食源性疾病諾如病毒檢測情況分析

董桂花，王愛新，焦憲軍

濟南市章丘區疾病預防控制中心微生物檢驗科，山東濟南 250200

食源性疾病指食品中致病因素進入人體引起的感染性、中毒性等疾病，包括食物中毒[1]。 食源性疾病常見的有食物中毒、腸道傳染病、人畜共患傳染病、寄生蟲病以及化學性有毒有害物質所引起的疾病。食源性疾患的發病率居各類疾病總發病率前列，是當前世界上最突出的公共衛生問題。 諾如病毒臨床上又叫作諾瓦克樣病毒， 是引發非細菌性急性胃腸炎最為常見的病毒之一，歸于杯狀病毒科， 具有高度的傳染性和快速傳播的能力，10~100 個病毒即可引發感染，是全球急性胃腸炎散發病例和暴發疫情的主要致病源，該病毒的傳染源多為患者、病毒攜帶者以及隱形感染者，傳播途徑包括食物、水以及人類間的密切接觸等，人群普遍易感，多發于企業、學校及農村等，對公眾健康的危害巨大。出現聚集性發病需要早發現，早調查，早控制，早處置，控制大規模感染的發生。 2021 年1—12 月，在食源性疾病事件中，共有7 起事件檢出諾如病毒， 通過相關人員的早處置，及時進行控制，避免了大規模感染的發生。鑒于此，文章對檢測情況進行了詳細的分析和探討，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

在食源性疾病事件中， 共有12 起事件經食品安全風險監測科流調人員調查懷疑諾如病毒感染，對相關人員、患者、有癥狀者進行肛拭子采樣，通過實時熒光定量PCR 檢測諾如病毒。 共有7 起事件檢出諾如病毒，共采集肛拭子樣品86 份，檢出諾如病毒陽性樣品52 份。 食源性疾病主動監測急性胃腸炎病例的定義：主訴由食品或是懷疑由食品引發的，以腹瀉癥狀為主的，每天排便在3 次或是超出3 次的，且糞便性狀出現異常（即出現稀便、黏液便或是膿血便等）的就診病例。

采樣原則：①各個哨點醫院需要選取能夠符合于病例定義的就診病例，對其各類信息、樣本等進行采集，同時，還需要充分考慮到腹瀉病例的高發季節、每周樣本的均勻分布等相關因素，分配好樣本量：在11～3 月份，每月不可以低于20 份， 在其余月份， 每月不可以低于10 份。 ②對于非兒童醫院，需要著重在腹瀉病門診、急診科、消化內科等相關的科室選取病例，盡可能地減少兒科的采樣總數。 ③在出現下列情況時，需要優先選取且病例總數不會被任務量所限制，即：重癥患者；多人同時就診；患者之間具有密切聯系（即親朋、同學等）；具有共同的暴露史。

信息采集：對于個案調查的內容，其主要包括病例的各項信息（即姓名、年齡、家庭地址、發病時間等）、臨床癥狀及表現（即嘔吐、發熱等）、流行病學史（即食物暴露情況）等。患者及（或）家屬均知曉研究內容，且自愿參與；本研究于本院倫理委員會授權后實施。

1.2 方法

實時熒光PCR 法。 對諾如病毒（GⅠ、GⅡ群）高度保守區域設計特異引物和探針，通過分別以FAM、HEX標記的諾如病毒GⅠ、GⅡ探針，在同一反應體系中同時檢測諾如病毒GⅠ、GⅡ群。 探針為包含5’端標記發光基團和3’端標記淬滅基團的寡核苷酸序列，若探針完整，發光基團所發出的熒光信號被淬滅基團吸收，檢測不到信號。 在PCR 擴增進程中，與模板特異性結合的探針會被Taq 酶切斷，發光基團與淬滅基團分離，產生熒光信號。 利用擴增儀對PCR 過程中相應通道的信號強度進行實時監測和輸出，實現檢測結果的定性分析。

