血清HBV DNA載量與血小板參數的相關性研究

李亞軍,余 抒

重慶郵電大學附屬重鋼總醫院檢驗科，重慶 400081

慢性乙型肝炎(CHB)是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的以肝細胞損傷為主要病理表現的傳染性疾病。據文獻報道，CHB復發率高、傳染性強，與HBV出現C前區終止碼變異有關[1-2]。HBV是傳染性極強的病毒，全球約20多億人感染過HBV，其中超兩億人為CHB患者，每年有25%～40%的乙型肝炎患者發展為肝癌或肝硬化，每年因乙型肝炎死亡的人數達75萬例[3]。流行病學調查顯示，我國HBV的感染率約為6.1%，CHB患者約為8 600萬人，然而治療率僅為10.8%[4]。在2021年的全國傳染病發病率排名中，CHB作為我國法定乙類傳染病，其發病率位列全國第二位，為69.247 3/100 000，病死率為0.029 3/100 000[5]。由于發病率和病死率居高不下，血小板相關參數曾作為研究熱點被用到指導CHB抗病毒治療性研究中，但有關不同HBV DNA載量CHB患者的血小板相關參數變化及其相關性的研究較少。本文通過對不同HBV DNA載量CHB患者的血小板計數(PLT)、血小板分布寬度(PDW)、平均血小板體積(MPV)、大血小板比率(P-LCR)等參數的研究分析，探討在CHB病程中血小板參數變化的臨床意義，以期為臨床治療CHB提供有效的監測數據，同時為抗病毒治療提供更有價值的檢驗指標解讀。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2020年5月至2022年3月確診的194例CHB患者作為病例組，均符合《慢性乙型肝炎防治指南(2019年版)》[6]中CHB診斷標準，排除血液系統疾病患者，其中男102例，女92例；年齡16～91歲，平均(48.5±16.4)歲。根據乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗體(HBsAb)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗體(HBeAb)、乙肝核心抗體(HBcAb)檢測結果分為大三陽組(HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+)和小三陽組(HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+)；按HBV DNA載量不同分為低載量組(HBV DNA載量<105copy/mL)、中載量組(HBV DNA載量為105～107copy/mL)和高載量組(HBV DNA載量>107copy/mL)。選擇同期本院健康體檢者200例作為對照組，其中男102例，女98例；年齡16～80歲，平均(47.9±12.3)歲。病例組與對照組性別、年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2儀器與試劑 血清HBV DNA檢測使用實時熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)檢測系統(天隆Gentier 96E)，試劑為HBV DNA檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)；乙肝表面標志物定量檢測采用羅氏公司Cobs6000分析系統，試劑為儀器配套的原裝診斷試劑；血小板參數檢測采用希森美康全自動血液分析儀(SYSMEX，XN1000)，試劑為希森美康原裝試劑。

1.3方法 采集所有研究對象空腹靜脈血5 mL，根據檢測需求留取血清和全血標本。使用PCR儀檢測HBV DNA；采用電化學發光技術對HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb進行檢測；采用電阻抗技術檢測血小板參數，包括PLT、PDW、MPV、P-LCR。以上檢測均嚴格遵循標準流程操作執行，相關項目室內質控結果均在控。

2 結 果

2.1病例組和對照組血小板參數比較 病例組PLT明顯低于對照組，PDW、MPV、P-LCR明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 病例組與對照組血小板參數比較或M(P25，P75)]

2.2不同HBV DNA載量組組內年齡分布分析 根據乙肝表面標志物定量檢測結果進行分組：大三陽組55例(28.4%)，小三陽組139例(71.6%)。大三陽CHB患者以低齡人群為主，小三陽CHB患者以高齡人群為主。低載量組、中載量組以小三陽人群為主，構成比分別為89.0%、75.7%，高載量組以大三陽人群為主，構成比為69.0%，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.3不同HBV DNA載量組與對照組血小板參數比較 根據乙肝表面標志物陽性差異將病例組分為大三陽組和小三陽組，并對各組內不同HBV DNA載量組間血小板參數進行亞組分析，結果顯示：大三陽組內，僅PLT在高、中載量組較對照組降低，PDW在高載量組較對照組升高，差異有統計學意義(P<0.05)，其余參數組間差異無統計學意義(P>0.05)，見表3；小三陽組內，不同HBV DNA載量組的PLT較對照組降低，PDW、MPV、P-LCR較對照組升高，差異有統計學意義(P<0.05)，且隨HBV DNA載量增加，PLT協同降低，MPV、P-LCR反向升高，差異有統計學意義(P<0.05)，見表4。

表2 不同HBV DNA載量組內年齡分布比較[n(%)或M(P25，P75)或

表3 大三陽組內不同HBV DNA載量組與對照組血小板參數比較或M(P25，P75)]

表4 小三陽組內不同HBV DNA載量組與對照組血小板參數比較或M(P25，P75)]

2.4HBV DNA載量與血小板參數的相關性分析 根據乙肝表面標志物陽性差異將病例組分為大三陽組和小三陽組，分析HBV DNA載量與血小板參數的相關性，結果顯示，大三陽組的血小板參數與HBV DNA載量無相關性(P>0.05)，小三陽組的PLT與HBV DNA載量呈負相關，PDW、MPV、P-LCR與HBV DNA載量呈正相關(P<0.05)，見表5。

