5 195例孕婦珠蛋白生成障礙性貧血篩查結果及基因類型分析*

嚴關平，劉武林，何廷德，雷 余，劉 洋，龔 倬，謝家寧

1.重慶市涪陵區婦幼保健院檢驗科，重慶408000；2.重慶市涪陵區婦幼保健院婦產科，重慶 408000；3.重慶市中醫院檢驗科/重慶市中醫感染性疾病中西醫結合診治實驗室，重慶 400021

珠蛋白生成障礙性貧血(原名地中海貧血，簡稱地貧)是由于一組珠蛋白基因突變或缺失導致肽鏈合成障礙而引起的溶血性貧血的單基因遺傳性疾病，也是危害最嚴重的血紅蛋白病。全球有近7%的人口為地貧基因攜帶者，每年有30萬～50萬患地貧和鐮刀細胞貧血的新生兒出生[1]。目前，醫學對重型地貧尚無有效治療方案，只有通過孕前遺傳檢測、B超檢查、孕期篩查和產前診斷，可使出生缺陷率減少40%～50%。本研究對2020年1月至2022年3月就診于重慶市涪陵區婦幼保健院的5 195例孕婦血液學表型[紅細胞計數(RBC)、血紅蛋白(Hb)、平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)]等進行檢測，結合堿性Hb電泳對Hb成分進行分析，然后采用單管多重聚合酶鏈反應法(GSPCR)結合反向斑點膜條雜交技術(RDB)進行地貧基因檢查和基因診斷，就Hb成分分析結果和地貧基因分型結果進行探討，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 對2020年1月至2022年3月到重慶市涪陵區婦幼保健院接受孕早期檢查的5 195例孕婦進行地貧基因篩查。5 195例孕婦年齡19～47歲，平均(25.1±4.32歲)，孕周6～15周，平均(12.5±2.18)周，均簽署了知情同意書。

1.2儀器與試劑 SYSmex ltd XN-1000(B3)型全自動血液細胞分析儀由希森美康醫用電子有限公司提供，HBNP-480型全自動核酸提取儀由廣東凱普生物科技有限公司提供，HBHM-3000S型自動核酸分子雜交儀由廣東凱普生物科技有限公司提供，7500型實時熒光定量PCR擴增儀由美國ABI提供。地貧Hb成分分析采用Helena SPIFE 3000全自動電泳分析系統及試劑，α、β-地貧基因檢測試劑盒由廣州凱普醫藥科技有限公司提供。

1.3方法

1.3.1電泳及基因檢測 采用堿性Hb電泳檢測HbA2、Hb(A+F)，結合外周血的RBC、Hb、MCV、MCH、MCHC進行Hb成分及異常Hb帶檢測，采用GSPCR結合RDB技術(即PCR+導流雜交法)進行α、β-地貧基因檢測。各項實驗及結果判斷均按照試劑盒說明書進行。

1.3.2地貧基因篩查診斷標準 (1)MCV檢測結果異常標準：<80 fL或>100 fL。MCH檢測結果異常標準：<27 pg。(2)堿性Hb電泳時，HbA2<2.5%行α-地貧基因分析，HbA>3.5%行β-地貧基因分析。

1.4數據處理 采用描述性的方法對數據進行分析，并對地貧基因篩查結果及基因型別分布情況進行描述。

2 結 果

2.1地貧基因篩查結果 5 195例受檢孕婦中， MCV檢測結果異常2 077例(其中MCV<80 fL為803例，MCV>100 fL為1 274例)， MCH檢測結果異常(<27 pg)為1 008例，Hb檢測結果異常為384例。

2.2堿性Hb電泳結果 Hb(A+F)堿性電泳實驗結果：陽性307例，其中HbF降低102例，為β-地貧可疑，可疑陽性率為1.96%(102/5 195)；HbA2降低205例，為α-地貧可疑，可疑陽性率為3.95%(205/5 195)。Hb成分電泳分析結果正常4 888例，正常率為94.09% (4 888/5 195)。5 195例受檢孕婦未檢測到異常Hb帶。

2.3地貧基因檢測結果 5 195例孕婦確診為地貧基因攜帶者(包括α-地貧基因缺失型和突變型及β-地貧基因突變型)300例，陽性率5.78%(300/5 195)，其中α-地貧基因攜帶者198例，陽性率3.82%，β-地貧基因攜帶者102例，陽性率1.96%。

