NKT細(xì)胞在宮頸癌外周血中的水平研究*

涂云霞，葉婷婷，羅 琳，劉榮芳，陳 格，華金仁，潘 玫

江西省婦幼保健院腫瘤科，江西南昌 330006

宮頸癌的發(fā)病率和死亡率均較高，相關(guān)研究顯示，2018年全球新增宮頸癌病例57.0萬(wàn)例，死亡31.1萬(wàn)例，分別占所有女性癌癥發(fā)病和死亡的6.6%和7.5%[1]。宮頸癌的局部侵襲、淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是其預(yù)后不良的主要原因[2]，免疫監(jiān)測(cè)是腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處侵襲轉(zhuǎn)移的重要前提[3]。在腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)測(cè)中，T細(xì)胞和B細(xì)胞的獲得性免疫固然重要，但是自然殺傷T細(xì)胞(NKT細(xì)胞)也發(fā)揮了重要作用。NKT細(xì)胞是T細(xì)胞的一個(gè)亞群，它既表達(dá)NK細(xì)胞受體，又表達(dá)T細(xì)胞受體，兼具NK細(xì)胞和T細(xì)胞的特性，因此也被稱為CD3+CD56+NKT樣細(xì)胞[4]。依據(jù)CD4、CD8的表達(dá)情況，NKT細(xì)胞又可分為CD8+NKT、CD4+NKT、CD4-CD8-T細(xì)胞(DN細(xì)胞)這3個(gè)亞群，這些細(xì)胞在經(jīng)抗原活化后不僅可以直接對(duì)腫瘤進(jìn)行殺傷，也可通過激活免疫系統(tǒng)間接實(shí)現(xiàn)殺傷腫瘤的目的[5]。

NKT細(xì)胞最初在非霍奇金淋巴瘤、白血病、肺癌、乳腺癌中得到初步研究，其研究結(jié)果證實(shí)在這些腫瘤的發(fā)生發(fā)展中NKT細(xì)胞具有重要的地位，然而目前NKT細(xì)胞在宮頸癌中的研究較少[6-7]。本研究以宮頸癌患者及健康體檢女性作為研究對(duì)象，比較二者NKT細(xì)胞的差異等，并根據(jù)宮頸癌病理類型及分期的不同，比較NKT細(xì)胞差異，分析NKT細(xì)胞與宮頸癌發(fā)生、病理類型及分期的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年1月至2018年12月于本院就診的100例女性宮頸癌患者為宮頸癌組。宮頸癌組平均年齡(44.1±5.1)歲；臨床分期Ⅰ～Ⅱ期62例，Ⅲ～Ⅳ期38例；鱗癌78例、腺癌15例、腺鱗癌7例；腫瘤最大徑<4 cm 75例，腫瘤最大徑≥4 cm 25例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移66例。同期隨機(jī)選取在本院進(jìn)行常規(guī)體檢的健康女性100例為對(duì)照組，平均年齡(45.1±4.6)歲。宮頸癌患者納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)未經(jīng)手術(shù)、放化療等任何抗腫瘤治療者；(2)有明確的宮頸癌病理診斷報(bào)告者；(3)有完整的診斷且記錄詳細(xì)者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)病歷信息不全、記錄不全者；(2)嚴(yán)重感染者；(3)自身免疫性疾病者。

1.2方法 本研究所有的血標(biāo)本均采用PAXgene采血管收集，在收集每一份血標(biāo)本前確保采血管均處于常溫保存狀態(tài)。采血時(shí)保持采血管低于患者手臂，采血時(shí)間大于10 s，血液收集后，翻轉(zhuǎn)采血管8～10次，使血液充分混合均勻。血樣于室溫下放置2 h后存于-20 ℃冰箱中過夜，次日放置于-80 ℃冰箱中保存。先后分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，通過流式細(xì)胞儀及免疫組化技術(shù)進(jìn)行NKT細(xì)胞的檢測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1兩組外周血中NKT細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞水平比較 宮頸癌組的NKT細(xì)胞水平明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，見表1、圖1。

表1 兩組外周血中NKT細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞水平比較

注：A為對(duì)照組CD4+T細(xì)胞免疫組化圖；B為宮頸癌組CD4+T細(xì)胞免疫組化圖；C為對(duì)照組NKT細(xì)胞免疫組化圖；D為宮頸癌組NKT細(xì)胞免疫組化圖。

