移動實驗室新型冠狀病毒核酸應急檢測的規范探索*

李業華，謝貴明，許桂丹，孫一帆

1.右江民族醫學院附屬玉林市紅十字會醫院檢驗科，廣西玉林 537000；2.廣西壯族自治區貴港市人民醫院檢驗科，廣西貴港 5371002；3.右江民族醫學院直屬附屬醫院檢驗科，廣西百色 533000

新型冠狀病毒(簡稱新冠病毒)感染引發了嚴重的全球性重大公共衛生問題和社會經濟問題[1-2]。奧密克戎具有傳染性強、免疫逃逸特性等特點，是目前新冠病毒變異最大的毒株之一，已在全球150個國家(地區)發生[3-4]。近期，國內感染主要集中在奧密克戎變異毒株[5]。廣西毗鄰越南，全邊境線長達1 020 km,正面臨著境外疫情，國內中風險和高危區域疫情“雙輸入”帶來的嚴峻挑戰。如何快速響應，及時在疫情擴散前24 h內精準進行檢測并有效地封控是一個重大課題。新冠病毒核酸檢測移動實驗室以其可移動、便于運輸、可快速構建等特點與優勢，在特定區域人群的大規模應急核酸篩查中發揮了重要作用[6-8]。本文從大規模核酸檢測篩查的移動實驗室的合理布局、調度以及高效核酸檢測等方面做了規范性探索，旨在為應對突如而至的疫情做好跨部門協調機制研究，移動實驗室綜合布局，快速完成大規模核酸篩查檢測提供科學的理論依據和實踐參考。

1 移動實驗室的投放

區域性新型冠狀病毒疫情突然暴發，各省疫情指揮部根據該區域的人口密度和區域的檢測能力，合理安排支援的移動實驗室和核酸檢測隊伍，如有必要可安排第三方檢測機構參與。移動實驗室需事先與當地疫情指揮部溝通，溝通的內容主要包括移動實驗室移動特性、水電和網絡的具體要求以及支援的車輛數和人數等。

2 移動實驗室場地的選址

以優化區域、合理劃片、科學布點、院感先行為選址的原則。在符合國家和當地的法規文件規定條件下，綜合考慮核酸檢測現場的整體位置要素(如交通便利、現場空曠、風向要素、安全環保、人員流動通道等)，優先選擇空曠的體育中心、廣場或水電通訊便利的地方。提前劃分清潔區(檢測人員的休息、飲食、活動區域等)、半污染區、污染區(標本接收、轉送區、轉運箱消毒區域、標本轉運通道、檢測人員通道、醫療廢棄物轉運通道、醫療廢物暫存點、防護服一脫、二脫等區域)等。按圖1、圖2所示做好各類標識。圖1移動實驗室場地選址的整體布局示意圖，圖2中各移動實驗室局部布局示意圖。

圖1 場地布局示意圖

圖2 局部檢測區域的布局示意圖

3 移動實驗室物資儲備

依據實驗室布置及設備基礎要求制訂物資配置清單，適時制訂周期物資儲備計劃。收到抽調指令任務時，應立即按照移動實驗室物資配置清單(表1)，準備至少2～3 d所需的物資(防護服、提取試劑、擴增試劑、帶濾芯吸頭等)，隨移動實驗室出發。除表1的主要物資清單外，還需準備以下符合國家標準要求的耗材，如8連管/96孔PCR板(配套熒光膜)、三級防護用品、醫用口罩、75%乙醇、含氯消毒液、醫療廢物袋(大、中、小)、記號筆、生活垃圾袋等。將倉儲區建立于移動實驗室的設定區中，對各類物資進行識別，劃分，歸類，制訂并完善耗材的領用流程。專人管理物資庫存和盤點工作，及時更新需求和補充并做好登記。有儲存溫度要求的試劑須儲存在醫用冰箱中，并做好溫度和濕度監測工作，確保試劑儲存達到要求。

表1 移動實驗室主要物資儲備清單

4 核酸檢測團隊組成及崗位設置

核酸檢測隊伍要建立健全的相關組織架構，明確崗位職責。各主要崗位及崗位職責的描述見表2。核酸檢測人員要求具備臨床基因擴增實驗室崗位培訓合格證，或至少獲得新型冠狀病毒核酸檢測上崗證的人員[9-12]。在挑選檢測人員時，應綜合考慮人員年齡(以年輕人為主)、健康狀況、基礎性疾病以及是否能夠聽指揮和服從安排。采用以老促新，崗位新老搭配的原則搭配隊伍。組織結構內部設置聯系QQ群或微信群以保證溝通渠道的通暢。同時，要根據實際情況并在上級部門的指導下，適時建立組織協調，有效調度和相互協作的機制。實驗室內部配置對講機或各區語音對話信息系統，保證實驗室內溝通和運轉效率，從而促進檢測的高效和產能的增加。

表2 各主要職能崗位及其對應的職責說明

結合標本量及疫情態勢的變化，合理安排檢測人員輪崗，各核酸檢測崗位的分工具體見表3。

表3 核酸檢測崗位分工

5 核酸檢測流程規范

核酸檢測工作流程根據實驗室布局的實際情況，保證質量安全和產能效率。檢驗前的準備包括確保安全防護，準確合理的采樣和及時地送檢等，標本接收信息要求完整。

5.1標本前處理崗位設置及運行安排 (1)標本拆包組 。使用廣西桂林核酸手機客戶端掃標本封箱碼并提交箱碼信息，核對標本接收信息登記(包括實際管數記錄、異常標本記錄等信息)。不合格標本(空管或漏管)反饋上報。(2)標本編排組。核對接樣信息，進入編排檢測程序，原則上優先編排(1∶1)管，采用101～190，201～290…的編號規則進行編排第1批，第2批...，每板90人份，另外每板加“三陰一弱陽”的質控和環境空氣靜態監測[13-15]。并做好記錄，流程記錄表規范詳實。

