抗癌防移片對(duì)結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移BALB/c 小鼠P65、STAT3、TNF-α 因子的影響

郭忠聰，楊宇婷，王智賢，龔 純*

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

結(jié)直腸癌（colorectal cancer）指發(fā)生在結(jié)腸及直腸部位的惡性腫瘤，是全球第三大惡性腫瘤，其嚴(yán)重威脅著人類生命健康。 飲食結(jié)構(gòu)改變、肥胖、吸煙等均是導(dǎo)致結(jié)直腸癌發(fā)生的不利因素[1]。 近年來(lái)，隨著生活方式及飲食結(jié)構(gòu)的改變，我國(guó)結(jié)直腸癌發(fā)病率急劇上升[2]。 目前，結(jié)直腸癌的治療方法以手術(shù)切除為主，但術(shù)后總的5 年生存率只有50%左右[3]。 多數(shù)導(dǎo)致結(jié)直腸癌患者的死亡原因主要是由結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移引起，隨著腫瘤病情的進(jìn)展，在50%的結(jié)直腸癌患者中都會(huì)發(fā)生肝轉(zhuǎn)移，發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者中位生存期僅為6～12 個(gè)月。因此，研究結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制及有效防治方法意義深遠(yuǎn)[4-5]。

中醫(yī)藥防治疾病重視整體觀念，由多味中藥配伍而成的中藥復(fù)方可通過(guò)多個(gè)環(huán)節(jié)起效，可在改善腫瘤患者的臨床證候、提高放化療敏感性、降低放化療不良反應(yīng)、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力、降低復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率等方面發(fā)揮重要作用。 近年來(lái)湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科在臨床實(shí)踐中運(yùn)用抗癌防移片防治常見(jiàn)惡性腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，收到了滿意的臨床療效。前期臨床研究顯示，抗癌防移片聯(lián)合化療不僅可提高結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者的疾病緩解率，還可降低Ⅲ期結(jié)腸癌術(shù)后患者的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率[6-10]。 前期實(shí)驗(yàn)顯示，抗癌防移片可降低結(jié)直腸癌模型小鼠肝轉(zhuǎn)移發(fā)生率，通過(guò)抑制血清肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor, HGF）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的表達(dá)，抑制血管新生，從而抑制結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移[11]。本研究擬在前期證實(shí)抗癌防移片可降低結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移率的基礎(chǔ)上，以結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠模型為對(duì)象，圍繞炎性微環(huán)境相關(guān)因子，以癌基因蛋白質(zhì)p65、信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子3（signal transduction and activator of transcription 3,STAT3）、腫 瘤 壞 死 因 子（tumor necrosis factor-α,TNF-α）為切入點(diǎn)，研究抗癌防移片抗結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制，為中醫(yī)藥防治結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移提供更多的科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選擇SPF 級(jí)別的BALB/c 小鼠共40 只，體質(zhì)量18～22 g，6～8 周齡。 購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。 動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（湘）2016-0002；實(shí)驗(yàn)單位使用許可證號(hào)：SYXK（湘）2015-0003。 飼養(yǎng)環(huán)境：溫濕度適宜、人工12 h 晝/夜循環(huán)照明的SPF級(jí)動(dòng)物房。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理批號(hào)：ZYFY20190920。

1.2 藥物組成

抗癌防移片系三湘名醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方(由紅參、半枝蓮、黃芪、薏苡仁、姜黃、女貞子、墨旱蓮、莪術(shù)、九香蟲、枸杞子、白術(shù)、湘曲等組成，湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科生產(chǎn)，批號(hào)：040106)。奧沙利鉑甘露醇注射液(L-OHP)，規(guī)格：100 mL∶0.1 g，商品名：艾恒，購(gòu)自江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，產(chǎn)品批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20050962。 氟尿嘧啶注射液（5-Fu），規(guī)格：10 mL，0.25 g，購(gòu)自天津金耀藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H12020959。 亞葉酸鈣注射液(calcium folinate in jection, CF)，規(guī)格：10 mL:0.1 g（以亞葉酸計(jì)），購(gòu)自 江 蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20000584。

