血清補(bǔ)體及IL-25 在SLE 中的表達(dá)及臨床意義

王楊 羅鈺鴻 廖媛

SLE 是一種典型的、全身性的自身免疫性疾病，以多臟器系統(tǒng)受累及多種自身抗體陽(yáng)性為主要臨床特征。如果SLE 患者未得到及時(shí)診治或病情長(zhǎng)期未得到控制，將出現(xiàn)不可逆的器官損傷，甚至死亡。狼瘡性腎炎（LN）是SLE 最常見和最重要的并發(fā)癥；精神神經(jīng)性狼瘡（NPSLE）、血液系統(tǒng)受累也是SLE 的嚴(yán)重并發(fā)癥［1-2］。補(bǔ)體（C）是一組在激活后存在于血清、組織液和細(xì)胞膜上的酶活性物質(zhì)，是抗體發(fā)揮溶細(xì)胞功能的輔助物質(zhì)，具有抗感染、免疫調(diào)節(jié)功能。C3 是血漿中含量最高的補(bǔ)體活性物質(zhì)。C4 可以通過C1s 的水解過程產(chǎn)生C4a 和C4b 兩種片段，這兩種片段促進(jìn)補(bǔ)體活化、細(xì)胞吞噬。總補(bǔ)體（CH50）活性檢測(cè)結(jié)果反映C1～C49 的綜合水平。在自身免疫性疾病中，疾病活動(dòng)期補(bǔ)體被過度激活，CH50 水平下降，而當(dāng)病情穩(wěn)定時(shí)CH50 水平反應(yīng)性升高。SLE的病理變化使患者血清中存在多種自身抗體，這些自身抗體與相對(duì)應(yīng)的自身抗原形成大量免疫復(fù)合物（IC），廣泛沉積于多臟器及系統(tǒng)中，激活補(bǔ)體可能造成這些部位的炎癥損傷［3］。既往研究者認(rèn)為，補(bǔ)體系統(tǒng)參與SLE，可用于SLE 患者的診斷和疾病活動(dòng)情況的監(jiān)測(cè)［4］。CRP 是急性時(shí)相蛋白，在SLE 中更常見的抗CRP 自身抗體并不針對(duì)天然循環(huán)CRP，而是針對(duì)表面上CRP 解離時(shí)暴露的表位［5］。雙鏈DNA（dsDNA）是重要的遺傳物質(zhì)，抗dsDNA 抗體與DNA 結(jié)合形成的免疫復(fù)合體，其水平主要用于判斷SLE 疾病活動(dòng)度的情況以及療效的監(jiān)測(cè)［6］。IL-25 由2 型輔助性T 淋巴細(xì)胞（Th2）和肥大細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫反應(yīng)，從而促進(jìn)機(jī)體的炎癥反應(yīng)。研究表明，IL-25 通過抑制炎性細(xì)胞因子（包括IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-12p70、IL-17A）的產(chǎn)生，緩解了SLE 小鼠的臨床癥狀［7］。本研究探討補(bǔ)體及IL-25 等指標(biāo)在SLE 患者中的變化，為SLE 患者的診斷和療效評(píng)價(jià)提供選擇依據(jù)。

對(duì)象與方法

一、研究對(duì)象

2021 年7 月至2022 年3 月在本院診治的151例SLE 患者，均符合《2020 中國(guó)系統(tǒng)性紅斑狼瘡診療指南》中的SLE 診斷標(biāo)準(zhǔn)［8］。根據(jù)2019 年歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟/美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（EULAR/ACR）SLE 分類診斷標(biāo)準(zhǔn)，按SLE 累及器官情況將151例患者分為單純SLE 組 58 例、單器官損傷組67例（包括51 例LN、13 例SLE 血液系統(tǒng)損傷、3例其他器官損傷）、多器官損傷組26 例（包括25例LN 合并其他器官損傷、1 例血液系統(tǒng)損傷合并腦損傷）。排除標(biāo)準(zhǔn)：有其他風(fēng)濕性疾病者，有惡性腫瘤者，合并其他基礎(chǔ)代謝性疾病者，有感染性疾病者，有其他原因如心血管疾病、繼發(fā)顱內(nèi)病變、藥物不良反應(yīng)等所導(dǎo)致的器官損傷者。本研究經(jīng)中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批件號(hào)：中大附三醫(yī)倫［2019］02-309-01），入組患者均已簽署知情同意書。

二、方 法

于患者空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血，分離血清，使用日立7600 全自動(dòng)生化分析儀以免疫比濁法檢測(cè)C3、C4、CH50、CRP，其中C3 參考值范圍為0.80～1.60 g/L，C4 參考值范圍為0.10～0.40 g/L，CH50 參考值范圍為23～46 kU/L，CRP 參考值范圍為0～6 mg/L；以化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)抗dsDNA 抗體，將 ≥10 kU/L 定義為陽(yáng)性；以ELISA 檢測(cè)IL-25，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清中IL-25 的水平。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 25.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。正態(tài)分布的計(jì)量資料采用 表示；非正態(tài)分布的計(jì)量資料采用M（P25，P75）表示，3 組間的比較采用Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)，2 組間的比較采用Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用Bonferroni 法校正，即P ＜0.05/3 = 0.017 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。α= 0.05。

結(jié) 果

一、3 組SLE 患者的一般資料比較

單純SLE 組、單器官損傷組、多器官損傷組患者的性別構(gòu)成比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05）。與其他2 組相比，單純SLE 組患者的年齡較大、病程較長(zhǎng)（P 均＜0.017）。見表1。

