中溫大曲產淀粉酶菌株的篩選鑒定及培養條件優化

胡曉龍，馮大鴻，田瑞杰，王永亮，曹滿堂，魏 濤，韓素娜，沈祥坤，何培新

（1.鄭州輕工業大學 食品與生物工程學院，河南 鄭州 450001；2.賈湖酒業集團有限責任公司，河南 漯河 462400；3.河南仰韶酒業有限公司 博士后科研工作站，河南 三門峽 472400；4.河南省食品工業科學研究所有限公司，河南 鄭州 450053）

中國白酒品種繁多，不同白酒釀造工藝中采用的酒曲也不盡相同。根據酒曲所用的原料和形狀的不同可分為大曲、小曲和麩曲[1]。大曲常以小麥為主要原料（大麥、豌豆等為輔料），采用生料制曲、自然接種，自然發酵而成[2]，主要用于釀造醬香型、濃香型和清香型等白酒。根據大曲品溫的不同，可分為高溫大曲（60～70 ℃）、中溫大曲（45～50 ℃）及低溫大曲（40～45 ℃）[3]。中溫大曲是濃香型白酒發酵中使用的糖化發酵劑，因此也稱濃香型大曲[4]。

大曲含有豐富的微生物酶系，淀粉酶是水解谷物原料的重要酶類[5-7]，其酶活力的高低是影響原料利用率和出酒率的重要因素之一[8]。大曲中產淀粉酶微生物的種類繁多，芽孢桿菌屬（Bacillussp.）細菌和曲霉屬（Aspergillussp.）真菌是大曲中淀粉酶的主要產生菌，其中，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）是白酒釀造中常見的功能菌，具有很強的分泌降解酶的能力，其分泌的淀粉酶能快速將原料中的淀粉水解為還原糖，進而發酵為醇、酯和各種有機酸，不僅能提高淀粉質原料的利用率還能增加白酒的香氣[9-10]。而來源于芽孢桿菌屬微生物所產淀粉酶最為常見，如貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velesi），地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis）、解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）、蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）等芽孢桿菌[11-14]。王屈祎等[12]從高溫大曲中篩選得到一株產淀粉酶貝菜斯芽孢桿菌LT-2，經優化后酶活達到972.88 U/mL，魯珍等[15]從高溫大曲獲得產淀粉酶假蕈狀芽孢桿菌（Bacillus pseudomycoides）GX05，優化后酶活達到180.12 U/g，毛祥等[16]從醬香型大曲中獲得產淀粉酶枯草芽孢桿菌1#，優化后酶活為8 667.79 U/mL。中溫大曲作為濃香型白酒釀造的重要組成部分，篩選產淀粉酶功能微生物，優化其發酵條件后并應用到濃香型白酒釀造中，對白酒出酒率和品質的提升具有非常重要的意義。較之于放線菌、霉菌等產淀粉酶微生物，芽孢桿菌具有產酶量高、發酵周期短、成本低和易于規模化生產等優勢，其更有發展前景[12]。

本研究利用淀粉水解圈法初篩、搖瓶發酵法復篩從中溫大曲中篩選獲得產淀粉酶芽孢桿菌，結合菌落形態觀察、革蘭氏染色和16S rRNA同源序列分析，對其進行菌種鑒定，通過單因素試驗、Plackett-Burman試驗、最陡爬坡試驗和Box-Behnken試驗優化其產淀粉酶的培養條件，以期提高中溫大曲的液化力和糖化力，豐富產淀粉酶功能微生物資源庫，為提升白酒出酒率和品質提供理論依據和技術支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 原料與試劑

中溫大曲：取自河南某酒企。

蛋白胨、牛肉粉、酵母粉（均為生化試劑）：北京奧博星生物技術責任有限公司；可溶性淀粉（生化試劑）、Na2PHO4、MgSO4、葡萄糖（均為分析純）：天津市凱通化學試劑有限公司；瓊脂粉（生化試劑）、NaCl（分析純）：生工生物工程（上海）股份有限公司；3,5-二硝基水楊酸（3,5-dinitrosalicylic acid，DNS）（分析純）：上海麥克林生化科技有限公司；土壤基因組脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）提取試劑盒FastDNASPIN kit for Soil：美國MP biomedicals公司；其余試劑均為國產分析純。