2.3.1α-地貧基因缺失型 α-地貧基因缺失型雜合子179例，未檢出α-地貧基因缺失型純合子。見表1。

表1 α-地貧基因缺失檢測結果

2.3.2α-地貧基因突變型 檢出α-地貧基因突變型雜合子19例，未檢出α-地貧基因突變型純合子。見表2。

表2 α-地貧基因突變檢測結果

2.3.3β-地貧基因突變型 β-地貧基因突變型雜合子102例，未檢出β-地貧基因突變型純合子。檢測結果見表3。

表3 β-地貧基因突變檢測結果

3 討 論

地貧的發病機制為編碼珠蛋白的基因缺失、突變或調控異常使肽鏈出現一種或幾種合成障礙，導致Hb組分發生常改變的常染色體隱性遺傳病，呈進行性貧血[2]。地貧患者遍布全球，主要高發于地中海周邊國家及亞洲、南太平洋、中美洲等地區。據我國的流行病學調查：長江以南(廣西、廣東、海南、臺灣、香港、四川、重慶、云南、貴州)為地貧的多見地區。地貧在臨床上根據基因不同的表現類型，劃分為α-地貧、β-地貧、異常Hb病等。地貧具有一定致殘性和致死性，因可導致出生缺陷或死亡而備受人們的重視[3]。若夫妻為同型地貧基因的攜帶者，每次妊娠，其子女有1/4的概率為重型地貧患兒。

重慶由于歷史原因，多由湖廣移民遷入，有著復雜的遺傳基因背景，而廣西、廣東地區是地貧的主要高發地，余永熊等[4]報道顯示，廣西地貧基因攜帶率高達24.78%，因此從地域遷徙因素上來推斷重慶存在很高的地貧基因陽性率。本研究對5 195例孕早期檢查孕婦進行地貧基因篩查，結果顯示， MCV檢測結果異常的2 077例， 通過血清鐵蛋白測定，排除缺鐵性貧血；MCH檢測結果異常(<27 pg)的1 008例；堿性Hb電泳結果異常的307例，其中有102例HbF降低(為β-地貧可疑)，有205例HbA2降低(為α-地貧可疑)。對MCV結果異常者進行地貧基因檢測，檢出300例陽性，地貧基因檢出率為14.44%(300/2 077)。 這與謝建渝等[5]報道的重慶孕婦地貧基因陽性率(14.14%)和杜偉等[6]報道的重慶地貧基因陽性率(13.92%)基本一致。

本研究采用GSPCR技術結合RDB 法同時進行α、β-地貧基因檢測，數據統計結果顯示:在5 195例孕婦早期地貧基因檢測中，α-地貧基因缺失型、突變型及β-地貧基因突變型共陽性300例，陽性率5.78%(300/5 195)。地貧基因檢出率高于全國2.64%的平均水平[7]，略高于謝建渝等[5]報道的重慶地區孕婦地貧篩查的陽性率(4.25%)，這可能與孕婦所在地域等不同有關。基因檢測確診的300例孕婦中，孕婦α-地貧基因攜帶者有198例(α-地貧基因缺失型有179例，α-地貧基因突變型有19例)，β-地貧基因突變有102例。198例α-地貧基因攜帶者中最高的基因型是-α3.7/αα，其次是東南亞缺失型--SEA/αα，再次是-α4.2/αα基因型，第四位是αCSα/αα基因型，最后是αWSα/αα基因突變型。在102例β-地貧基因突變型攜帶者中，檢測出9種常見的地貧等位基因，以CD17型最多，其次是CD41-42型，再次是IVS-Ⅱ-654型。

從本研究數據得出，α-地貧基因攜帶者以-α3.7/αα基因型為常見，β-地貧基因突變型攜帶者CD17型最多。與國內的相關報道基本相同[8]，α-地貧基因和β-地貧基因突變型的型別種類及頻率分布與我國南方地區基本一致[9]。有研究提示，α-地貧與低出生體重等明顯相關[10]。這說明在孕婦的產前檢查中要高度重視并加強孕早期的地貧的檢測與篩查。在300例孕婦地貧基因攜帶者中，α-地貧基因陽性率明顯高于β-地貧基因，與地貧高發區的廣東[11]、廣西[12]相關報道基本吻合。

本研究數據說明：重慶市涪陵區孕婦有較高的地貧基因陽性率和地貧基因篩查陽性率。該地區α-地貧基因攜帶者以-α3.7/αα基因位點和--SEA/αα基因位點為常見，β-地貧基因突變型攜帶者以CD17型基因位點多見。近期的研究報道顯示，我國地貧患兒的出生率是2.4‰[13]。因此，及早行地貧基因篩查及基因分析，對地貧基因攜帶的孕婦進行出生缺陷的干預，有助于防控重度地貧新生兒的出生，這對提高人口素質具有重要意義。