2.2不同病理類型宮頸癌患者NKT細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞水平比較 與宮頸腺癌、宮頸腺鱗癌患者比較，宮頸鱗癌患者NKT細(xì)胞水平升高(P<0.05)，但不同病理類型宮頸癌患者CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2 不同病理類型宮頸癌患者NKT細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞水平比較

2.3不同臨床分期宮頸癌患者外周血中NKT細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞水平比較 與臨床分期Ⅰ～Ⅱ期宮頸癌患者比較，Ⅲ～Ⅳ期宮頸癌患者NKT細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞水平降低，CD8+T細(xì)胞水平升高(P<0.05)，見表3。

表3 不同臨床分期宮頸癌患者外周血中NKT細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞水平比較

3 討 論

宮頸癌目前已是全球范圍內(nèi)較常見的婦科惡性腫瘤，每年約有529 800例新發(fā)病例，其中發(fā)展中國(guó)家的病例約占85%[8]。高危型人乳頭瘤病毒的持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)病的主要致病因素。

研究表明，腫瘤患者腫瘤微環(huán)境中淋巴細(xì)胞的亞群和分型與腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后有關(guān)，但是目前臨床深入研究較少[9]。外周血淋巴細(xì)胞具有標(biāo)本采集方便、能夠評(píng)估腫瘤微環(huán)境中淋巴細(xì)胞分布的特點(diǎn)，因此一般會(huì)采用評(píng)估外周血中淋巴細(xì)胞分布的方法來(lái)預(yù)測(cè)患者的免疫功能、腫瘤微環(huán)境狀態(tài)及患者的預(yù)后情況[10-13]。本研究通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)宮頸癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群分布，分析其與患者病理類型、分期、預(yù)后的關(guān)系，為宮頸癌的診斷和治療提供初步的理論基礎(chǔ)。

研究表明NKT細(xì)胞為惡性腫瘤的免疫治療提供了新的診療思路與方向[5]。NKT細(xì)胞是共表達(dá)T細(xì)胞抗原受體(TCR)和NK細(xì)胞標(biāo)志物的細(xì)胞組[14-15]，也就是說(shuō)，NKT細(xì)胞共享NK細(xì)胞和T細(xì)胞特征并具有先天性和獲得性免疫功能。一旦TCR結(jié)扎，可激活NKT細(xì)胞分泌細(xì)胞毒性酶和細(xì)胞因子以殺死靶細(xì)胞[16]。

研究表明高水平的NKT細(xì)胞與肺癌、結(jié)直腸癌患者的存活率升高有關(guān)[5]。NKT細(xì)胞一旦被激活，不但可表達(dá)NK細(xì)胞的一些功能，還擁有一些不同于傳統(tǒng)T細(xì)胞的功能，因此NKT細(xì)胞在免疫應(yīng)答中發(fā)揮著潛在效應(yīng)細(xì)胞和調(diào)控細(xì)胞的作用。有研究表明，NKT細(xì)胞盡管在外周循環(huán)體系中數(shù)目有限，但其在人體內(nèi)外都表達(dá)出較強(qiáng)的抗腫瘤效應(yīng)，NKT細(xì)胞水平在結(jié)直腸癌中升高，但在宮頸癌等其他惡性腫瘤中NKT細(xì)胞水平降低[9-13]。因此探究NKT細(xì)胞水平是否與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有直接的聯(lián)系十分重要。

本研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌組NKT細(xì)胞水平明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，但CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞水平在兩組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與宮頸腺癌、宮頸腺鱗癌患者比較，宮頸鱗癌患者NKT細(xì)胞水平升高(P<0.05)，但不同病理類型宮頸癌患者CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與臨床分期Ⅰ～Ⅱ期患者比較，Ⅲ～Ⅳ期患者NKT細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞水平降低，CD8+T細(xì)胞水平升高(P<0.05)。以上結(jié)果表明NKT細(xì)胞水平與宮頸癌的病理類型和臨床分期有關(guān)，CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞水平僅與宮頸癌臨床分期有關(guān)。本課題組下一步將在細(xì)胞因子水平進(jìn)一步研究NKT細(xì)胞在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，同時(shí)在已有的基礎(chǔ)上進(jìn)一步對(duì)參與課題研究的患者進(jìn)行密切的臨床隨訪研究，動(dòng)態(tài)檢測(cè)其外周血中NKT細(xì)胞表達(dá)的變化趨勢(shì)，為評(píng)估臨床預(yù)后提供參考依據(jù)。