1.1.2 培養基

篩選培養基：蛋白胨10 g/L，牛肉粉5 g/L，NaCl 5 g/L，可溶性淀粉10 g/L，瓊脂粉20 g/L，pH值7.0。

種子培養基：蛋白胨10 g/L，牛肉粉5 g/L，NaCl 5 g/L，pH值7.0。

發酵培養基：蛋白胨20 g/L，可溶性淀粉20 g/L，Na2PHO45 g/L，MgSO40.1 g/L，NaCl 0.1 g/L，pH值7.0。

以上培養基均于121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min。

1.2 儀器與設備

LDZX-50KBS型蒸汽滅菌器：上海中安醫療器械廠；SW-CJ-1型超凈工作臺：蘇州凈化設備有限公司；ZWY-100H型恒溫搖床：上海智城分析儀器有限公司；DH-400型恒溫培養箱：上海鴻都電子科技有限公司；HH-S型水浴鍋：金壇市醫療儀器廠；TGL-20M型離心機：上海盧湘儀離心機儀器有限公司；721S型分光光度計：上海元析儀器有限公司；聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）儀：鄭州利研儀器設備有限公司。

1.3 方法

1.3.1 產淀粉酶菌株的分離與初篩

取10 g大曲樣品加入90 mL無菌水，180 r/min振蕩混勻20 min；進行10倍梯度稀釋，將10-3、10-4、10-5梯度的稀釋液涂布于篩選培養基上，37 ℃恒溫培養24 h；在培養基中滴加0.05%的盧戈式碘液，測定菌落透明圈直徑（D）和菌落直徑（d）的比值（D/d），進行初篩，取D/d值較大的菌株進行純化，用于后續復篩試驗[17]。

1.3.2 產淀粉酶菌株復篩

將初篩的D/d＞2.5的菌株接種至100 mL種子培養基中，于37 ℃、150 r/min振蕩培養24 h進行活化，至OD600nm值達到1.0左右，以5%（V/V）接種量接種到裝液量為100 mL/250 mL的發酵培養基中，于37 ℃、150 r/min振蕩培養48 h后，收集發酵液于5 000 r/min離心5 min，取上清液（粗酶液）測定淀粉酶活力，進行復篩。

1.3.3 高產淀粉酶菌株的鑒定

形態學觀察：參照《伯杰細菌鑒定手冊》[18]對菌株的菌落及細胞形態進行觀察，細胞經革蘭氏染色后鏡檢觀察。

分子生物學鑒定：復篩后淀粉酶活最高的菌株按照FastDNASPIN kit for Soil試劑盒說明書提取DNA，以其為模板，采用通用引物27F（5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3）和1492R（5′-TACGACTTAACCCCAATCGC-3′）為上、下游引物，對其16S rRNA基因片段進行PCR擴增，具體參照劉延波等[19]的方法。將測序結果提交至美國國家生物技術信息中心（national center for biotechnology information，NCBI）的GenBank數據庫與已知序列進行比對，通過基本局部比對搜索工具（basic local alignment search tool，BLAST）進行比對搜索，選擇與待測物種序列相似性最大的同源序列，使用MEGA7.0軟件通過鄰接法（neighbor-joining，NJ）構建系統發育樹，對菌株進行鑒定。

1.3.4 高產淀粉酶菌株生長曲線和產酶曲線的繪制

將高產淀粉酶菌株的種子液按5%（V/V）的接種量接種到發酵培養基，初始pH值7.0，裝液量100 mL/250 mL，37 ℃、150 r/min培養，每6 h取樣一次，24 h以后每隔1 d取樣一次，測定菌液在波長600 nm處的吸光度值，并取發酵液于5 000 r/min離心5 min，測定上清液的淀粉酶活力，分析該菌株的生長規律及產淀粉酶特點。