表5 HBV DNA載量與血小板參數的相關性分析

3 討 論

血清HBV DNA載量是CHB患者診斷與治療最常使用的指標，但該指標僅能監測HBV活動情況，無法判斷患者機體功能的損傷[7]，臨床一般僅聯合生化指標(丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶等)檢查肝功能，不利于綜合分析患者病情進展及療效。既往研究表明，乙型肝炎患者病程不同，血小板參數有不同改變[8]，因此聯合檢測血小板參數，探討其評估乙型肝炎患者病情和療效的價值更有意義。

HBV感染會導致血小板質變和量變已得到充分認識[8-9]，但其機制復雜。有研究表明，HBV DNA對骨髓造血有破壞和抑制作用[10]，抑制效應與HBV DNA載量存在協同關系[11]，骨髓抑制導致的PLT生成減少，其MPV也隨之變小。另有李貝等[12]指出，長期受HBV感染，會導致血小板發生活化并釋放胞內顆粒內容物，使血小板破壞增多，并且機體因免疫功能失衡產生相應的抗血小板抗體，會進一步破壞血小板，并且隨病程的進展而加重，表現出PLT減少而MPV變大。P-LCR是反映血小板活化的指標，指血小板體積大于12 fL的大血小板占血小板總數的比例，研究表明大血小板的凝血功能強，檢測P-LCR有助于評價凝血功能[13]，例如在肝硬化出血患者中P-LCR明顯升高，有一定敏感性，可輔助判斷機體出血風險[14]；在部分腦梗死和急性冠脈綜合征中P-LCR升高是高危因素，可作為判斷病情及診療的重要參考指標[15-16]。

本研究不同類型CHB患者有明顯的年齡分布特征，其中大三陽CHB患者以低齡人群為主，小三陽CHB患者以高齡人群為主，提示年齡對患者病情進展有影響。此外，高載量組人群主要表現為大三陽，而中、低載量組人群以小三陽為主，表明大三陽時病毒復制更活躍，傳染性更強，需控制傳染，加強治療。

近年來邵璇璇等[17]研究報道，在HBV感染高齡患者中血小板參數有更明顯的變化。本研究中，大三陽組與小三陽組血小板參數變化不一致。在大三陽組中，僅PLT、PDW有輕微變化，不同HBV DNA載量組間的血小板參數變化較小，可能是大三陽組的人群年齡較小，雖然受HBV影響，但因骨髓代償能力和免疫力強，機體能有效代償，因此血小板參數變化小；在小三陽組中，不同HBV DNA載量組間的血小板參數變化較大，且隨HBV DNA載量增加而變化更大，表明小三陽組人群的血小板參數受HBV影響更明顯，考慮是該組人群年齡較大引起，因高齡人群骨髓代償能力和免疫力低，所以HBV對骨髓抑制及血小板損耗作用明顯。提示在診療中除了考慮HBV DNA和血小板參數，也要結合患者的年齡，高齡人群因骨髓代償能力、免疫力弱，受HBV影響更嚴重，需根據年齡調整抗HBV治療方案。

HBV感染后對血小板各項參數影響明顯，而HBV DNA載量作為判斷HBV在體內復制和傳染性強弱的診斷金標準[18]，提供了重要的HBV感染過程的監測依據。本研究結果顯示，小三陽人群隨著HBV DNA載量增加呈現PLT降低，PDW、MPV、P-LCR升高的變化趨勢，表明HBV DNA載量越大對骨髓抑制和破壞作用越強，與同類報道一致[19-20]。相關分析結果顯示，小三陽組的HBV DNA載量與血小板參數有一定相關性，而大三陽組無相關性，說明CHB患者中小三陽人群的血小板參數與HBV DNA載量關聯性更強，隨病毒復制增加協同降低，出血風險增加，監測HBV DNA的同時，需監測其血小板參數，結合血小板參數變化判斷CHB病情進展，及時調整CHB治療方案。

本研究顯示，病例組P-LCR隨HBV DNA載量增加而協同升高，尤其在高齡為主的小三陽人群中，P-LCR升高更明顯，提示高齡、HBV DNA高載量人群血小板活化明顯增多，而高齡人群中本身患有高血糖、高血壓等基礎疾病者較多，血小板活化增多會進一步加劇罹患心腦血管疾病的風險，因此，高齡、HBV DNA高載量人群可能患血栓疾病的風險更高。此外，P-LCR升高表明新生血小板增多，提示血小板消耗增多，疊加HBV抑制骨髓減少血小板生成因素，可能加劇患者的出血風險。因此，監測P-LCR以指導治療方案，在預防CHB患者出血或血栓疾病中意義重大，尤其是高齡、HBV DNA高載量人群。本次研究的是CHB混合人群，未區分病程，后續將對病程、年齡等進行亞組分析，以期獲得更有價值的研究數據。

綜上所述，HBV DNA對血小板有不同程度影響，可以用血小板參數變化間接反映HBV在體內的復制情況及病情，為臨床治療CHB提供參考依據，在缺乏PCR分析儀的基層醫療單位尤為重要，可作為有限度的輔助性指標。所以，HBV DNA和血小板參數聯合檢測對臨床判斷CHB進程、選擇治療方案及預后評估更有幫助。