天漿殼化學成分研究

伊星綺，王 旭，孫啟慧，劉 辰，田振華，容 蓉（山東中醫藥大學藥學院，山東 濟南 250355）

天漿殼來源于蘿藦科蘿藦屬植物蘿藦Metaplexis japonica（Thunb.）Makino 的干燥果殼，味甘、辛、性平，歸肺、腎經，具有清肺化痰、散瘀止血等功效［1-3］，臨床用于治療類百日咳綜合征［4］、流感［5］、扁平疣［6］等疾病。天漿殼提取物具有抗 癌［7］、抗 癌細胞耐藥性［8］、抗禽流感病毒［9］、抗氧 化［10-12］、調節免疫［13］、抗炎［14］等活性。天漿殼中已發現C21甾體、三萜、黃酮、生物堿、單萜及倍半萜、香豆素、木脂素、簡單苯丙素、簡單酚酸等多種化學成分，主要以C21甾體類化合物居多，其他類型的化學成分研究較少［8，15-17］。為了進一步開發和利用天漿殼，豐富天漿殼化學成分結構類型，本研究對天漿殼80% 乙醇提取物二氯甲烷萃取部位的化學成分進行研究，共分離得到15 個化合物。

1 材料

TBE-300C 高速逆流色譜儀（上海同田生物技術股份有限公司）；Agilent 6470 三重四極桿質譜儀、Agilent 1260 Infinity Ⅱ液相色譜儀（美國安捷倫公司）；Bruker Ascend 600 M AVANCE Ⅲ-600 型核磁共振儀（德國Bruker 公司）；FLEXA-HP 制備HPLC（天津艾杰爾有限公司）；制備色譜柱hplcone 8C18-100AA（20 mm×250 mm，8 μm）（蘇州麥可旺有限公司）；旋轉蒸發儀（日本EYELA公司）；Sephadex LH-20 凝膠色譜柱（美國GE 公司）；GF254柱層析硅膠、300～400 目柱層析硅膠（青島海洋化工廠）。無水乙醇、甲醇、石油醚、二氯甲烷、乙酸甲酯、正己烷、乙腈均為分析純（天津富宇精細化工有限公司）；純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）。

天漿殼購自濟南德仁醫藥有限公司（2019 年8～9 月采自安徽），經山東中醫藥大學藥學院王旭博士鑒定為蘿藦Metaplexis japonica（Thunb.）Makino 的干燥果殼，標本存放于山東中醫藥大學藥學院儀器分析實驗室。

2 提取與分離

取天漿殼藥材10 kg，80%乙醇浸泡提取，過濾，減壓干燥得到浸膏1.5 kg。浸膏加水混懸，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚部位（155.75 g）、二氯甲烷部位（26.26 g）、乙酸乙酯部位（22.45 g）、正丁醇部位（74.51 g）。

取二氯甲烷部位26.0 g，采用高速逆流色譜進行分離，正己烷-乙酸甲酯-乙腈-水（4∶4∶3∶4）洗脫［18］。以上相-中相（3∶7）作為固定相，FWD模式旋轉，轉速為800 r／min，以首尾的方向填充色譜柱，填充完成后以下相作為初始流動相平衡色譜柱，平衡后柱保留率為50%。先采用下相為流動相洗脫100 min，后切換中相為流動相洗脫60 min，總共160 min，得到Fr.1～Fr.11（圖1）。