1.3.5 高產淀粉酶菌株培養條件優化單因素試驗

固定基本培養基成分的碳源為20 g/L可溶性淀粉，氮源為20 g/L蛋白胨，基本培養條件為發酵溫度37 ℃，轉速150 r/min，初始pH值7，裝液量100 mL/250 mL，接種量5%，發酵時間8 d。單因素試驗中只改變其中一個因素，其他8個因素固定不變。分別考察碳源種類（可溶性淀粉、葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、小麥、高粱、糯米）及其質量濃度（10 g/L、20 g/L、30 g/L、40 g/L、50 g/L、60 g/L、70 g/L）、氮源種類（蛋白胨、牛肉粉、酵母粉、尿素、硫酸銨、硝酸鈉）及其質量濃度（10 g/L、20 g/L、30 g/L、40 g/L、50 g/L、60 g/L、70 g/L）、發酵溫度（31 ℃、33 ℃、35 ℃、37 ℃、39 ℃、41 ℃）、轉速（120 r/min、150 r/min、180 r/min、210 r/min、240 r/min、270 r/min）、初始pH值（4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0）、裝液量（25 mL/250 mL、50mL/250mL、75mL/250mL、100mL/250mL、125mL/250mL、150 mL/250 mL）及接種量（1%、3%、5%、7%、9%、11%、13%）9個因素對菌株產淀粉酶酶活力的影響。

1.3.6 高產淀粉酶菌株培養條件優化Plackett-Burman試驗

在單因素試驗的基礎上，選取碳源質量濃度（X1）、氮源質量濃度（X2）、初始pH值（X3）、接種量（X4）、轉速（X5）、發酵溫度（X6）、裝液量（X7）7個因素，進行Plackett-Burman試驗設計，每個因素選取高低2個水平，以-1和+1編碼各值，利用Design Expert10.0.8軟件對其進行Plackett-Burman試驗設計，以淀粉酶活（Y）為響應值，篩選對菌株產淀粉酶具有顯著影響的因子，試驗因素與水平見表1。1.3.7 高產淀粉酶菌株培養條件優化最陡爬坡試驗

表1 培養條件優化Plackett-Burman試驗設計因素與水平Table 1 Factors and levels of Plackett-Burman tests design for culture conditions optimization

根據上述試驗結果，從7個因素中選取對淀粉酶活影響較大的3個顯著因素，采用最陡爬坡試驗進一步確定各因素水平、爬坡方向和步長，確定用于Box-Behnken試驗的中心點。

1.3.8 高產淀粉酶菌株培養條件優化Box-Behnken試驗設計

根據最陡爬坡試驗結果，選取影響淀粉酶活力最大的因素氮源質量濃度（X2）、轉速（X5）、裝液量（X7）進行優化，以淀粉酶活力（Y）為響應值，采用Box-Behnken試驗設計進行優化，其因素與水平見表2。

表2 培養條件優化Box-Behnken試驗設計因素與水平Table 2 Factors and levels of Box-Behnken experiments design for culture conditions optimization

1.3.9 淀粉酶活力的測定[20]

取粗酶液1 mL，于65 ℃水浴預熱5 min，加1 mL淀粉含量為1%的磷酸檸檬酸緩沖液（pH值6.0），65 ℃恒溫水浴保溫30 min，加入2 mL DNS試劑終止反應，沸水浴加熱5 min，立即在冰水中冷卻，加水定容至10 mL，在波長540 nm處測定吸光度值。對照組為在1 mL粗酶液中先加2 mL DNS，之后加入1 mL淀粉含量為1%的磷酸檸檬酸緩沖液，其他步驟相同，由實驗組吸光度值減去對照組吸光度值，計算淀粉酶活力。空白組為2 mL蒸餾水加2 mL DNS試劑，其他步驟相同，定容至10 mL，在波長540 nm處調節零點。

淀粉酶酶活定義：在65 ℃、pH值6條件下，每分鐘產生1 μg葡萄糖所需酶量定義為一個酶活力單位（U/mL）。

2 結果與分析

2.1 產淀粉酶菌株的分離及篩選

經篩選培養基對產淀粉酶菌株進行稀釋涂布分離，從中溫大曲樣品中共分離純化得到70株不同形態的產淀粉酶菌株，經盧戈式碘液染色，測量D/d值進行初篩，并通過測定其產淀粉酶活力進行復篩，結果見表3。由表3可知，得到D/d值＞2.5的菌株共6株，分別編號為菌株BM-34、SHBQ-36、DQ47、SHAM-7、SHAM-8及SHAM-28。經復篩獲得菌株DQ47產淀粉酶能力較強，D/d值與淀粉酶活力均為最高值，分別為2.98、552.78 U/mL。因此，對該菌株進行進一步鑒定。

