生不良影響。在血液標本采集工作完成后及時進行密封，并在第一時間將其送至檢驗科，檢驗人員需要嚴格按照規范步驟與要求進行檢驗，以確保檢驗結果的準確性[20]。第六，避免儀器因素影響或人為導致誤差。凝血檢測離不開儀器應用和人的操作，對此檢驗實踐中需要加強對上述因素的重視，儀器準確性與精密度影響檢驗結果，因此在進行凝血檢查前，需對儀器設備行常規檢查；同時檢驗人員需要具有專業技能，因此檢驗工作需任用經驗豐富、技術優良、責任心強的人員執行操作。除此之外，針對目前尚不明確的影響凝血檢驗項目的因素，臨床應加大力度，使凝血檢驗流程進一步透明化，為檢驗準確性奠定堅實基礎。

綜上所述，本研究認為室溫保存時間過長與標本溶血均將對凝血實驗檢測造成不良影響，需要及時進行送檢，并且需要采取正確的采集方式，以確保檢測結果的準確性。