影響農(nóng)殘快檢儀測定結(jié)果的因素

劉艷春，舒淑芬，項飛兵，陳文煜，肖 妙，崔晨燕

（黃岡市公共檢驗檢測中心，湖北黃岡 438000）

蔬菜中農(nóng)藥殘留（以下簡稱“農(nóng)殘”）超標(biāo)，會嚴(yán)重影響消費(fèi)者安全與健康。為應(yīng)對該類產(chǎn)品保質(zhì)期短、流動性快的特殊性，在短時間內(nèi)完成從樣品制備到檢測結(jié)果出具整個過程的快檢是非常必要的。快檢設(shè)備可有效避免大型儀器對場地、人員等的高要求，實現(xiàn)在實驗室外對新鮮蔬菜等初級農(nóng)產(chǎn)品的快速檢測。有機(jī)磷及氨基甲酸酯類殺蟲劑使用廣泛，占?xì)⑾x劑用量的70%以上[1]，是蔬菜中殘留的主要農(nóng)藥種類，也是目前農(nóng)藥殘留檢測的重點(diǎn)。此外，對于該類物質(zhì)的檢測已有相關(guān)國標(biāo)方法[2]，因此對這兩類農(nóng)殘的快速檢測方法進(jìn)行研究具有非常重要的意義。

常見的農(nóng)殘快檢方法有酶抑制法、免疫分析法、生物傳感器法等多種方法[3]，每種方法具有不同的特點(diǎn)，適用于不同的檢測環(huán)境。且已開發(fā)出速測卡法、快速測定儀、膠體金法以及生物傳感器[4-6]等多種類型的產(chǎn)品，農(nóng)殘快速檢測儀以其快速、靈敏便捷、低成本等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于商超市場、蔬菜基地等的產(chǎn)品質(zhì)量檢驗工作中，成為果蔬類農(nóng)藥殘留初篩的重要工具[2]，通過初篩、定性分析，最終獲得農(nóng)殘初步結(jié)果。本文介紹的是采用乙酰膽堿酯酶抑制方法為原理的農(nóng)殘快速檢測儀在檢測過程中的影響因素，旨在通過對影響檢測結(jié)果的因素進(jìn)行考察，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，從而降低檢測風(fēng)險，為其推廣應(yīng)用提供技術(shù)支持。

1 工作原理

農(nóng)殘快速檢測儀的工作原理是比色法[7]，利用農(nóng)藥靶標(biāo)酶活性受抑制的程度，通過測定特定波長處吸光度隨時間的變化值，計算出抑制率，從而對有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥進(jìn)行定性判定。

2 檢測前的質(zhì)量控制

2.1 設(shè)備與試劑

設(shè)備管理人員應(yīng)做好儀器設(shè)備定期檢查檢修工作，做好量具的定期檢定工作，確保儀器設(shè)備能滿足檢測需求。

試劑管理人員應(yīng)做好試劑驗收及管理工作，按要求合理存放試劑。配制的酶、顯色劑、底物應(yīng)于4 ℃冰箱中儲存；緩沖溶液應(yīng)以蒸餾水或去離子水配備，配好后于4 ℃冰箱中儲存。同批次樣品的檢測中，為減少數(shù)據(jù)的誤差，應(yīng)選用同一批次的試劑。此外，還應(yīng)定期處置過期試劑。

2.2 樣品

抽樣人員應(yīng)按照農(nóng)業(yè)部相關(guān)要求[8]，按操作規(guī)程抽取有代表性樣品，抽樣器具、包裝材料要干凈獨(dú)立，杜絕污染，標(biāo)簽信息要完善，所抽樣品應(yīng)及時送檢避免變質(zhì)、受損或污染；他人送檢樣品，抽樣人員應(yīng)做好收樣工作，分別包裝登記，及時送檢。

2.3 人員

抽樣人員、檢測人員應(yīng)具有一定水平的知識儲備和業(yè)務(wù)能力，經(jīng)培訓(xùn)后，持考核通過證上崗。抽樣人員要保證所抽樣品能夠反映所抽批次真實情況；檢測人員應(yīng)能熟練理解測試原理，能準(zhǔn)確使用快檢儀器，能及時發(fā)現(xiàn)異常數(shù)據(jù)并處理常見故障，能對所檢測數(shù)據(jù)負(fù)責(zé)。