表3 高產淀粉酶菌株的初篩及復篩結果Table 3 Results of preliminarily screening and second screening of high yield amylase strains

2.2 菌株DQ47的鑒定

2.2.1 菌株DQ47的形態學觀察

對菌株DQ47進行劃線培養及革蘭氏染色，其菌落形態與細胞形態見圖1。

圖1 菌株DQ47的菌落形態（A）及細胞形態（B）Fig.1 Colony morphology (A) and cell morphology (B) of strain DQ47

由圖1A可知，菌株DQ47的菌落較大且不規則，表面粗糙有褶皺，顏色為灰白色；由圖1B可知，菌株DQ47經革蘭氏染色后呈紫色，為革蘭氏陽性菌，菌體為桿狀，根據《伯杰細菌鑒定手冊》初步鑒定菌株DQ47為芽孢桿菌屬（Bacillussp.）。

2.2.2 菌株DQ47的分子生物學鑒定

使用MEGA7.0軟件基于16S rRNA基因序列構建菌株DQ47的系統發育樹，結果見圖2。

圖2 基于16S rRNA基因序列菌株DQ47的系統發育樹Fig.2 Phylogenetic tree of strain DQ47 based on 16S rRNA gene sequences

由圖2可知，菌株DQ47與枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）IAM12118親緣關系相近，結合菌落形態、細胞形態和分子生物學鑒定結果，菌株DQ47被鑒定為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）。

2.3 菌株DQ47的生長曲線及產淀粉酶酶活曲線的測定

由圖3可知，菌株DQ47的生長趨勢和產淀粉酶活力變化不完全同步。菌株DQ47的遲滯期為0～6 h，生長對數期為6～24 h，1～6 d進入穩定期，6～8 d進入衰亡期。發酵時間在0～8 d范圍內增加，淀粉酶活力逐漸增加，在第8天達到最大值（2 723 U/mL），發酵時間＞8 d之后，淀粉酶活力下降。淀粉酶合成受到底物淀粉的誘導，在菌株生長達到穩定期后，依舊延續合成淀粉酶，據此，推斷菌株DQ47所產淀粉酶酶生物合成模式為延續合成型，選擇酶活力達到最大時終止發酵，即發酵周期為8 d。在目前研究中，從大曲中篩選得到的產淀粉酶細菌發酵周期多在36～96 h范圍內[14-15，18]。

圖3 菌株DQ47的生長曲線及產淀粉酶曲線Fig.3 Growth curve and amylase production curve of strain DQ47

2.4 培養條件優化

2.4.1 培養條件優化單因素試驗結果

由圖4A可知，以可溶性淀粉為碳源時，淀粉酶活力最高為3 231.35 U/mL，與胡紅偉等[21]的研究結果一致，這可能是由于淀粉易于被微生物直接利用，其提供的營養物質促使菌體量不斷增加，進而提高淀粉酶產量[22]，因此，確定最佳碳源為可溶性淀粉。由圖4B可知，酵母粉作為氮源時淀粉酶活力（5 170.56 U/mL）顯著高于其他氮源種類（P＜0.05），相比于無機氮源，有機氮源更能促進菌株產淀粉酶，因為有機氮源含有豐富的氨基酸、維生素及生長因子等營養物質，有利于菌體生長[23]，而酵母粉分子比其他有機氮源分子小，更有利于菌體吸收，促進菌體生長和產酶。因此，確定最佳氮源為酵母粉。

