lncRNA CCAT1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及其與病理參數(shù)的關(guān)系

姜秋慧 宋曉霞

鄭州人民醫(yī)院婦科，鄭州 450053

子宮內(nèi)膜癌又稱子宮體癌，是女性生殖道常見的三大惡性腫瘤之一，好發(fā)于肥胖、高血壓、糖尿病、患有多囊卵巢綜合征、絕經(jīng)后長(zhǎng)期服用單一雌激素而無(wú)孕酮拮抗的婦女。早期通常無(wú)明顯癥狀，隨著病情的發(fā)展可表現(xiàn)為絕經(jīng)后陰道出血、陰道排液等［1］。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生是原癌基因活化和抑癌基因失活等因素相互作用的結(jié)果，但其發(fā)病機(jī)制尚不明確。因此深入研究子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制對(duì)其病情的早期診斷及預(yù)后有重要意義［2］。長(zhǎng)鏈非編碼RNA結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1（lncRNA CCAT1）是一種在結(jié)直腸癌中表達(dá)異常增高的lncRNA，其與結(jié)直腸癌的發(fā)展密切相關(guān)，由于其在多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展的過(guò)程中有重要作用，因此被認(rèn)為是致癌基因［3］。本研究旨在探討lncRNA CCAT1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及與病理參數(shù)的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

資料與方法

1、一般資料

回顧性選取2021年1月至2022年1月鄭州人民醫(yī)院收治的105例子宮內(nèi)膜癌行手術(shù)治療的患者為研究對(duì)象，收集患者術(shù)后切除的子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本及相應(yīng)癌旁距腫瘤邊緣約5 cm以上的組織標(biāo)本。患者年齡30～73（55.37±3.46）歲，腫瘤長(zhǎng)徑≤2 cm 52例、＞2 cm 53例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《子宮內(nèi)膜癌篩查和早期診斷專家共識(shí)（草案）》［4］中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)者；（2）癌旁組織經(jīng)診斷標(biāo)準(zhǔn)證實(shí)未經(jīng)腫瘤細(xì)胞入侵者；（3）術(shù)前未接受過(guò)放療、化療等抗腫瘤治療方案者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他腫瘤性疾病者；（2）中途退出者；（3）合并血液系統(tǒng)疾病者等。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批同意。

2、方法

所有子宮內(nèi)膜癌組織在分離后30 min內(nèi)注入液氮，存放于-80℃冰箱中備用。采用總RNA試劑（Redzol）對(duì)患者子宮內(nèi)膜癌組織進(jìn)行提取：（1）依據(jù)培養(yǎng)皿的面積估算Redzol和組織細(xì)胞的用量，每1 ml Redzol的組織用量為50～100 mg。（2）吸盡培養(yǎng)液，加入Redzol，用槍反復(fù)吹打數(shù)次，確保全部裂解，之后將其轉(zhuǎn)移至新的離心管中。（3）將新鮮組織剪成小塊，置入勻漿器內(nèi)，加入Redzol后用勻漿器勻漿，再轉(zhuǎn)移至新的離心管中。（4）將勻漿液置于15～30℃中靜置5 min使其充分溶解，每1 ml Redzol中加入0.2 ml氯仿，震蕩混勻置于15～30℃中靜置2～3 min后進(jìn)行離心（2～8℃，12 000 rpm，15 min，離心半徑8 cm）。（5）轉(zhuǎn)移上層水相至另一新離心管中，按0.5 ml異丙醇/1 ml Redzol的比例加入異丙醇，充分混勻后置于15～30℃中靜置10 min，再次進(jìn)行離心（2～8℃，12 000 rpm，10 min，離心半徑8 cm），RNA形成的白色團(tuán)狀沉淀在離心管的底部和側(cè)面。（6）按1 ml乙醇/1 ml Redzol加入乙醇，漂洗2～3次RNA沉淀，離心（2～8℃，7 500 rpm，5 min，離心半徑8 cm），棄去上清。（7）盡量棄去乙醇溶液，于超凈工作臺(tái)自然風(fēng)干5～10 min，離心管蒸發(fā)完畢，白色RNA沉淀萎黃即可。（8）采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增儀（湖南圣洲生物科技有限公司，注冊(cè)證20212220277，規(guī)格：Cycler Z200），進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，置于冰上冷卻或放入-20℃冰箱中待用。

3、觀察指標(biāo)

采用PCR技術(shù)檢測(cè)并觀察lncRNA CCAT1在子宮內(nèi)膜癌組織與癌旁組織中、不同病理分期、不同組織分級(jí)、不同分化程度、不同肌層浸潤(rùn)程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的表達(dá)及其關(guān)系。

4、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算與分析的軟件為SPSS 21.0，P＜0.05提示其數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用配對(duì)t檢驗(yàn)、方差分析、獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析以（）代表的符合正態(tài)分布的計(jì)量資料，使用Spearman相關(guān)性分析分析各指標(biāo)間的相關(guān)性。

結(jié) 果

如表1所示，lncRNA CCAT1在子宮內(nèi)膜癌組織、病理Ⅲ+Ⅳ期、肌層浸潤(rùn)≥1/2、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的表達(dá)水平高于癌旁組織、病理Ⅰ+Ⅱ期、肌層浸潤(rùn)＜1/2、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，同時(shí)lncRNA CCAT1在G1級(jí)、G2級(jí)、G3級(jí)與高分化、中分化、低分化中的表達(dá)水平呈逐漸升高趨勢(shì)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。 經(jīng)Spearman相 關(guān) 系 數(shù) 分 析 ，lncRNA CCAT1表達(dá)水平與病理分期、組織分級(jí)、肌層浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（r=0.458，0.425，0.472，0.436；均P＜0.05），lncRNA CCAT1表達(dá)水平與分化程度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.423，P＜0.05）。