1.3 儀器與試劑

1.3.1 儀器 羅氏核酸提取儀，羅氏核酸擴增儀。

1.3.2 試劑 生科原 諾如病毒（GⅠ、GⅡ群）雙重核酸檢測試劑盒（熒光PCR 法），有效期內使用。

1.4 質量控制

1.4.1 流行病學的質量控制 ①需要更為嚴格地統一病例的診斷標準，避免引發選擇性偏倚；②需要更為嚴格地培訓、教育調查人員，要求調查人員需要參照統一的標準與方法詢問調查對象； ③借助EPI info 與Excel 2020 軟件，給疫情構建數據庫，對采集到的各類資料進行檢查、核實，以保障其完整性、準確性。

1.4.2 實驗室的質量控制 ①實驗室檢測方法需要更為規范、標準，統一檢測的方式與試劑，防止相關信息出現偏倚；②注意防止實驗室發生交叉污染、實驗標本出現反復凍融；③應用手工方法進行核酸提取，每次進行PCR實驗均需要設置好陰性對照、陽性對照、提取對照。

2 結果

7 起食源性疾病事件中諾如病毒感染檢出情況，按照事件采集時間先后簡述。 第1 起，采集、檢測時間是2021 年1 月19 日，采集發病人員：部隊服役人員，共采集肛拭子樣品27 份，檢出諾如病毒14 份，檢出基因群均是GⅡ群。 第2 起，采集、檢測時間是2021 年3 月25日，采集發病人員：幼兒園小朋友，共采集肛拭子樣品8份，檢出諾如病毒7 份，檢出基因群均是GⅡ群。 第3起，采集、檢測時間是2021 年5 月11 日，采集發病人員：學校高中生，共采集肛拭子樣品18 份，檢出諾如病毒11 份， 檢出基因群中8 份GⅡ群，3 份GⅠ群。 第4起，采集、檢測時間是2021 年5 月26 日，采集發病人員：學校大學生，共采集肛拭子樣品14 份，檢出諾如病毒12 份，檢出基因群均是GⅡ群。第5 起，采集、檢測時間是2021 年6 月9 日，采集發病人員：幼兒園小朋友，共采集肛拭子樣品7 份，檢測諾如病毒3 份，檢出基因群均是GⅡ群。 第6 起，采集、檢測時間是2021 年6 月27 日，采集發病人員：工地工人，共采集肛拭子樣品3份，檢出諾如病毒2 份，檢出基因群均是GⅡ群。 第7起，采集、檢測時間是2021 年12 月25，采集發病人員：幼兒園小朋友，共采集肛拭子樣品9 份，檢出諾如病毒3 份，檢出基因群均是GⅡ群。7 起事件共采集肛拭子樣品86 份，有52 份樣品檢出諾如病毒。

諾如病毒感染多見于幼兒園、學校、部隊、工地等集體單位或場所，聚集性或暴發性發病，發病人數較多，檢出率較高，需要早發現、早報告、早診斷、早處置，以控制疫情的發展。 從發病時間來看，諾如病毒感染多發生在上半年。發生食源性疾病事件，需要根據發病時間、癥狀及流行病學調查情況， 及時判斷是否為諾如病毒感染，以及早處置疫情。 從檢出基因群看，該年度共檢出諾如病毒感染樣品52 份，有49 份基因群是GⅡ群，有3 份基因群是GⅠ群。

