hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA聯合檢測對乳腺癌的臨床診斷價值

張旭明，尹偉明，高 婧

深圳市寶安區石巖人民醫院檢驗科，廣東深圳 518000

乳腺癌屬于臨床上較為常見的一種女性特發性生殖系統惡性腫瘤，其發病率在女性所有惡性腫瘤中位居首位，且部分患者最終會發生遠處轉移，預后不良[1]。早期準確診斷乳腺癌對臨床治療方案的實施及改善患者預后具有極其重要的意義。病理檢查是迄今為止乳腺癌唯一的診斷“金標準”，但該檢查方式具有有創性，且對患者的耐受性具有較高要求，臨床應用有一定的局限性[2]。人乳腺珠蛋白(hMAM)是近年來發現的分泌糖蛋白之一，具有特異性較高的特點，僅在乳腺上皮細胞及乳腺癌組織中表達，在其他腫瘤組織中幾乎不表達，具有成為乳腺癌特異性生物標志物的潛力[3-4]。乳腺上皮小黏蛋白(SBEM)也有高度特異性，僅表達于乳腺及唾液腺組織中，可通過調控上皮間質轉化信號通路影響乳腺癌細胞的侵襲、轉移[5]。癌胚抗原相關細胞黏附分子19(CEACAM19)屬于癌胚抗原家族重要成員之一，在腫瘤細胞中異常高表達，可能參與了腫瘤的發生、發展過程[6]。鑒于此，本研究探討了hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA聯合檢測對乳腺癌患者的臨床診斷價值，以期為該病的診斷提供一種有效的手段，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇本院2019年1月至2021年1月收治的73例乳腺癌患者作為乳腺癌組，另選取同期70例乳腺良性病變患者作為良性病變組，同期70例健康志愿者作為健康對照組。乳腺癌組年齡24～78歲，平均(56.32±10.36)歲；體質量指數(BMI)為19～32 kg/m2，平均(23.58±1.35)kg/m2；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期31例，Ⅲ～Ⅳ期42例；有淋巴結轉移37例，無淋巴結轉移36例。良性病變組年齡26～77歲，平均(56.41±10.45)歲；BMI為19～32 kg/m2，平均(23.67±1.40)kg/m2；疾病種類：乳腺纖維腺瘤39例，乳腺囊性增生21例，漿細胞性乳腺炎10例。健康對照組年齡25～79歲，平均(56.52±10.61)歲；BMI為19～32 kg/m2，平均(23.71±1.45)kg/m2。各組年齡、BMI比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。納入標準：(1)乳腺癌患者均經病理檢查確診；(2)年齡>18周歲；(3)入組前并未接受任何抗腫瘤治療；(4)臨床病歷資料完整。排除標準：(1)合并其他惡性腫瘤；(2)神志異常或伴有精神疾病；(3)因故無法配合完成本研究。所有研究對象對本研究均知情同意，并簽署知情同意書，本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2儀器與試劑 Loghtcycler PCR熱循環儀(Roche公司)，Trizol試劑盒(Gibco BRL公司)，SYBR Premix EX TaqTM試劑盒(TaKaRa公司)。

1.3方法 采集所有研究對象靜脈血4 mL，用EDTA抗凝處理，再用生理鹽水稀釋2倍，借助淋巴細胞分離液分離獲取淋巴細胞，最后采用Trizol試劑提取細胞總RNA。采用熒光定量PCR檢測hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平，具體操作嚴格按照SYBR Premix EX TaqTM試劑盒說明書進行。反應體系：2 μL的cDNA模板，上下游引物各0.4 μL，SYBR Premix EX Taq染料10 μL，加水補全總體系至20 μL。于Loghtcycler PCR熱循環儀上實施擴增及分析，反應條件：50 ℃ 2 min，95 ℃ 10 min，94 ℃ 15 min，66 ℃ 60 s，共40個循環。hMAM上游引物：5′-CCGACAGCAGCAGCCTCAC-3′，下游引物：5′-TCCGTAGTTGGTTTCTCAC-3′；SBEM上游引物：5′-CTGCCAGAATCCGACAACAG-3′，下游引物：5′-AGCAGTGGTCGCAGTGGTTGC-3′；CEACAM19上游引物：5′-TGTAGCTGTTGCAAATGCTTTAGGAAGAAGC-3′，下游引物：5′-GGGCCACTGTGGGCATCATGATTGG-3′。上述引物設計及合成由上海英駿生物技術有限公司完成。hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA相對表達水平以2-ΔΔCt表示。

