高危型人乳頭瘤病毒感染宮頸癌組織中N-myc下游調(diào)節(jié)基因1蛋白表達(dá)及其臨床意義分析

張?jiān)浦?，王宇華，王梅，張愛(ài)，葉文鳳，陶萍萍

上海市浦東新區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，上海 201299

宮頸癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤疾病，嚴(yán)重威脅女性健康及生命安全。已有研究發(fā)現(xiàn)，單一高危型人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染是宮頸癌患者的主要感染類(lèi)型，且與病理組織類(lèi)型和分化程度有關(guān)[1]。不少病情相似的宮頸癌患者根治術(shù)后生存結(jié)局有較大的差異，推測(cè)存在某些影響宮頸癌患者預(yù)后的重要因素。N-myc下游調(diào)節(jié)基因1（N-myc downstream regulated 1，NDRG1）是近年發(fā)現(xiàn)的一種新基因，定位于人染色體9q24.3，廣泛分布于人體多種組織中，已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)在卵巢癌[2]、子宮內(nèi)膜癌[3]等女性生殖系統(tǒng)腫瘤組織中存在異常表達(dá)并參與疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，推測(cè)其對(duì)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后等方面也存在一定影響，但目前相關(guān)研究涉及較少。本研究探討高危型HPV感染宮頸癌組織中NDRG1蛋白表達(dá)及其與患者臨床特征和預(yù)后的關(guān)系，為預(yù)后預(yù)測(cè)、治療方案優(yōu)化等提供更多可靠的參考指標(biāo)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年1月至2017年1月在上海市浦東新區(qū)人民醫(yī)院接受治療的高危型HPV感染宮頸癌患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)中病理明確為原發(fā)性宮頸癌；②符合手術(shù)指征，完成術(shù)后放化療；③全程配合治療及隨訪；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他原發(fā)惡性腫瘤；②合并基礎(chǔ)性嚴(yán)重心肝腎功能不全、自身免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾病；③既往心腦血管病史、精神疾?。虎苋焉锲诨蛘卟溉槠谂?；⑤臨床標(biāo)本污染。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入50例高危型HPV感染宮頸癌患者作為宮頸癌組。另選取同期在上海市浦東新區(qū)人民醫(yī)院進(jìn)行治療的50例高危型HPV感染宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）患者作為CIN組，所有CIN患者均行宮頸錐切術(shù)并經(jīng)病理證實(shí)且臨床資料完整。兩組患者的年齡、病程、體重指數(shù)、孕次及產(chǎn)次比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表1），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)，所有患者均知情同意并簽署知情同意書(shū)。

表1 兩組患者的臨床特征（±s）

表1 兩組患者的臨床特征（±s）

臨床特征年齡（歲）病程（年）體重指數(shù)（kg/m2）孕次產(chǎn)次宮頸癌組（n=50）47.82±7.17 5.43±1.62 21.56±1.68 1.65±0.35 1.42±0.28 CIN組（n=50）46.21±5.64 5.68±1.43 21.98±1.95 1.59±0.39 1.34±0.27

1.2 免疫組化法檢測(cè)NDRG1蛋白表達(dá)情況

宮頸癌組織、CIN組織石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水，熱抗原修復(fù)，3%過(guò)氧化氫孵育10 min，然后加入鼠抗人NDRG1單克隆抗體（1∶400稀釋?zhuān)?℃恒溫過(guò)夜，滴加過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗（1∶2000稀釋?zhuān)跤?0 min后加入二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色劑顯色，蘇木素復(fù)染1 min后梯度乙醇分化30 s，氨水返藍(lán)1 min，乙醇脫水，中性樹(shù)膠封片。

每個(gè)切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野觀察NDRG1陽(yáng)性染色情況，NDRG1定位于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核，呈棕黃色、淡黃色、棕褐色染色，依據(jù)染色程度、陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)估陽(yáng)性情況。染色程度：0分（無(wú)著色）、1分（淡黃色）、2分（棕黃色）、3分（棕褐色）；陽(yáng)性細(xì)胞百分比：0分（無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞）、1分（陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤10%）、2分（10%＜陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤50%）、3分（50%＜陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤80%）、4分（陽(yáng)性細(xì)胞百分比＞80%）。染色程度評(píng)分×陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分＞4分為陽(yáng)性。

1.3 術(shù)后隨訪及預(yù)后評(píng)估

術(shù)后對(duì)所有宮頸癌患者進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪，隨訪形式包括門(mén)診復(fù)診及電話(huà)，終點(diǎn)事件為患者全因死亡。以術(shù)后第1天作為隨訪起點(diǎn)，2021年1月1日或者該日期前患者終點(diǎn)事件出現(xiàn)作為隨訪終點(diǎn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線(xiàn)，生存情況比較采用Log-rank檢驗(yàn)；多因素分析采用Cox回歸分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NDRG1蛋白表達(dá)情況的比較

宮頸癌組患者宮頸癌組織中NDRG1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為70.0%（35/50），高于CIN組患者CIN組織中的48.0%（24/50），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.002，P=0.025）。

2.2 不同NDRG1蛋白表達(dá)情況高危型HPV感染宮頸癌患者臨床特征的比較

NDRG1蛋白陽(yáng)性表達(dá)與NDRG1蛋白陰性表達(dá)高危型HPV感染宮頸癌患者年齡、腫瘤最大直徑、組織學(xué)類(lèi)型、分化程度、肌層浸潤(rùn)深度比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；NDRG1蛋白陽(yáng)性表達(dá)與NDRG1蛋白陰性表達(dá)高危型HPV感染宮頸癌患者國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期、宮旁侵犯情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

