乳腺癌組織中相關(guān)蛋白表達(dá)情況及其與臨床病理特征 和預(yù)后的關(guān)系

倪 建，張?jiān)葡觯瑒?輝，鮑書友

（徐州市中心醫(yī)院病理科，江蘇 徐州 221009）

乳腺癌是一種危害女性健康的惡性腫瘤，是由于乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞在各種致癌因素的作用下喪失正常特性而異常增生，最終導(dǎo)致超過機(jī)體自我修復(fù)的限度而產(chǎn)生的癌變[1]。臨床上針對(duì)乳腺癌的治療主要采取手術(shù)、放射、藥物等方法，但腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)較大，腫瘤新生血管可為腫瘤組織供氧供能，并為癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供通道，而新生血管的生成與葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1（GLUT-1）、人類表皮生長因子受體2（HER-2）等的基因轉(zhuǎn)錄有關(guān)，因此需進(jìn)一步對(duì)相關(guān)蛋白的表達(dá)進(jìn)行研究，為乳腺癌的診斷和預(yù)后提供參考[2]。GLUT-1是糖類轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)，主要為乳腺腫瘤細(xì)胞提供葡萄糖，其異常高表達(dá)與乳腺腫瘤嚴(yán)重程度密切相關(guān)[3]；磷酸酶張力蛋白同源物（PTEN）是抑癌基因，PTEN陽性蛋白高表達(dá)預(yù)示乳腺癌病情較輕、預(yù)后良好，其水平高低在乳腺癌治療與復(fù)發(fā)過程中有重要參考價(jià)值[4]；人類表皮生長因子受體2（HER-2）異常活化后會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖與癌變，可提示乳腺癌的嚴(yán)重程度[5]；增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）僅在增殖期細(xì)胞中合成、表達(dá)，是乳腺腫瘤細(xì)胞增殖活性的標(biāo)記物，以上相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)對(duì)乳腺癌的臨床診斷、發(fā)展及預(yù)后均有重要作用[6]。本研究旨在分析乳腺癌組織中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析徐州市中心醫(yī)院2012年1月至2017年1月收治的80例乳腺癌患者的臨床資料，患者年齡33～71歲，平均（55.39±2.46）歲；腫瘤直徑1～5 cm，平均（1.56±0.34） cm；臨床分期[7]：Ⅰ ～ Ⅱ期42例，Ⅲ ～ Ⅳ期38例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例，未轉(zhuǎn)移48例。診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照《中國抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范（2011版）》[8]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)且經(jīng)病理組織活檢確診者；未接受放化療等抗癌治療者；行乳腺癌根治手術(shù)者；臨床資料完整者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：有嚴(yán)重免疫缺陷者；有其他惡性腫瘤者；重要臟器功能衰竭者等。本研究經(jīng)院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 研究方法取所有患者經(jīng)過手術(shù)切除的乳腺癌組織和癌旁正常組織（距離腫瘤＞5 cm），使用10%中性福爾馬林固定后，使用石蠟包埋，并制成4 μm厚石蠟組織切片，應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)標(biāo)本中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表達(dá)情況。具體操作如下：切片經(jīng)烤片、脫蠟、水化后，檸檬酸鹽緩沖液抗原修復(fù)，按照SP試劑盒進(jìn)行固定、血清封閉、孵育、洗滌及二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色等操作，將磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照，雙盲法觀察切片。陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：高倍鏡下任意觀察5個(gè)視野，每個(gè)視野細(xì)胞需不小于200個(gè)，對(duì)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞率進(jìn)行評(píng)價(jià)。染色程度按無色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別記為0、1、2、3分；陽性細(xì)胞率按無陽性細(xì)胞、≤25%、26%～50%、51%～75%、＞75%分別記為0、1、2、3、4分，兩項(xiàng)分值相加4～7分則為陽性，0～3分則為 陰性[9]。

1.3 觀察指標(biāo)①比較乳腺癌組織與癌旁正常組織中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白陽性表達(dá)情況。②分析不同臨床病理特征的乳腺癌患者乳腺癌組織中 GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表達(dá)情況。具體包括：年齡、腫瘤直徑、臨床分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移。③分析乳腺癌患者乳腺癌組織中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表達(dá)和預(yù)后的關(guān)系。隨訪5年，根據(jù)隨訪結(jié)果分為生存組（59例）、死亡組（21例），對(duì)比分析生存組與死亡組患者上述蛋白陽性表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以[ 例(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌與癌旁正常組織中GLUT-1、PTEN、HER-2、 PCNA蛋白陽性表達(dá)情況比較與癌旁正常組織相比，乳腺癌組織中GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白陽性表達(dá)率顯著升高，PTEN蛋白陽性表達(dá)率顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

表1 乳腺癌與癌旁正常組織中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白陽性表達(dá)情況比較[ 例(%)]

2.2 不同臨床病理特征的乳腺癌患者乳腺癌組織中GLUT-1、 PTEN、HER-2、PCNA蛋白表達(dá)情況臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者乳腺癌組織中GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白表達(dá)陽性率顯著高于臨床分期為Ⅰ ～ Ⅱ期、淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者，PTEN蛋白表達(dá)陽性率顯著低于臨床分期為Ⅰ ～ Ⅱ期、淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；不同年齡、腫瘤直徑的乳腺癌患者乳腺癌組織中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表達(dá)陽性率經(jīng)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表2。

表2 不同臨床病理特征的乳腺癌患者乳腺癌組織中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表達(dá)情況[ 例(%)]