5.2實驗室檢測及運行安排 (1)試劑制備區。提取試劑建議使用推薦的配套提取試劑及與其相適應的自動化設備；擴增檢測試劑盒要求通過國家藥品監督管理部門審批，檢測下限低于500 copy/mL；所有試劑的配制均嚴格按照試劑說明書操作。確定主試劑及復核試劑，主試劑應是兩個以上靶點復核試劑的靈敏度不低于主試劑，其基因靶點的位點與主試劑有差異。按需分批配制主試劑及復核試劑。(2)標本制備區。加樣方式有手工加樣與自動化儀器加樣兩種。結合移動實驗室的布局建議手工加樣，及全自動標本分析處理系統同步進行。為保障加樣準確、快速及降低污染率，手工加樣采取單或雙人配合，復核組必須是雙人配合。嚴格執行試劑說明書操作，點樣自動系統按操作規程操作。重點充分震蕩標本，規范手工加樣、點樣手法。協調人員準備提取板和洗脫板時，要做到“三統一”( “三陰一弱陽”位置標注要一致；批次標識、板的正面要一致；回收批次，洗脫板與盒子要一致)。加樣要“兩振蕩”(標本加樣前要振蕩；弱陽性質控加樣前要振蕩)。(3)擴增區。有效的判讀和及時反饋(ORF1ab/N基因，內標Ct值情況，室內質控質量，復檢編號，孔位等信息)；對翹尾，在灰區，異常的擴增曲線圖，及時反饋給組長和現場質量控制專家組做決策，如有陽性標本，通過復檢程序證實為陽性結果，并及時上報。完善上報流程，2 h按時上報檢測數據情況[16-17]。

6 質量同質化管理

質量同質化采用同一弱陽性質控品，檢測和控制參與大規模核酸篩查各實驗室的精密度，并檢測其準確度的改變，從而實現對各個實驗室的檢測水平進行監控與評估，實現室內質控的室間化。既要防止假陰性，也要防止假陽性，同時設立省級質量管理督察專家組和移動實驗室質量管理員(實驗室領隊兼任)，對現場技術、質量等情況進行定點督查指導，及時了解和解決現場技術和質量問題，指導操作規范。督促實驗室并指導落實整改，杜絕假陽性或假陰性出現[18-20]。各實驗室的室內質控統一使用同一批號配置弱陽性質控品(檢出限1.5～3倍，檢測Ct值在34～36)，利用Excel制作Levey-Jennings質控圖，隨時監測到各批次的室內質控情況。

7 復檢與上報規則

按照試劑盒說明書進行判定檢測結果，首先確認“三陰一弱陽”及環境空氣靜態監測是否符合實驗要求。若有標本內參未檢出，立即原管重新提取復查； 復檢內參仍未檢出則需排除實驗因素后重新采樣復檢，并做好記錄。雙靶區陽性(ORF1ab及N基因)：典型“S”型擴增曲線，同時Ct值在試劑盒說明書結果為判定為陽性的范疇內，如果是混管，可判斷為陽性結果，在經技術組專家鑒定后，可直接、立即上報。如為單管，則用另外用一到兩種(不同生產廠家)或更靈敏且擴增不同靶區域的試劑復檢后，同時給另外實驗室同步復核，結果一致為陽性，則上報，如果是可疑，重新采樣檢測。單靶區陽性：無論是典型“S”型擴增曲線，還是Ct值在判讀結果為灰區的范疇內，均立即啟動實驗室內部復核程序雙提核酸，原試劑和另外一種更靈敏且擴增不同靶區域的試劑對原標本平行測定。

以上在大規模核酸篩查中，對出現陽性結果，需要遵循一項基本原則，“真陽”是指檢測實驗室經過完整的報告程序，用一到兩種(不同產家)或更為靈敏并擴增不同靶區域的試劑進行復檢，證實陽性結果。是由另外一個實驗室將首次檢測實驗室所報告的陽性的標本(單管或混管)重新采樣和復核，并核實檢測結果呈陽性后，才能報陽性結果并及時上報指揮部。

8 醫療廢物處理

一切醫療廢物必須按照統一規格化的容器和標識進行處理。提取板、銳器盒和其他與接觸標本的東西以及更換后的個人防護品采用鵝頸式雙層打包。對已出具結果為陰性的標本可以及時進行處理。對于陽性標本應進行三層鵝頸式包裝，每一層噴灑乙醇后保存至大規模篩查結束，方可處理。定期對周圍環境及外表進行消殺，以避免環境污染和人員感染[21-24]。在大規模篩查結束后需要撤離前應先徹底終末消毒處理，并于指定時間后行徹底環境監測，結果全部陰性方可全部撤離。

9 討 論

在大規模核酸篩查和疫情大數據追蹤等技術的支撐和運用下，投放移動實驗室并參與特定地區人群大范圍核酸篩查可以快速準確地發現新型冠狀病毒，從而給區域性疫情防控能力帶來了質的提升。核酸應急檢測體系要想能夠暢通、穩定、高質和高效地運行，必須依靠人才隊伍的建設與技術的儲備，同時還必須依靠一系列標準化的管理運行流程[25-26]。本文在總結多地實戰經驗的基礎上，對移動實驗室收到指令至完成核酸檢測任務后的撤離進行了詳盡、系統的各環節要點闡述，為新冠病毒應急移動檢測工作提供了理論與科學依據，具有較強的實際意義。