3 檢測中的質(zhì)量控制

3.1 樣品前處理

將待檢樣品剪成1 cm2的碎片，選取1 g樣品，加提取液5 mL，振蕩萃取2 min后靜置，濾液即為樣品提取液。

3.1.1 取樣

取樣不可過碎，以免色素過多干擾；對汁水過多的番茄等樣品，要拭去多余汁液，避免提取液混濁，干擾透光。

3.1.2 萃取

用5 mL提取液提取，時長以2 min為宜，該條件下既能充分提取又能避免色素漫出。有研究表明，直接浸提法對農(nóng)殘的提取率不高，且不能利用相似相溶原理采用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，因有機(jī)溶劑會使酶失活，而去除有機(jī)溶劑的大型設(shè)備及煩瑣過程將使快檢失去快這一重要特點(diǎn)[9]。姜露等[9]發(fā)現(xiàn)通過超聲萃取可以有效提高農(nóng)藥提取效率；對顏色較深的提取液經(jīng)有機(jī)濾漠過濾后，可以在保證較好的回收率的前提下，排除有色物質(zhì)的干擾。蘇明偉等[10]通過條件優(yōu)化，首次實現(xiàn)將亞臨界水萃取技術(shù)用于果蔬中的農(nóng)藥殘留樣品的預(yù)處理，并得到了耗時短、提取率高的亞臨界水萃取的最優(yōu)條件。也有研究表明，對易產(chǎn)生假陽性的含硫化合物的蔬菜可采取整株蔬菜浸提法，對葉菜類含色素較高的蔬菜采用莖處表皮也能減少干擾[11-12]。

3.2 樣品檢測

3.2.1 酶

酶是一種高度專一，被廣泛應(yīng)用的強(qiáng)催化劑。酶的來源主要有兩種，即動物或植物。有研究表明來源于動物或植物的酶作用相同，其準(zhǔn)確度和精密度相近[13]。酶活性及對農(nóng)藥的敏感度會直接影響檢測的準(zhǔn)確性及可信度，因此對其改良優(yōu)化一直是研究熱點(diǎn)。因此，在實際工作中，同批次檢測中酶應(yīng)保證其同一性，選用同一廠家同一批次的，且合理保存以保持活性，減少其對結(jié)果的影響。購置的酶于4 ℃冰箱中儲存時，處于休眠狀態(tài)，使用時，應(yīng)取出后放置至室溫，蘇醒活性。例如，空白試樣的ΔA＜0.3，則活性已不能滿足實驗要求，不可再用。

3.2.2 pH值

pH值會影響酶活力。有研究表明不同膽堿酯酶具有最佳活力的pH值略有不同[14]。也有研究顯示，適宜的pH值范圍可以減少某些特殊種類樣品出現(xiàn)假陽性。有些辛辣類的蔬菜，如蔥、大蒜、韭菜等，因其切口會產(chǎn)生硫化物，與有機(jī)磷和有機(jī)氯類農(nóng)藥性質(zhì)相似，從而產(chǎn)生假陽性[15]，嚴(yán)重影響檢測結(jié)果。加熱理論上可以去除硫化物，從而避免假陽性，但同時也會不可避免的造成農(nóng)藥的分解[16]。王文等[1]研究發(fā)現(xiàn)，通過改進(jìn)檢測條件（pH值），可以減小檢測中含硫物質(zhì)對乙酰膽堿酯酶的抑制作用，同時還能保證有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的正常檢測，為后續(xù)研究開辟了一種新的研究思路。

3.2.3 溫度

提取溫度會影響提取效率及酶的活性，溫度過高，酶失活，會降低抑制反應(yīng)；在溫度不足37 ℃的情況下，酶反應(yīng)的速度會降低；反應(yīng)溫度為37 ℃時測定結(jié)果較好[17]。因此，檢測中應(yīng)配備恒溫水浴鍋，保持溫度恒定，使試樣在恒溫水浴鍋中的反應(yīng)結(jié)果的重現(xiàn)性較好[18]。蘇明偉等[10]研究獲得了抑制率對溫度的校正公式，真正實現(xiàn)了野外檢測。通過溫度較正，實現(xiàn)了在無恒溫水浴的條件下，將現(xiàn)場溫度下測得的抑制率校正到37 ℃的抑制率。

4 檢測后的質(zhì)量控制

2022年新修訂的《中華人民共和國農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全法》中，第五十條規(guī)定，經(jīng)相關(guān)部門認(rèn)定的快速檢測方法可以作為行政處罰的證據(jù)。但從業(yè)人員須知由于快檢儀檢測中大量假陽性的存在，因此快檢結(jié)論通常只作定性結(jié)論，不可輕易作為處罰依據(jù)。對易出現(xiàn)假陽性的品類，應(yīng)謹(jǐn)慎對待。必要時，應(yīng)將前述品類樣品進(jìn)行定量檢測，測得農(nóng)藥品種和含量，再作出最終定斷。

5 結(jié)語

農(nóng)殘快檢儀可及時篩查不合格食用農(nóng)產(chǎn)品，避免不合格食用農(nóng)產(chǎn)品流入市場，對加快推進(jìn)食用農(nóng)產(chǎn)品集中交易市場快檢室建設(shè)顯得尤為重要。例如，可形成安全預(yù)警前移，為重大活動提供食品保障；價廉快速，有利于大規(guī)模推廣應(yīng)用，對違規(guī)使用農(nóng)藥形成震懾。相關(guān)從業(yè)者應(yīng)深刻學(xué)習(xí)研究農(nóng)殘快檢的相關(guān)知識，做好關(guān)鍵點(diǎn)的控制，確保檢測數(shù)據(jù)的真實可靠。相關(guān)農(nóng)業(yè)部門應(yīng)做好農(nóng)技、農(nóng)藥宣傳工作，鼓勵綠色種植，少用或不用農(nóng)藥，綠色種植，從根本上減少農(nóng)藥殘留。