2.3 不同NDRG1蛋白表達(dá)情況高危型HPV感染宮頸癌患者預(yù)后的比較

Kaplan-Meier生存曲線(xiàn)顯示，NDRG1蛋白陰性表達(dá)高危型HPV感染宮頸癌患者生存情況優(yōu)于NDRG1蛋白陽(yáng)性表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（圖1）

圖1 NDRG1蛋白陰性表達(dá)（n =15）與NDRG1蛋白陽(yáng)性表達(dá)（n =35）高危型HPV感染宮頸癌患者的生存曲線(xiàn)

2.4 高危型HPV感染宮頸癌患者預(yù)后影響因素分析

將高危型HPV感染宮頸癌患者預(yù)后作為因變量（生存=0，死亡=1），將單因素分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)（包括FIGO分期、宮旁侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、NDRG1蛋白表達(dá)）納入多因素Cox回歸分析，結(jié)果顯示，F(xiàn)IGO分期為Ⅲ期、合并宮旁侵犯、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、NDRG1蛋白陽(yáng)性表達(dá)均是高危型HPV感染宮頸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。（表 2）

表2 高危型HPV感染宮頸癌患者預(yù)后影響因素的單因素及多因素分析

表2 不同NDRG1蛋白表達(dá)情況高危型HPV感染宮頸癌患者臨床特征的比較

3 討論

NDRG1與細(xì)胞增殖及分化、腫瘤發(fā)生均密切相關(guān)，且已在多種常見(jiàn)惡性腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)存在NDRG1表達(dá)改變，提出NDRG1可能成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)[4-6]。最新動(dòng)物研究發(fā)現(xiàn)，放療、化療及放化療可引起小鼠宮頸癌組織中NDRG1表達(dá)量降低[7]，推測(cè)治療前宮頸癌組織中NDRG1表達(dá)情況可能與病情等相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)高危型HPV感染宮頸癌患者的宮頸癌組織中NDRG1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率上升，這與該分子在結(jié)直腸癌[8]、膽囊癌[9]等惡性腫瘤組織中的表達(dá)變化趨勢(shì)吻合。

后續(xù)在高危型HPV感染宮頸癌組織中NDRG1蛋白表達(dá)情況與臨床特征分析中發(fā)現(xiàn)，NDRG1蛋白陽(yáng)性表達(dá)與NDRG1蛋白陰性表達(dá)高危型HPV感染宮頸癌患者FIGO分期、宮旁侵犯情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。FIGO分期、宮旁侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均是臨床公認(rèn)的影響惡性腫瘤病情及進(jìn)展的臨床特征，上述結(jié)果提示高危型HPV感染宮頸癌患者NDRG1蛋白表達(dá)情況可能在提示疾病嚴(yán)重程度方面具有重要意義。分化程度在惡性腫瘤病情中的影響也較為重要，但是本研究中NDRG1蛋白陽(yáng)性表達(dá)與NDRG1蛋白陰性表達(dá)高危型HPV感染宮頸癌患者分化程度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與納入的高危型HPV感染宮頸癌患者病例數(shù)較少、兩組間低分化例數(shù)差異未得到有效呈現(xiàn)有關(guān)，后續(xù)可擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步明確其影響。

高危型HPV感染宮頸癌患者的術(shù)后5年生存率仍不理想[10-12]，鑒于NDRG1蛋白表達(dá)情況與臨床特征的關(guān)系，本研究分析不同NDRG1蛋白表達(dá)情況的高危型HPV感染宮頸癌患者術(shù)后生存情況的差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NDRG1蛋白陰性表達(dá)患者的生存情況優(yōu)于NDRG1蛋白陽(yáng)性表達(dá)患者，提示NDRG1蛋白陽(yáng)性表達(dá)可能導(dǎo)致高危型HPV感染宮頸癌患者術(shù)后預(yù)后不佳。進(jìn)一步多因素Cox回歸分析也證實(shí)，NDRG1蛋白陽(yáng)性表達(dá)是高危型HPV感染宮頸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。NDRG1蛋白陽(yáng)性表達(dá)通過(guò)何種途徑左右高危型HPV感染宮頸癌患者的術(shù)后生存結(jié)局尚不明確。在其他疾病中對(duì)NDRG1的作用途徑研究有部分開(kāi)展，如林簡(jiǎn)等[13]的研究指出，NDRG1通過(guò)調(diào)控磷脂酰肌醇-3-羥激酶（phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase，PI3K）/蛋白激酶 B（protein kinase B，PKB，又稱(chēng)AKT）信號(hào)通路對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞凋亡產(chǎn)生影響。李婷和李赟[14]發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)NDRG1通過(guò)調(diào)控WNT/β-catenin信號(hào)通路促進(jìn)滋養(yǎng)層細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化。在高危型HPV感染宮頸癌患者中，NDRG1高表達(dá)可能也通過(guò)相似途徑影響腫瘤細(xì)胞的惡性行為并最終對(duì)患者術(shù)后生存結(jié)局產(chǎn)生影響，關(guān)于具體途徑的探索有待后續(xù)基礎(chǔ)及臨床研究深入開(kāi)展明確。

綜上所述，高危型HPV感染宮頸癌患者宮頸癌組織中NDRG1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率較高，與患者臨床特征、預(yù)后等均密切相關(guān)，可能是高危型HPV感染宮頸癌發(fā)病、進(jìn)展的重要分子之一，也對(duì)后續(xù)同類(lèi)疾病的不良預(yù)后預(yù)測(cè)及治療方案制訂等提供參考意見(jiàn)，具有一定臨床價(jià)值。