1.3 主要試劑

快速金B(yǎng)CA 蛋白測(cè)定試劑盒（皮諾飛生物公司，批號(hào)：P0009）；5×蛋白上樣緩沖液（皮諾飛生物公司，批號(hào)：PN0033）；磷酸化蛋白酶抑制劑（Servicebio公司， 批號(hào)：G2007）；BCA 蛋白定量檢測(cè)試劑盒（Service bio 公司，批號(hào)：G2026）；RIPA 裂解液（皮諾飛生物公司，批號(hào)：P0005）；磷酸化蛋白酶抑制劑（皮諾飛生物公司，批號(hào)：P0007）；蛋白酶抑制劑（Beyotime，批號(hào)：P1030）；PVDF膜（MILLIPORE 公司，批號(hào)：IPVH00010）；小鼠TNF-α 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（伊萊瑞特，批號(hào)：E-EL-M3063）；小鼠白介素6（IL-6）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（伊萊瑞特，批號(hào)：E-EL-M0044c）。

1.4 主要儀器

高速組織研磨儀（Jingxin 公司，型號(hào)：JXFSTPRP-48）；高速離心機(jī)（科析儀器有限公司，型號(hào)：TGL-16）；臺(tái)式冷凍離心機(jī)（SCILOGEX 公司，型號(hào)：CF1524R）；電磁爐（SUPOR 公司，型號(hào)：C22-IH69E5）；電泳電源（型號(hào)：164-5070）、轉(zhuǎn)膜槽（型號(hào)：170-3930）；電泳槽（型號(hào)：165-8001）均購(gòu)自BIO-RAD 公司；數(shù)顯鐘擺搖床（Servicebio 公司，型號(hào)：DS-S100）；暗匣（廣東粵華醫(yī)療器械廠有限公司，型號(hào)：AX-Ⅱ；FlexStation）；多 功 能 酶 標(biāo) 儀（Molecular Devices 公司，型號(hào)：Flexstation3）；離心機(jī)（湖南湘儀儀器有限公司，型號(hào)：H1650-W）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 模型制備

BALB/C-nu/nu 雄性裸鼠飼養(yǎng)于溫濕度適宜、人工12 h 晝/夜循環(huán)照明的SPF 級(jí)動(dòng)物房，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，按隨機(jī)分配的原則分為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組、中西藥組（中藥+陽(yáng)性對(duì)照藥）。 小鼠均用1%戊巴比妥鈉(40 mg／kg)腹腔注射麻醉后，于背側(cè)中部、左側(cè)腋中線與腋后線間，取1 cm 左右縱形切口進(jìn)腹，暴露脾臟，于脾臟下極貼近脾包膜沿脾臟縱軸向上進(jìn)針，注入敲除NF-κB p65、STAT3 表達(dá)的CT26 細(xì)胞懸液0.2 mL，退針后立即用蘸有絡(luò)合碘的消毒棉簽輕壓針眼數(shù)秒，查看無(wú)出血后，將脾臟放回原位，依次間斷縫合腹膜、皮膚，關(guān)腹[12-13]。

2.2 實(shí)驗(yàn)分組

將造模后的BALB/c 小鼠按隨機(jī)原則進(jìn)行分配，每組5 只。 模型組裸鼠以0.5 mL 生理鹽水灌胃，1 次/d；陽(yáng)性對(duì)照組根據(jù)《CSCO 結(jié)直腸癌診療指南（2022）》選擇晚期結(jié)直腸癌一線治療方案，具體藥物為：L-OHP、5-Fu、CF，劑量L-OHP 1 mg、5-Fu 4 mg、CF 0.4 mg，腹 腔 注 射，1 次/周；中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組裸鼠以抗癌防移片中藥混懸液灌胃，劑量分別相當(dāng)于60 kg 成人等效劑量的1、3、5 倍，分別為1、3、5 g/mL 抗癌防移片混懸液，1 次/d；中西藥組裸鼠以5 g/mL 抗癌防移片中藥混懸液灌胃，1 次／d，并聯(lián)合L-OHP 1 mg、5-Fu 4 mg、CF 0.4 mg 腹腔注射，1 次／周。 所有組別連續(xù)給藥3周。