表1 lncRNA CCAT1在105例子宮內(nèi)膜癌組織與癌旁組織中的表達(dá)及其與病理參數(shù)的關(guān)系（）

表1 lncRNA CCAT1在105例子宮內(nèi)膜癌組織與癌旁組織中的表達(dá)及其與病理參數(shù)的關(guān)系（）

注：lncRNA CCAT1為長(zhǎng)鏈非編碼RNA結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1

類別組織子宮內(nèi)膜癌組織癌旁組織不同病理分期Ⅰ+Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期不同組織分級(jí)G1級(jí)G2級(jí)G3級(jí)不同分化程度高分化中分化低分化不同肌層浸潤(rùn)程度肌層浸潤(rùn)≥1/2肌層浸潤(rùn)＜1/2有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)有例數(shù)105 105 75 30 26 48 31 28 47 30 65 40 76 29 lncRNA CCAT1表達(dá)水平4.25±0.47 1.18±0.13 3.25±0.47 5.82±0.52 2.23±0.33 3.86±0.44 7.63±0.68 1.46±0.24 4.12±0.58 8.89±0.75 6.35±0.72 1.45±0.26 2.12±0.47 10.64±1.36 t/F值64.510 24.550 906.780 1 278.528 41.350 47.916 P值＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

討 論

子宮內(nèi)膜癌是發(fā)生在女性子宮內(nèi)膜上皮組織的惡性腫瘤，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)［5］。Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌早期容易診斷，且預(yù)后情況較好；Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌多發(fā)于絕經(jīng)后萎縮的子宮內(nèi)膜組織，惡性程度較高［6］。研究證實(shí)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展是由于細(xì)胞內(nèi)部及表面遺傳的改變、癌基因的激活等引發(fā)的一種慢性持續(xù)的過(guò)程［7-8］。

lncRNA能夠影響細(xì)胞凋亡信號(hào)，在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的過(guò)程中均發(fā)揮著重要作用。lncRNA基因序列較長(zhǎng)，功能比較復(fù)雜，并且其空間結(jié)構(gòu)多樣，其不僅可以通過(guò)影響附近基因的表達(dá)引發(fā)染色體的重塑而調(diào)控基因，還可以與轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行結(jié)合，激活輔助蛋白滅活靶基因［9-10］。Ⅲ+Ⅳ期子宮內(nèi)膜癌患者病程已經(jīng)發(fā)展至中晚期，病灶出現(xiàn)嚴(yán)重?cái)U(kuò)散，癌細(xì)胞已經(jīng)廣泛轉(zhuǎn)移且呈現(xiàn)高表達(dá)。肌層浸潤(rùn)主要指腫瘤細(xì)胞突破基底膜，進(jìn)而發(fā)生的間質(zhì)浸潤(rùn)，其可以提高腫瘤細(xì)胞向遠(yuǎn)處組織器官發(fā)生侵襲的可能性，此外，癌細(xì)胞的浸潤(rùn)深度由內(nèi)向外逐漸加深，惡性程度也會(huì)逐漸升高，此后患者治療和預(yù)后效果較差。惡性腫瘤可以通過(guò)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移至其他部位，造成淋巴腫瘤細(xì)胞在淋巴結(jié)滋養(yǎng)、繁殖，進(jìn)而引起淋巴結(jié)癌性的腫大。惡性腫瘤的侵襲遷移受多種信號(hào)通路的調(diào)控，例如MAPK信號(hào)通路可參與細(xì)胞增殖、分化以及遷移、侵襲，在腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育及浸潤(rùn)中發(fā)揮著重要作用。李林等［11］的研究結(jié)果顯示，CCAT1可以通過(guò)MAPK信號(hào)通路促進(jìn)神經(jīng)管細(xì)胞瘤的轉(zhuǎn)移，進(jìn)而參與惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲過(guò)程。lncRNA CCAT1最早被發(fā)現(xiàn)在結(jié)腸癌患者組織中呈現(xiàn)較高表達(dá)，此后發(fā)現(xiàn)其可與miRNA相互作用，參與靶細(xì)胞的表達(dá)，并形成相關(guān)基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，可以參與腫瘤產(chǎn)生的多個(gè)過(guò)程，進(jìn)而促進(jìn)病情的發(fā)展［12］。本研究結(jié)果顯示lncRNA CCAT1在子宮內(nèi)膜癌組織、病理Ⅲ+Ⅳ期、肌層浸潤(rùn)≥1/2、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的表達(dá)水平高于癌旁組織、病理Ⅰ+Ⅱ期、肌層浸潤(rùn)＜1/2、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，同時(shí)lncRNACCAT1在G1級(jí)、G2級(jí)、G3級(jí)與高分化、中分化、低分化中的表達(dá)水平呈逐漸升高趨勢(shì)，經(jīng)Spearman相關(guān)系數(shù)分析，lncRNA CCAT1表達(dá)水平與病理分期、組織分級(jí)、肌層浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)關(guān)系，表明lncRNA CCAT1參與了子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的侵襲、基層浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的過(guò)程，其在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病過(guò)程中起重要作用。

綜上，lncRNA CCAT1在子宮內(nèi)膜癌組織中呈現(xiàn)較高表達(dá)，與組織分級(jí)、分化程度、肌層浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，且其水平變化可為子宮內(nèi)膜癌的臨床診療提供參考。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突