表1 3 組SLE 患者的一般資料比較

二、3 組SLE 患者的血清C3、C4、CH50、IL-25 和CRP 水平比較

單純SLE 組、單器官損傷組和多器官損傷組患者間血清C4、CH50、IL-25 和CRP 水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 均> 0.017）。3 組患者的血清C3 水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），其中多器官損傷組患者的血清C3 水平低于單純SLE組（P ＜0.017）。見圖1。

圖1 3 組SLE 患者的血清IL-25、C3、C4、CH50 和CRP 水平比較

三、SLE 患者的血清C3 與C4、CH50、IL-25、CRP 水平的相關(guān)性分析

Spearman 相關(guān)性分析顯示，SLE 患者的C3 水平與C4 水平（rs= 0.73，P ＜0.001）、CH50（rs=0.81，P ＜0.01）呈正相關(guān)，而與IL-25 水平呈負(fù)相關(guān)（rs= -0.14，P ＜0.001），與CRP 無(wú)相關(guān)性（P >0.05）。見圖2。

圖2 SLE 患者的血清C3 與C4、CH50、IL-25、CRP水平的相關(guān)性分析

四、3 組SLE 患者抗dsDNA 抗體陽(yáng)性率比較

單純SLE 組、單器官損傷組和多器官損傷組患者的抗dsDNA 抗體陽(yáng)性率分別為29%（17/58）、45%（30/67）和58%（15/26），組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 6.663，P = 0.030）；多器官損傷組的抗dsDNA 抗體陽(yáng)性率高于單純SLE 組（χ2=6.132，P = 0.013）；單純SLE 組與單器官損傷組間（χ2= 1.251，P = 0.263）、單器官損傷組與多器官損傷組間（χ2= 3.169，P = 0.075）的抗dsDNA抗體陽(yáng)性率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

討 論

SLE 發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，能夠同時(shí)造成多種器官及系統(tǒng)損傷，且因免疫系統(tǒng)異常可出現(xiàn)多種自身抗體高表達(dá)，而自身抗體積累、IC 沉積以及無(wú)法建立免疫耐受可導(dǎo)致各種靶器官出現(xiàn)炎癥性損傷［9］。

SLE 患者體內(nèi)在疾病活動(dòng)期和感染期均存在著大量IC，補(bǔ)體系統(tǒng)會(huì)被激活清除IC，從而導(dǎo)致C3和C4 被大量消耗，故C3、C4 在SLE 疾病活動(dòng)期和發(fā)生感染的情況下會(huì)有所降低。CH50 反映血清中補(bǔ)體經(jīng)典激活途徑的溶血活性，其與C1～C9 各成分的數(shù)量及活性均有關(guān)，但隨著C3、C4 水平及活性降低，血清CH50 活性及含量均會(huì)降低。雖然C3、C4 可以反映SLE 的疾病活動(dòng)，但因?yàn)镾LE急性期補(bǔ)體基因拷貝數(shù)和表達(dá)的個(gè)體差異及個(gè)體補(bǔ)體代謝率差異與疾病變化不同步，部分患者雖病情有所緩解但C3、C4 水平仍未恢復(fù)［10］。LN 是SLE 常見的重要臟器受累表現(xiàn)。研究顯示，血清低C3 水平而非低C4 水平是LN 復(fù)發(fā)的標(biāo)志［11］。本研究顯示，多器官損傷組患者的C3 水平低于單純SLE 組患者。CRP 是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。在感染過程中，CRP 能針對(duì)侵入細(xì)胞發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用和吞噬作用，并參與炎癥反應(yīng)［12］。本研究顯示，單純SLE 組、單器官損傷組及多器官損傷組的血清CRP 水平在組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能與SLE 疾病活動(dòng)期伴隨IC 的清除，血漿CRP 清除加快有關(guān)。IL-25 是一種Th2 因子，通過異二聚體受體（IL-25R）發(fā)出信號(hào)。它通過信號(hào)級(jí)聯(lián)、上皮和活化的T 淋巴細(xì)胞的成分參與促進(jìn)2型炎癥。Selvaraja 等［13］研究顯示，IL-25 在SLE 患者中升高，高水平的IL-25 與SLE 疾病活動(dòng)相關(guān)，但本研究顯示3 組SLE 患者血清IL-25 水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故IL-25 在SLE 中的作用還有待進(jìn)一步研究探討。本研究顯示，SLE 患者的C3 水平與C4、CH50 水平呈正相關(guān)，而與IL-25 呈負(fù)相關(guān)，結(jié)果顯示SLE 患者體內(nèi)補(bǔ)體水平和炎癥反應(yīng)有一定關(guān)系。

抗dsDNA 抗體參與腎臟、皮膚和中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）等多個(gè)終末器官的IC 形成和炎癥損傷過程［14］。本研究顯示，3 組SLE 患者的抗dsDNA抗體陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中多器官損傷組的抗dsDNA 抗體陽(yáng)性率高于單純SLE 組。

綜上所述，血清C3 水平下降和抗dsDNA 抗體陽(yáng)性提示SLE 患者可能出現(xiàn)多器官損傷，血清C3 水平和抗dsDNA 抗體檢測(cè)對(duì)SLE 患者診療方案的制定和預(yù)后評(píng)估有積極意義。