由圖4C可知，隨可溶性淀粉質量濃度在10～60 g/L范圍內的升高，淀粉酶活力不斷提高；可溶性淀粉質量濃度為60 g/L時，淀粉酶活力最高達到7 022.69 U/mL；可溶性淀粉質量濃度＞60 g/L，淀粉酶活力開始降低。因此，確定可溶性淀粉最佳質量濃度為60 g/L。由圖4D可知，當酵母粉質量濃度在10～30g/L范圍內的升高，淀粉酶活力不斷提高；當酵母粉質量濃度為30 g/L時，酶活力達到最大值（7 119.82 U/mL）；當酵母粉質量濃度＞30 g/L之后，淀粉酶活力開始降低。在微生物生長過程中，碳源和氮源的濃度起著十分重要的作用，濃度過低，微生物生長所需的營養物質不足，濃度過高，又會出現底物反饋抑制，進而影響微生物的產酶[24]。因此，確定最佳酵母粉質量濃度為30 g/L。

發酵溫度可直接影響微生物的生長和淀粉酶的產生，溫度過高或過低都會抑制酶的表達[25]。由圖4E可知，隨著發酵溫度在31～39 ℃范圍內的升高，淀粉酶酶活力顯著升高；當發酵溫度增加至39 ℃時，淀粉酶活力達到最大值，4 175.83 U/mL；發酵溫度＞39 ℃之后，淀粉酶活力下降。因此，確定最佳發酵溫度為39 ℃。

圖4 不同培養條件對淀粉酶酶活力的影響Fig.4 Effects of different culture conditions on amylase activity

由圖4F可知，當轉速在120～180 r/min范圍內增加，淀粉酶活力提高；當轉速為180 r/min時，淀粉酶活力提高達到最大值4 120.38 U/mL；當轉速＞180 r/min之后，淀粉酶活力下降。因此，確定最佳轉速為180 r/min。由圖4G可知，裝液量在25 mL/250 mL～100 mL/250 mL范圍內增加，淀粉酶活逐漸增加；當裝液量為100 mL/250 mL時，淀粉酶活達到最大值，為3 267.72 U/mL；當裝液量＞100 mL/250 mL之后，淀粉酶活下降。由于枯草芽孢桿菌是兼性厭氧菌，當氧氣供應不足時會進入厭氧發酵途徑，進而影響產酶效率；當氧氣供應過量時，會存在一定的氧毒性，從而抑制細胞生長和酶的表達[26]。因此，確定最佳裝液量為100 mL/250 mL。

由圖4H可知，當初始pH值在4～6范圍內增加，淀粉酶活逐漸增加；當初始pH值為6時，達到最大值，為4 708.36U/mL；當初始pH值＞6之后，淀粉酶活逐漸下降，其原因可能是在白酒發酵過程中，原料中的淀粉和蛋白質等營養物質的分解會產生有機酸，使得整個發酵環境偏酸性從而抑制微生物的活性[27]，與毛祥等[16]的研究結果一致。因此，確定最佳初始pH值為6。

由圖4I可知，當接種量在1%～3%范圍內增加，淀粉酶活逐漸增加；當接種量為3%時，淀粉酶活力達到最大值，為3 214.60 U/mL；接種量＞3%之后，淀粉酶活力有所下降。因此，確定最佳接種量為3%。

2.4.2 培養條件優化Plackett-Burman試驗結果

Plackett-Burman試驗設計及結果見表4，方差分析見表5。

表4 Plackett-Burman試驗設計及結果Table 4 Design and results of Plackett-Burman tests

由表5可知，7個因素中對響應值影響的重要性順序為轉速＞裝液量＞氮源質量濃度＞發酵溫度＞碳源質量濃度＞初始pH值＞接種量，其中，氮源質量濃度、轉速、裝液量是對淀粉酶酶活力影響顯著的因素（P＜0.05），該模型的P值為0.039，影響顯著，決定系數R2為0.925 1，表明該方程的擬合度較好，因此選擇氮源質量濃度（X2）、轉速（X5）、裝液量（X7）做進一步優化試驗。

表5 Plackett-Burman試驗方差分析結果Table 5 Variance analysis results of Plackett-Burman tests

2.4.3 培養條件優化最陡爬坡試驗

為逼近響應面中心點，提高淀粉酶活，選取氮源質量濃度、轉速、裝液量這3個顯著影響因素進行最陡爬坡試驗設計，確定最佳水平范圍，最陡爬坡試驗設計及結果見表6。由表6可知，在試驗組2的培養條件下，淀粉酶活力最高，為8 093.85 U/mL。因此，選擇試驗組2的培養條件作為響應面中心點，進行Box-Behnken試驗設計。