2.3 乳腺癌患者乳腺癌組織中GLUT-1、PTEN、HER-2、 PCNA蛋白表達(dá)和預(yù)后的關(guān)系死亡組乳腺癌組織中GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白陽性表達(dá)率顯著高于生存組，PTEN蛋白陽性表達(dá)率顯著低于生存組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表3。

表3 乳腺癌患者乳腺癌組織中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表達(dá)和預(yù)后的關(guān)系[ 例(%)]

3 討論

乳腺癌屬于高度異質(zhì)性癌癥，受初潮早、絕經(jīng)晚、精神抑郁等因素的影響，其臨床表現(xiàn)為乳房腫塊、淋巴結(jié)腫大、乳房疼痛等，不同患者的免疫表型、組織形態(tài)、治療效果及預(yù)后均存在較大差異，因此對(duì)相關(guān)基因進(jìn)行檢測(cè)，通過對(duì)靶向基因治療，對(duì)改善患者預(yù)后情況尤為 重要[10]。

GLUT-1是人體細(xì)胞膜上的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，與糖尿病、癌癥等疾病關(guān)系密切，機(jī)體出現(xiàn)乳腺腫瘤時(shí)，體內(nèi)的GLUT-1表達(dá)會(huì)出現(xiàn)異常，腫瘤惡化程度越高，增殖速度越快，則GLUT-1表達(dá)量越高[11]。HER-2是原癌基因，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞惡變，增加癌癥病變程度，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞侵襲能力，對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移起到促進(jìn)作用[12]。PCNA是一種核蛋白，指的是細(xì)胞DNA合成期DNA多聚酶δ的輔助蛋白，其可參與細(xì)胞增殖過程的DNA復(fù)制，反映細(xì)胞的增殖活性，PCNA蛋白陽性表達(dá)率越高表示腫瘤細(xì)胞增殖越活躍，腫瘤惡性程度越高[13]。PTEN是磷酸酶活性抑癌基因，可以對(duì)細(xì)胞周期、細(xì)胞遷移起到調(diào)節(jié)控制作用，從而達(dá)到抑制惡性腫瘤細(xì)胞生長的目的，PTEN蛋白陽性表達(dá)程度與組織惡性病變程度呈負(fù)相關(guān)，研究顯示，乳腺癌組織中PTEN蛋白陽性表達(dá)水平低于正常組織，因此常將其作為乳腺癌檢測(cè)分子標(biāo)記物[14-15]。本研究結(jié)果顯示，與癌旁正常組織相比，乳腺癌組織GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白陽性表達(dá)率顯著升高，PTEN蛋白陽性表達(dá)率顯著降低，表明在乳腺癌組織中GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白呈高表達(dá)狀態(tài)，PTEN蛋白呈低表達(dá)狀態(tài)。

腫瘤內(nèi)部缺氧時(shí)，GLUT-1表達(dá)會(huì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的糖代謝，與腫瘤的增殖速度、臨床分期及低生存率相關(guān)，乳腺癌患者腫瘤細(xì)胞增殖速度遠(yuǎn)超出正常細(xì)胞，會(huì)造成細(xì)胞缺氧，葡萄糖代謝水平加快，GLUT-1表現(xiàn)出異常升高的情況，檢測(cè)GLUT-1表達(dá)水平可對(duì)乳腺癌的預(yù)后進(jìn)行判斷[16]。HER-2蛋白陽性表達(dá)越高，乳腺癌患者腫瘤轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)越大，對(duì)患者預(yù)后造成不利影響[17]；PCNA蛋白陽性表達(dá)和乳腺癌病理分級(jí)呈正相關(guān)，與預(yù)后呈負(fù)相關(guān)[18]； GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白的高表達(dá)使腫瘤細(xì)胞的增殖和生長加快，更有利于腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移，因此在臨床分期越晚或淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者中，其陽性表達(dá)率越高。本研究中，臨床分期為Ⅲ ～ Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者乳腺癌組織GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白表達(dá)陽性率顯著高于臨床分期為Ⅰ ～ Ⅱ期、淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者，PTEN蛋白表達(dá)陽性率顯著低于臨床分期為Ⅰ ～ Ⅱ期、淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者，表明GLUT-1、HER-2、PCNA、PTEN蛋白表達(dá)情況可以作為乳腺癌患者臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)、評(píng)估指標(biāo)。

管潔等[19]對(duì)乳腺癌中GLUT-1、p53蛋白表達(dá)水平的研究中，乳腺癌患者GLUT-1蛋白陽性表達(dá)者術(shù)后1年生存率為70.73%，蛋白表達(dá)陰性者術(shù)后1年生存率為95.65%，陽性者生存率顯著低于陰性者；賈曉鋒等[20]對(duì)乳腺癌中PTEN蛋白表達(dá)的研究中，得出PTEN蛋白陽性表達(dá)組患者5年生存率為78.3%，與陰性表達(dá)組的57.6%比較，生存率顯著升高。本研究中，死亡組乳腺癌組織GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白陽性表達(dá)率顯著高于生存組，PTEN蛋白陽性表達(dá)率顯著低于生存組，進(jìn)一步表明GLUT-1、 HER-2、PCNA、PTEN蛋白陽性表達(dá)情況和乳腺癌患者的生存率有一定的相關(guān)性，能夠一定程度上預(yù)測(cè)乳腺癌患者的預(yù)后情況。

綜上，乳腺癌組織中GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白呈現(xiàn)高表達(dá)，PTEN蛋白呈現(xiàn)低表達(dá)，并與其臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后情況關(guān)系密切，進(jìn)行乳腺癌組織GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表達(dá)的檢測(cè)能夠?yàn)槿橄侔┑脑\斷與預(yù)后評(píng)估提供參考，建議臨床進(jìn)一步研究。