2.3 觀察指標(biāo)及方法

2.3.1 一般情況觀察 給藥過(guò)程中每日定時(shí)觀察小鼠狀態(tài)，包括精神、飲食、活動(dòng)、皮毛、排泄物以及腹部。每隔3 天稱量并記錄小鼠體質(zhì)量，各組小鼠灌胃3 周治療結(jié)束后，進(jìn)行采血工作等相關(guān)工作后，處死小鼠，立即解剖觀察腹腔內(nèi)情況，包括肝臟轉(zhuǎn)移和其他臟器受累情況，腹腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，有無(wú)血性腹水。 測(cè)量肝臟重量，將肝轉(zhuǎn)移癌組織切下進(jìn)行稱重，計(jì)算癌重/肝重比和抑瘤率。 抑瘤率=(1-治療組平均瘤重/對(duì)照組平均瘤重)×100%。

2.3.2 肝臟組織的病理學(xué)檢測(cè) 剖腹觀察并記錄各組小鼠肝臟成瘤情況，摘取肝臟，稱重，進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。首先用多聚甲醛對(duì)肝臟組織進(jìn)行固定包埋，流水沖洗組織中殘存的多聚甲醛，組織轉(zhuǎn)入脫水機(jī)中進(jìn)行梯度乙醇脫水，徹底脫水后浸入無(wú)水乙醇，浸蠟包埋。將組織切成厚度為4 μm 的切片，通過(guò)展片、撈片、烤片、脫蠟、乙醇浸入等HE 染色程序，采用中性樹(shù)膠封片，在光鏡下觀察、拍照，得到相應(yīng)的圖片進(jìn)行分析。

2.3.4 Western bolt 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)P65 及STAT3 蛋白表達(dá) 首先針對(duì)進(jìn)行蛋白提取，用PBS 緩沖液沖洗組織塊，加入組織蛋白提取試劑，充分勻漿后，在4 ℃12 000 r/min 離心15 min，收集總蛋白溶液。 總蛋白溶液變性，向每個(gè)樣品的總蛋白溶液中加入5×loading buffer 上樣緩沖液，加熱，離心，渦旋混勻后再離心。 配制分離膠、濃縮膠后立即灌膠；玻璃板固定好后加入預(yù)先配制好的分離膠。 待膠凝固后，加入濃縮膠并插入梳子，待膠再次凝固后輕輕拔出梳子。處理好的各組蛋白樣品并開(kāi)始電泳。PVDF 膜于甲醇中活化1 min，分離膠，加入預(yù)冷的轉(zhuǎn)膜液，設(shè)定電流為250 mA，于冰浴中轉(zhuǎn)膜1 h。 封閉：將PVDF 膜放入適量5%脫脂奶粉中，于脫色搖床上振蕩封閉1 h。 經(jīng)過(guò)一抗孵育、二抗孵育。 滴加新鮮配制的ECL 混合溶液到膜的蛋白面?zhèn)龋l(fā)光檢測(cè)。根據(jù)不同的光強(qiáng)度調(diào)整曝光條件，顯影、定影。 采用AlphaEaseFC 軟件處理系統(tǒng)分析目標(biāo)帶的光密度值。