3 討論

諾如病毒又稱諾瓦克病毒，是人類杯狀病毒科中諾如病毒屬的一種病毒，是一組形態相似、抗原性略有不同的病毒顆粒。諾如病毒變異快、環境抵抗力強、感染劑量低，感染后潛伏期短、排毒時間長、傳播途徑多樣、全人群易感，具有高度傳染性和快速傳播能力[2]。諾如病毒的潛伏期一般在24～48 h，其中最短的潛伏期為12 h，而最長的潛伏時間為72 h。 這種疾病的感染比較突然，臨床癥狀主要表現為惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等，對于患兒而言，其癥狀主要為嘔吐，而成人患者的癥狀則主要為腹瀉，一般患者在24 h 內的腹瀉次數可高達8 次。 糞便一般為稀水便與水樣便，并不存在黏液膿血[3]。 而腹瀉、嘔吐癥狀一般可以持續12～24 h，疾病的病程在1～7 d。諾如病毒根據基因特征被分為6 個基因群，GⅠ、GⅡ群是引起人類急性胃腸炎的兩個主要基因群。諾如病毒感染引發的公共衛生問題已越來越受到國際科學界的關注[4-5]。 2014 年發表的一項系統綜述和Meta 分析，納入了48 個國家報道的175 篇文獻， 結果發現1/5 的急性胃腸炎病例是由諾如病毒感染引起[6-7]。

諾如病毒感染多聚集性、暴發性發病。聚集性疫情：3 d 內，同一學校、托幼機構、醫療機構、工廠、建筑工地、游輪、社區等集體單位或場所，發生5 例及以上有流行病學關聯的諾如病毒感染病例，其中至少2 例是實驗室診斷病例。 暴發疫情：7 d 內，同一學校、托幼機構、醫療機構、工廠、建筑工地、游輪、社區等集體單位或場所，發生20 例及以上有流行病學關聯的諾如病毒感染病例，其中至少2 例是實驗室診斷病例。實驗室確診的諾如病毒感染暴發事件，符合《國家突發公共衛生事件相關信息報告管理工作規范（試行）報告》標準的諾如病毒感染暴發，屬地疾病預防控制中心應通過突發公共衛生事件管理信息系統進行相關信息的報告[8-9]。

諾如病毒感染的傳播途徑多樣， 有經食物傳播、經污染水源傳播，經人傳人傳播。 食源性傳播是通過食用被諾如病毒污染的食物進行傳播，污染環節可出現在感染諾如病毒的餐飲從業人員備餐和供餐中，也可出現在食物生產、運輸、分發過程中[10-11]。 經水傳播可以經市政供水、井水、桶裝水等飲用水被諾如病毒污染所致。經人傳人可通過糞口途徑傳播、間接接觸被排泄物污染的環境傳播。 一起暴發事件可有多種傳播途徑感染[12-13]。

諾如病毒感染的預防控制措施主要是采用非藥物性預防，主要是控制傳染源，切斷傳播途徑，對易感者進行宣傳、健康教育[14]。 控制傳染源：對諾如病毒感染人員進行隔離，規范管理是阻斷傳播和減少環境污染的有效手段[15-16]。 從事食品操作崗位病例及隱形感染者需要連續2 d 糞便或肛拭子諾如病毒核酸陰性后方可上崗。 切斷傳播途徑：諾如病毒感染人員進行隔離；對患者嘔吐物、排泄物等污染物污染的環境物體表面、生活用品、食品加工工具、生活飲用水等進行消毒；污染的水源，應增加投氯量等方式進行消毒，經衛生學評價合格后方可啟用相關水源[17-18]。 對易感者進行健康宣傳：疫情流行季節，政府及衛生、教育、宣傳等部門要高度重視，密切合作[19-20]。利用廣播、電視、報紙、網絡、宣傳單等多種方式，開展諾如病毒防控知識宣傳，人人提高防控意識，養成勤洗手、不喝生水、生熟食物分開、避免交叉污染等健康生活習慣。

綜上所述，在食源性疾病暴發事件中，人員多是聚集發病，排除食物中毒后，癥狀、體征符合諾如病毒感染的患者，需要盡快采集相關人員的肛拭子樣品，并對其進行諾如病毒檢測，以早發現，早治療，早控制，早處置，控制疫情的發展。本次對于腹瀉病例糞便標本的采集只是依據食源性疾病的主動監測網絡，樣本代表性具有一定的不足，今后需要持續擴大樣本量，由更多的角度對諾如病毒感染進行分析、研究。