表6 最陡爬坡試驗設計及結果Table 6 Design and results of the steepest climbing tests

2.4.4 培養條件優化Box-Behnken試驗設及結果

在上述試驗的基礎上，以淀粉酶活力（Y）為響應值，以氮源質量濃度（X2）、轉速（X5）、裝液量（X7）為自變量，利用Design Expert10.0.8軟件進行3因素3水平響應面試驗，試驗設計及結果見表7，方差分析結果見表8。

表7 培養條件優化Box-Behnken試驗設計及結果Table 7 Design and results of Box-Behnken tests for culture conditions optimization

表8 回歸模型方差分析Table 8 Variance analysis of regression model

采用Design-Expert10.0.8軟件對表7的試驗結果進行多項擬合回歸，獲得淀粉酶酶活力（Y）對氮源質量濃度（X2）、轉速（X5）、裝液量（X7）的二次多項回歸方程：Y=8 020.29+225.17X2+485.73X5-1 275.74X7+311.55X2X5-2 01.37X2X7-22.57X5X7+169.19X22-2 176.31X52-2 701.58X72。

由表8可知，該回歸模型極顯著（P=0.000 1＜0.01），說明擬合回歸方程有意義，模型達到極顯著水平；且失擬項不顯著（P=0.072 9＞0.05），回歸模型決定系數R2=0.995 3，說明試驗數據誤差較小，試驗精度高，能夠較好描述試驗結果且用于預測考察因素與淀粉酶活力之間的關系。由P值可知，一次項X5、X7，二次項X52、X72對結果影響極顯著（P＜0.01）；一次項X2，交互項X2X5對結果影響顯著（P＜0.05）；其他項對結果影響不顯著（P＞0.05）。由F值可知，影響淀粉酶活的因素主次順序為X7＞X5＞X2，即裝液量＞轉速＞氮源質量濃度。各因素間交互作用對淀粉酶活力影響的響應曲面及等高線見圖5。

圖5 各因素間交互作用對淀粉酶活力影響的響應曲面及等高線Fig.5 Response surface plots and contour lines of effects of interaction between various factors on amylase activities

由圖5可知，氮源質量濃度（X2）與轉速（X5）間交互作用曲面較陡，等高線較密集，說明其交互作用對淀粉酶活力影響顯著（P＜0.05），而裝液量（X7）與氮源質量濃度（X2）、轉速（X5）與裝液量（X7）有一定交互作用，但交互作用對淀粉酶活力影響不顯著（P＞0.05），這與方差分析結果一致。

根據Design-Expert10.0.8軟件分析得到的最優培養條件為氮源質量濃度36.84 g/L，轉速175.25 r/min，裝液量85.98 mL/250 mL。在此條件下，淀粉酶活力的預測值為8 285.45 U/mL。為方便實際操作，將培養條件修正為氮源質量濃度37 g/L，轉速175 r/min，裝液量85 mL/250 mL。以此最佳培養條件進行3次平行驗證試驗，獲得淀粉酶活力的實際值為8 158.23 U/mL，與預測值接近，說明該模型可行。

3 結論

本研究從中溫大曲中篩選出一株淀粉酶活力較高的菌株DQ47，通過形態觀察與16S rRNA同源序列分析，被鑒定為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）。通過測定菌株DQ47生長曲線和產淀粉酶酶活曲線，確定其發酵產淀粉酶的周期為8 d，且其酶合成模式為延續合成型，這種持續生長、持續產酶的發酵特性可使其在白酒釀造具有較高的應用價值。采用單因素試驗及響應面試驗確定其最優培養條件為：可溶性淀粉60 g/L、酵母粉37 g/L、發酵溫度39 ℃、裝液量85 mL/250 mL、轉速175 r/min、初始pH值6、接種量3%，在此最佳培養條件下，淀粉酶活力達到8 158.23 U/mL，是優化前的14.75倍。在后續研究工作中，將進一步考察菌株DQ47對濃香型白酒出酒率的影響，以期為產淀粉酶功能微生物在濃香型白酒生產中的應用提供參考。