2.3.5 ELISA 法檢測(cè)血清中TNF-α 蛋白濃度 將樣本血清3000 r/min 離心10 min，取上清檢測(cè)。 設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。 分別于各空中按實(shí)驗(yàn)規(guī)定加入樣品稀釋液100 μL。 覆膜，37 ℃孵育90 min。將孔內(nèi)液體丟棄，甩干，不用洗板，每孔中加入生物素化抗體工作液100 μL，將覆膜蓋上酶標(biāo)板，37 ℃溫育1 h。將剩余液體丟棄，洗板3 次，每次浸泡30 s，大約350 μL/孔，最后用吸水紙將孔內(nèi)液體擦干。 每孔加入酶結(jié)合物工作液100 μL，覆膜蓋上，37 ℃溫育30 min。 將孔內(nèi)液體丟棄，甩干，洗板5 次。 將顯色劑（TMB）加入每個(gè)孔中約90 μL，將覆膜蓋上酶標(biāo)37 ℃避光孵育15 min。 每孔加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm 波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀測(cè)量各孔的光密度即OD 值。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 計(jì)量資料以“±s”表示，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布及方差齊性時(shí)，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用LSD 法；數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布但方差不齊時(shí)，兩組間比較用Satterthwaite 近似T 檢驗(yàn)，多組間比較采用近似T 檢驗(yàn)Welch 法；數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。 均以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組小鼠一般情況觀察

模型組小鼠活動(dòng)度最低， 進(jìn)食量最少， 四肢消瘦，腹水嚴(yán)重；陽(yáng)性對(duì)照組小鼠活動(dòng)度低，但進(jìn)食情況較模型組好，依然存在腹水情況；中藥低劑量組小鼠活動(dòng)度差，進(jìn)食情況差，存在大量腹水情況；中藥中劑量組小鼠活動(dòng)度一般，進(jìn)食量中等，有較多腹水；中藥高劑量組小鼠活動(dòng)度良好，進(jìn)食情況良好，無(wú)腹水；中西藥組小鼠活動(dòng)度可，進(jìn)食情況良好，無(wú)腹水。給藥前及給藥后1 周，各組間比較體質(zhì)量無(wú)明顯差異（P＞0.05）；給藥后3 周，與模型組比較，中藥高劑量組、中西藥組、陽(yáng)性對(duì)照組小鼠的體質(zhì)量差異明顯（P＜0.05）。 詳見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠體質(zhì)量變化情況（g，±s，n=5）

表1 各組小鼠體質(zhì)量變化情況（g，±s，n=5）

注：與模型組比較，*P＜0.05；與中藥低劑量組比較，△P＜0.05。

給藥3 周11.02±3.50 25.92±2.09*△11.96±3.52 14.03±4.54 25.29±4.61*△26.69±1.90*△組別模型組陽(yáng)性對(duì)照組中藥低劑量組中藥中劑量組中藥高劑量組中西藥組給藥前19.98±5.62 20.18±4.14 20.39±2.06 20.04±3.67 19.85±6.96 20.21±1.97給藥1 周17.57±3.82 16.22±2.67 17.65±4.70 17.21±4.02 16.39±2.90 16.83±6.28給藥2 周13.29±4.25 17.47±2.05 13.84±1.94 15.39±3.89 17.49±5.76 18.08±4.30*△

3.2 各組肝組織瘤體比較

與模型組相比，中藥高劑量組、中西藥組陽(yáng)性對(duì)照組、肝組織瘤體重量明顯降低（P＜0.05）。 詳見(jiàn)表2、圖1。

圖1 各組肝轉(zhuǎn)移瘤情況

表2 肝組織瘤體重量（g，±s）

表2 肝組織瘤體重量（g，±s）

注：與模型組比較，*P＜0.05。

組別模型組陽(yáng)性對(duì)照組中藥低劑量組中藥中劑量組中藥高劑量組中西藥組n 5 5 5 5 5 5瘤體重量2.8±0.25 1.00±0.23*1.54±0.24 1.24±0.23 1.46±0.23*0.96±0.21*

3.3 肝臟組織的HE 染色

模型組肝臟組織上可見(jiàn)多個(gè)大小不等的結(jié)節(jié)，HE 染色后在光鏡下觀察，肝臟細(xì)胞結(jié)構(gòu)排列無(wú)序，細(xì)胞大小不一，異型性明顯，細(xì)胞核增多，可見(jiàn)病理性核分裂，與腸上皮病灶形態(tài)類似。 與模型組比較，中藥高劑量組、中西藥組、陽(yáng)性對(duì)照組小鼠肝臟組織結(jié)節(jié)明顯少于模型組，細(xì)胞排列整齊，結(jié)構(gòu)清晰，僅可見(jiàn)少許異型細(xì)胞。 詳見(jiàn)圖2。

