骨骼組織法醫毒物相關分析研究

徐丹丹

無錫市中西醫結合醫院司法鑒定所，江蘇 無錫 214000

血液、尿液、胃液等都是法醫毒理學檢測中常用的生物樣本，但例如白骨化、肢解和高度尸體腐爛等情況，就無法使用這些常見的生物樣本進行毒理學分析。而由于沒有其他可用材料，骨骼組織就成了進行毒物分析最重要的生物樣本。大多數骨骼組織是靜脈血管組織，其中骨髓血管化，富含多種脂質，允許一些可溶性藥物分布在其中，因此骨組織作為基質分析，可以加大分析范圍，與骨組織等生物體相比，樣品具有抗外界因素影響以及抗真菌和細菌破壞、無腐敗、不易污染等優點。

Owsley（1985）的報告中，介紹一名犯罪嫌疑人，將一個白人女性殺害，并且拋尸到密西西比河，在一切都完成之后，嫌疑人清洗了自己的車輛。但是，警察還是在車輛中提出了骨骼組織的碎片[1]。在進行審問時嫌疑人卻矢口否認，說是動物的骨片。法醫在對其骨骼樣本進行檢驗后發現這些骨骼碎片屬于死者的骨組織。由此可見，對骨骼組織進行毒物分析是破獲刑偵案件的重要手段之一。但對于一些難度較高的骨組織，就需要結合實際進行毒物檢驗。法醫毒物檢測中血、尿、胃等樣本都屬于最基本的檢測對象，如果遇到一些白骨化或是其他的情況，傳統的分析方式就無法適用。多數骨骼組織都屬于脈管組織，含多種脂類，存在一些可溶性的藥物[2]。骨骼組織與其他生物樣品進行比較，雖然說存在一定的弊端，但卻具備了不會腐敗、難以銷毀的優勢性。

一、骨骼組織的特點

從本質上看，人體骨骼在形態中可以分為：長骨、短骨、扁骨和不規則骨。骨骼作為一種堅硬的組織，在外源性藥物通過Haver、Volkmann之后進入骨骼。Haver、Volkmann的通道中，作為血管化的主要場所，只有在離子交換的過程中才可以實現兩者之間的平衡。這是藥物就可以取代晶體骨結構當中的礦化反應。若是采用了更為先進的檢驗技術，生理pH值在7．4的情況下，還可以讓電離藥物在骨組織的水化層中的濃度升高，從而將骨組織中的信息檢驗出來[3]。當pKa低于以上的pH值的時候，那么就很難檢驗出來。O6-單乙酰嗎啡等在正常的情況下，在骨骼中是不會存在的，需要在代謝物基礎上保持合理的統籌規劃，將蛋白質的化合物在血液中，轉移到骨骼當中，但是基礎上可以轉移的數量不多，一旦出現就基本上很難達到滿意的檢驗結果。

二、骨骼組織在法醫毒物分析中的應用

（一）研究的藥毒物種類

一般的情況下，需要在尸檢的過程中提取骨骼組織，分析死亡的時間，在室外發現骨骼殘骸的過程中，會檢測到很多的藥物，可能是抗驚厥藥、抗抑郁藥，也可能是雌激素調節劑、阿片類藥物等，這些藥物本身就是一些化學武器神經毒劑或者是乙基葡萄糖醛酸。

（二）研究的用途

在實踐的歷程中，骨骼組織中藥物含量不足，并且這些都和血液中藥物的濃度存在著較大的關系，但是這些并非真正的證據。因此就需要在骨骼上進行藥物檢驗，并將所得到的個人生活信息，與嫌疑人的陳述相互對比。在沒有確定一個人尸源的時候，若可以在骨骼組織當中檢測到甲基苯丙胺，那么很可能死亡者在生前有吸毒的歷史，這個時候，相關的工作人員就可以結合實際情況，進一步縮小排查的范圍，從吸毒的角度開始調查。曾經在一個案例中看到，有兩個男人失蹤了四年左右，最后在森林中發現了他們的尸骨，并且已經被簡單的埋葬[4]。在實施骨骼組織檢測的時候，檢測結果中檢測到了三唑侖，在這樣的情況下，調查人員就可以證實了嫌疑人是先使用三唑侖對受害者進行催眠，在催眠完成以后，直接將其活生生地埋葬。另外一起尸體火化案件中，骨灰本身就是唯一可以檢驗的東西了，在檢驗的時候，一般金屬毒物會沉淀在骨骼組織當中，就算是火化了，基本上也不會損失太多。如果可以在火化之后的骨灰中檢測到這類東西，那么基本上就可以認為這個人在生前就已經中毒，為案件的偵破給予了充分的支持[5]。

三、骨骼樣本的分析方法

（一）骨骼樣本的選擇

在實踐的歷程中，骨髓中藥物的含量較高，那么就需要結合實際情況分析骨髓數量。在選擇骨髓數量的時候，需要先分析肱骨或股骨，還有一個鎖骨的位置也是可以依據實際情況作為選擇目標。簡單來說在鎖骨附近的骨骼中的脂肪含量較多，在解剖的時候，可以在不破壞其他組織的情況下，獲得想要檢測的東西，并且保證尸體的完整性，為之后的案件進展奠定良好的基礎[6]。