1.4觀察指標 比較3組hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平；分析乳腺癌患者臨床分期及淋巴結轉移情況與hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平的關系；評估hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平對乳腺癌的診斷價值。

2 結 果

2.13組hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平比較 乳腺癌組hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平均高于良性病變組及健康對照組，且良性病變組上述指標表達水平均高于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 3組hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平比較

2.2不同臨床分期乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平比較 Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平均高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同臨床分期乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平比較

2.3有無淋巴結轉移的乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平比較 有淋巴結轉移的乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平均高于無淋巴結轉移的患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 有無淋巴結轉移的乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平比較

2.4hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA單獨及聯合檢測診斷乳腺癌的效能 ROC曲線分析顯示，hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA聯合檢測診斷乳腺癌的靈敏度為89.52%，特異度為65.12%，曲線下面積(AUC)為0.874，高于各項指標單獨檢測(P<0.05)，見表4、圖1。

表4 hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA單獨及聯合檢測診斷乳腺癌的效能

圖1 hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA單獨及聯合檢測診斷乳腺癌的ROC曲線

3 討 論

隨著人們生活方式的日益轉變及生活壓力的不斷增加，乳腺癌的發病率呈現逐年攀升趨勢，嚴重威脅女性的身心健康[7-8]。目前，關于該病的具體病因及發病機制尚未徹底闡明，普遍認為可能和基因突變、遺傳等因素有關[9-10]。由于乳腺癌發病早期具有極強的隱匿性，絕大部分患者首次就診便已處于進展期，喪失了手術根治的最佳時機，放化療及免疫治療雖可有效殺滅腫瘤細胞，但患者亦有較高的轉移風險，患者治療后的復發率及病死率均較高[11-12]。目前，尋找一種可靠易行的乳腺癌診斷方法是臨床亟待解決的問題。隨著近年來相關研究的日益深入，越來越多的學者開始關注血清腫瘤標志物應用于乳腺癌診斷中的價值。相較于穿刺活檢等侵入性檢查，外周血標本檢測具有操作簡單、創傷小、患者依從性高及可重復操作等優勢，在乳腺癌早期診斷中具有一定的應用前景[13-14]。

本研究發現，乳腺癌組hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平均高于良性病變組及健康對照組(P<0.05)，且良性病變組上述指標表達水平均高于健康對照組(P<0.05)，這提示乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19均存在異常高表達。究其原因，hMAM屬于分泌差異性表達蛋白之一，其氨基酸序列和子宮珠蛋白超家族同源，具有乳腺組織特異性，在乳腺上皮細胞及乳腺癌組織中均存在異常表達[15-16]。SBEM是由90個氨基酸組成的一種唾液酸糖蛋白，其具有1條分泌肽鏈及3條8肽前后序列重復的疏水核心，也具有乳腺組織特異性，在乳腺癌組織中異常高表達[17-18]。國外研究指出，CEACAM19屬于癌胚抗原家族重要亞群之一，其介導了細胞黏附、增殖及腫瘤抑制等過程[19-20]。本研究ROC曲線分析發現，hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA聯合檢測診斷乳腺癌的AUC高于各項指標單獨檢測，提示hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA聯合檢測診斷乳腺癌的效能較高。分析原因，可能是聯合檢測上述3項指標表達水平可為醫生的診斷提供較為全面的依據，進一步提高診斷效能。另外，本研究發現，Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平均高于Ⅰ～Ⅱ期，提示上述3項指標可能與乳腺癌的發展有關。分析原因，可能是隨著臨床分期的進展，乳腺癌細胞分化、增殖加劇，繼而使得上述3項指標表達水平升高。本研究中，有淋巴結轉移的乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表達水平均高于無淋巴結轉移的患者，提示隨著上述3項指標表達水平的升高，患者淋巴結轉移風險增加，分析其原因：乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19異常表達，繼而影響NF-κB、PI3K/Akt及Wnt/β-catenin等腫瘤經典信號通路，最終促進腫瘤細胞的淋巴結轉移。然而，關于其具體作用機制有待進一步研究，這也是今后研究的重要方向。

綜上所述，hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA聯合檢測用于診斷乳腺癌具有較理想的效果，且上述3項指標表達水平的檢測有助于臨床醫生評估患者病情嚴重程度及淋巴結轉移情況。