圖2 各組小鼠灌胃3 周后肝臟組織的HE 染色（×100）

3.4 Western bolt 檢測(cè)結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移瘤中P65 及STAT3 蛋白表達(dá)情況

與模型組比較，中藥高劑量組、中西藥組、陽(yáng)性對(duì)照組P65、STAT3 蛋白表達(dá)顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，中西藥組P65、STAT3 蛋白表達(dá)顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 中藥低、中、高劑量組中P65 及STAT3 蛋白進(jìn)行組間比較，呈劑量依賴相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 詳見(jiàn)圖3、表3。

圖3 瘤組織中P65 和STAT3 蛋白表達(dá)灰度條帶

表3 各組P65、STAT3 蛋白表達(dá)水平（±s，n=5）

表3 各組P65、STAT3 蛋白表達(dá)水平（±s，n=5）

注：與模型組比較，*P＜0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，△P＜0.05。

組別模型組陽(yáng)性對(duì)照組中藥低劑量組中藥中劑量組中藥高劑量組中西藥組P65 3.77±0.56 1.06±0.36*3.15±0.29*△2.78±0.12 1.21±0.30*△0.62±0.16*△STAT3 2.79±0.67 0.68±0.28*2.75±0.23 1.82±0.19 0.64±0.08*0.28±0.07*△

3.5 ELISA 檢測(cè)裸鼠血清中TNF-α 濃度含量情況

與模型組相比，中藥低劑量組、中藥中劑量組以及中藥高劑量組的TNF-α 濃度含量呈下降趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。中藥低、中、高劑量組進(jìn)行組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與陽(yáng)性對(duì)照組相比中西藥組，TNF-α 濃度降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 詳見(jiàn)表4。

表4 各組TNF-α 濃度表達(dá)水平(pg/mL，±s，n=5)

表4 各組TNF-α 濃度表達(dá)水平(pg/mL，±s，n=5)

注：與模型組比較，*P＜0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，△P＜0.05。

組別模型組陽(yáng)性對(duì)照組中藥低劑量組中藥中劑量組中藥高劑量組中西藥組TNF-α 濃度223.574±15.253 93.657±10.273*208.452±12.354*△175.147±12.281*△68.382±13.607*△65.955±10.020*△

4 討論

目前研究發(fā)現(xiàn)，有兩種相對(duì)成熟的學(xué)說(shuō)可以解釋為何結(jié)直腸癌較易發(fā)生肝轉(zhuǎn)移：“種子-土壤”及“機(jī)械和解剖”學(xué)說(shuō)。 “種子-土壤”學(xué)說(shuō)認(rèn)為腫瘤的轉(zhuǎn)移不僅取決于自身的繁殖、分裂、擴(kuò)張能力，還取決于腫瘤細(xì)胞天生生長(zhǎng)的“土壤”，即腫瘤微環(huán)境。腫瘤微環(huán)境中包含了一種重要的狀態(tài)即腫瘤炎性微環(huán)境[14]。腫瘤炎性微環(huán)境主要由巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞，及其分泌的細(xì)胞因子、趨化因子和生長(zhǎng)因子等炎性介質(zhì)構(gòu)成[15]。 NF-κB 被認(rèn)為是腫瘤炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)器，在哺乳動(dòng)物中，通常以P65/P50 二聚體的形式傳遞轉(zhuǎn)錄活性。 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3（STAT3）是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，亦可通過(guò)磷酸化（p-STAT3）被激活，激活后的STAT3 可通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞因子和趨化因子等的表達(dá)，在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。 不同細(xì)胞的活化、細(xì)胞因子水平的變化、炎性反應(yīng)失衡等導(dǎo)致肝臟轉(zhuǎn)移前微環(huán)境改變，是循環(huán)腫瘤細(xì)胞最終在肝臟定植、生長(zhǎng)的關(guān)鍵[16-17]。 多種復(fù)雜類型細(xì)胞存在于人體肝臟內(nèi)，其中的Kupffer 細(xì)胞本質(zhì)屬于巨噬細(xì)胞，其主要起到抗原呈遞的作用，IL-1、IL-6、P65、STAT3、TNF-α 等細(xì)胞因子在一定條件下可由Kupffer 細(xì)胞釋放從而影響肝臟微環(huán)境。 因此，炎性相關(guān)因子在肝臟轉(zhuǎn)移瘤的形成過(guò)程中可能扮演較重要的角色[18]。