（二）骨骼樣本的處理

一般的情況下，在去除骨頭當中的覆蓋物的時候，需要及時進行清洗、干燥、切片、粉碎等步驟進行處理。堿性蛋白酶在分解的時候，需要結合樣本的處理方式，針對這些線索選擇最為適宜的處理方式。此時，可以使用草桿菌蛋白酶A pH7～11去除骨表面的軟組織，最大限度縮小清洗的時間。Rubin之前認為，在萃取之前，就需要對骨組織暴露的位置進行清洗，清洗完成以后，就可以取代其中的藥物或代謝物，最終達到降低骨組織藥物濃度的主要目的。清洗干凈的骨頭，在這個時候需要先放到空氣中，之后研磨成為粉末的樣子，主要是為了增加回收率，并且對其中的甲醇實施被動提取。Desrosiers等使用的是MAE，對其中的氯胺酮、地西泮等實施合理的規劃，并且時間需要保持在五分鐘左右。一般的情況下，需要合理的統籌規劃，并且擴大微波能量，為以后的發展奠定良好的基礎。

（三）骨骼樣本的檢測方法

在檢驗的歷程中，大家可以直觀看到這些有效方式的建設，需要結合骨組織的具體情況，對其中的藥物實施合理的檢測，并且有效分析這些骨骼組織中的藥物成分，也就是說，相關的人員需要結合液相色譜及聯用技術等，合理分析，定量檢測。ELISA就是根據當前的發展需要，合理實施分析的方式，最大限度提高靈敏度，并且加入適度的痕量分析相關的內容，并且建立多種樣品，在初步的分析中，探究陽性的初篩，使用此種方式，一般的情況下，都會存在很大的局限性，并且這些樣品還會受到其他部分的干擾。氣相色譜在使用聯合技術的時候，需要在實驗室中合理使用，而且使用的次數較多。Raikos等主要是針對相色譜—火焰離子化的方式，可以從死者的骨髓或者是骨骼中，檢驗出來嗎啡含量，此種方式可以對海洛因成癮中毒死的人員實施檢測，檢驗出來的濃度高達155ng/g以上[7]。此時，Lopez等使用GC-MS的方式，可以合理地對骨骼當中的阿片類藥物、可卡因或者其他的代謝物實施分析，檢測的濃度主要是保持在0．3～1ng/mg到150ng/mg之間。Cartiser等使用的是GC-MS/MS的檢驗方式，此種方式，主要是對骨髓當中的咖啡因實施合理的分析和檢驗，此時的定量下限為50ng/g，使用此種方式檢驗出來的結果，不僅速度較快，并且可以展現較強的表現性，增強靈敏度，滿足定量檢測的需求。Orfanidis等就是使用UHPLC-MS/MS的檢驗方式，可以對骨頭當中所包含的卡因、大麻等二十七種藥物實施分離，并且可以將這些量合理分析標準化的制品方式，探究異質性，在不一樣的實驗室當中，即可對其中的濃度測量合理的分析，并給落到實處。Sri-kanth等需要合理使用反相高效液相色譜法在大鼠骨髓組當中，合理的分析當中存在的氯法齊明，在檢測完成以后，即可對其中的濃度保持良好的關系，在高中低的基礎上合理地統籌規劃，并且探究其中的濃度。

四、動物實驗研究

骨骼組織中藥毒物檢驗，并不是簡單的研究就可以完成的，需要使用大量的動物實施合理的實驗，并且完善其中的內容，分析基本的骨骼組織框架。骨髓中藥物濃度最高，Vandenbosch在大鼠骨組織中，就已經發現了美沙酮的存在，并且可以及時分析其中存在的濃度，合理發現其中蘊含的含量。在現實中，多種因素都可以對藥物在骨骼組織中所積累的沉淀產生影響，甲基苯丙胺濃度在外界卻不會存在較大的影響。Cornthwaite就是在不一樣的氣候條件中，對大鼠骨骼的組織中的氯胺酮實施合理地分析，發現其中的分解情況，避免濃度較高的問題出現，很少使用昆蟲的方式前來分解，真實反映出最終的重計量，探究藥物濃度所存在的差異性。在長期的動物實驗中，即可找到骨質藥物濃度的線性發展關系，合理的探究其中存在的比例性。

五、總結

隨著社會的進步，從高靈敏度儀器呈現到大家的視野當中以后，不僅提升了骨骼組織中藥物檢的效率，并且可以為案件的偵破提供更多的路徑。藥物在骨骼內一直都是保持著屬于自己的規律，這些濃度的變化，不僅可以反映出死亡的時間，也可以作為死者的證據。合理分析骨骼中藥物濃度和血液藥物濃度之間的關系，制定處理措施，為今后的標準化發展奠定良好的基礎。