結(jié)直腸癌發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及多條通路和多種基因的調(diào)控，這與中醫(yī)藥治療具有“多成分、多途徑、多靶點(diǎn)”等作用特點(diǎn)契合[25]，因此，中醫(yī)藥在治療腫瘤方面的作用被越來(lái)越多的科研工作者所關(guān)注。在中醫(yī)中，結(jié)直腸癌屬于“腸覃”“臟毒”和“鎖肛痔”等病癥范圍。《醫(yī)宗金鑒·臟毒》中論述：“此病有內(nèi)外陰陽(yáng)之別”說(shuō)明結(jié)直腸癌的病因復(fù)雜，與飲食不節(jié)、邪毒內(nèi)侵、情志不遂、臟腑虛損等因素相關(guān)，其局部以濕熱瘀毒為主屬實(shí)，全身氣血虧虛以脾腎為主屬虛，因此，正虛為本，濕熱瘀毒為標(biāo)是結(jié)直腸癌發(fā)病的病機(jī)特點(diǎn)[19-20]。抗癌防移片系三湘名醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方，主要由紅參、半枝蓮、黃芪、薏苡仁、姜黃、女貞子、墨旱蓮、莪術(shù)、九香蟲、枸杞子、白術(shù)、湘曲等中藥組成。方中以紅參為君，起到大補(bǔ)元?dú)狻⒔∑⒁鏆庵Γ话胫ι彏槌迹嗲鍩峤舛尽⒒隼蛑В稽S芪、白術(shù)、薏苡仁益氣健脾；湘曲消食健胃，女貞子、墨旱蓮、枸杞子滋補(bǔ)肝腎；莪術(shù)、九香蟲、姜黃行氣破血；全方合用，具有疏肝健脾、補(bǔ)腎益氣，化瘀解毒等功效。多年的臨床應(yīng)用顯示，抗癌防移片可降低結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率。

本研究結(jié)果顯示，造模成功后，中藥高劑量組的小鼠的精神狀態(tài)、大便稀溏、腹水等一般情況有明顯改善，并且造模后小鼠體質(zhì)量增加。中藥高劑量組肝組織瘤體平均體質(zhì)量均低于模型組，一定程度上可抑制結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移瘤的生長(zhǎng)。 光鏡下觀察肝臟病理組織變化提示，與模型組比較，中藥高劑量組、中西藥組、陽(yáng)性對(duì)照組小鼠組織細(xì)胞排列整齊，結(jié)構(gòu)清晰，僅可見(jiàn)少許異型細(xì)胞。抗癌防移片抑制結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移，分子機(jī)制研究結(jié)果顯示，抗癌防移片可顯著抑制結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移瘤組織中P65 和STAT3 的蛋白表達(dá)，同時(shí)也可顯著抑制結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移瘤動(dòng)物模型血清中外泌的TNF-α 蛋白濃度表達(dá)，上述結(jié)果證實(shí)了抗癌防移片抑制結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制之一與調(diào)控NF-κB 和STAT3 信號(hào)通路的蛋白及基因表達(dá)相關(guān)。 本次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果提示，抗癌防移片對(duì)預(yù)防結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移有一定的作用，其機(jī)制與抑制P65、STAT3、TNF-α 蛋白表達(dá)有一定的關(guān)系。 綜上所述，抗癌防移片可通過(guò)NF-κB 及STAT3 通路，發(fā)揮其抑制結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移治療目的，為抗癌防移片治療結(jié)直腸癌的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。