圖1 高速逆流色譜圖Fig.1 Chromatograms of high-speed countercurrent chromatography

Fr.2 經Sephadex LH-20 凝膠柱，甲醇洗脫，得到Fr.2.1～Fr.2.20。Fr.2.9 經Sephadex LH-20凝膠柱，甲醇洗脫，得到Fr.2.9.1～Fr.2.9.14，Fr.2.9.9～Fr.2.9.12 經硅膠柱色譜，乙酸乙酯-甲醇（20∶1）洗脫，得到化合物1（2 mg）。Fr.2.9.13 和Fr.2.9.14 經硅膠柱色譜，采用乙酸乙酯洗脫，得到 Fr.2.9.13／14.1～Fr.2.9.13／14.29。Fr.2.9.13／14.5 經制備液相色譜用16%甲醇洗脫得到化合物2（1.08 mg，tR＝39.0 min）；Fr.2.9.13／14.18 經制備液相色譜，14% 甲醇洗脫得到化合物3（1.03 mg，tR＝38.4 min），以20%甲醇洗脫得到化合物4（1.12 mg，tR＝45.5 min）、5（2.11 mg，tR＝57.1 min）。Fr.3 經Sephadex LH-20 凝膠柱色譜分離，得到 Fr.3.1～Fr.3.35。Fr.3.20 經制備液相色譜，20%甲醇分離得到化合物6（3.05 mg，tR＝48.9 min）。Fr.3.9 和Fr.3.10再次經Sephadex LH-20 凝膠柱色譜分離得到Fr.3.9／10.1～Fr.3.9／10.11，Fr.3.9／10.5～Fr.3.9／10.10 經硅膠柱色譜，二氯甲烷-乙酸乙酯（1∶1）洗脫得到Fr.3.9／10.5-10.1～Fr.3.9／10.5-10.35。Fr.3.9／10.5-10.6 經制備液相色譜，34%甲醇洗脫得到化合物7（10.12 mg，tR＝42.0 min）。Fr.3.11經Sephadex LH-20 凝膠柱色譜分離，得到Fr.3.11.1～Fr.3.11.12。Fr.3.11.6 經制備液相色譜，21%甲醇洗脫得到化合物8（4.39 mg，tR＝36.0 min）。Fr.3.15～Fr.3.16 經制備液相色譜，22%甲醇洗脫得到化合物9（9.28 mg，tR＝37.5 min）、10（10.79 mg，tR＝48.0 min）。Fr.4 經Sephadex LH-20 凝膠柱色譜分離，得到Fr.4.1～Fr.4.35。Fr.4.14 經制備液相色譜，18%甲醇分離得到化合 物11（11.41 mg，tR＝57.7 min）。Fr.4.15～Fr.4.17 經制備液相色譜，25%甲醇洗脫得到化合物12（2.67 mg，tR＝42.5 min）。Fr.5 和Fr.6 合并后經Sephadex LH-20 凝膠柱色譜分離，得到Fr.5／6.1～Fr.5／6.35。Fr.5／6.13 經制備液相色譜，28% 甲醇洗脫得到化合物13（2.30 mg，tR＝38.8 min）。Fr.5／6.16 經制備液相色譜，32%甲醇洗脫得到化合物14（4.81 mg，tR＝47.5 min）、15（7.88 mg，tR＝53.8 min）。

3 結構鑒定

化合物1：白色針晶（甲醇），UVλmax＝306 nm，ESI-MSm／z：292.1 ［M ＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.80（2H，d，J＝8.8 Hz，H-3′），6.66（1H，d，J＝8.8 Hz，H-2′），3.82（3H，s，H-8′），3.74（1H，m，H-6），3.54（2H，dd，J＝9.6，6.8 Hz，H-7），3.78（1H，dd，J＝13.4，4.5 Hz，H-5），3.42（1H，dd，J＝13.2，1.38 Hz，H-5）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：159.5（C-2），159.7（C-3），40.8（C-5），57.9（C-6），43.4（C-7），153.8（C-1′），112.3（C-2′，6′），132.8（C-3′，5′），118.9（C-4′），169.2（C-7′），52.1（C-8′），35.0（C-9）。以上數據與文獻［19］報道基本一致，故鑒定為orychophragines A。

化合物2：無色粉末（甲醇），UVλmax＝232 nm，ESI-MSm／z：211.1 ［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.53（1H，dd，J＝8.4，2.2 Hz，H-6），7.48（1H，d，J＝2.1 Hz，H-2），6.72（1H，d，J＝8.4 Hz，H-5），5.09（1H，dd，J＝5.5，3.5 Hz，H-8），3.88（1H，dd，J＝11.7，3.6 Hz，H-9a），3.85（3H，s，H-10），3.69（1H，dd，J＝11.7，5.6 Hz，H-9b）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：198.6（C-7），151.0（C-4），148.6（C-3），126.2（C-1），124.1（C-6），117.2（C-5），111.9（C-2），75.2（C-8），66.7（C-9），56.1（C-10）。以上數據與文獻［20］報道基本一致，故鑒定為C-藜蘆酰乙二醇。

化合物3：無色粉末（甲醇），UVλmax＝232 nm，ESI-MSm／z：123.1 ［M ＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：9.02（1H，J＝2.3 Hz，H-2），8.69（1H，dd，J＝4.8，1.6 Hz，H-6），8.28（1H，dt，J＝8.0，1.9 Hz，H-4），7.54（1H，ddd，J＝8.0，5.0，1.0 Hz，H-5）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：132.8（C-3），152.9（C-2），138.3（C-4），126.3（C-5），148.1（C-6），168.4（C-7）。以上數據與文獻［21］報道基本一致，故鑒定為煙酰胺。

化合物4：白色粉末，UVλmax＝230 nm，ESIMSm／z：241.0 ［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.31（2H，s，H-2′，6′），5.12（1H，dd，J＝5.5，3.7 Hz，H-2），3.89（1H，dd，J＝11.7，3.7 Hz，H-3b），3.87（6H，s，3′，5′-OCH3），3.71（1H，dd，J＝11.7，5.5 Hz，H-3b）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：199.2（C-1），75.4（C-2），66.6（C-3），143.1（C-1′），108.1（C-2′），150.1（C-3′，5′），147.8（C-4′），56.8（3′，5′-OCH3）。以上數據與文獻［22］報道基本一致，故鑒定為2，3，4′-三羥基-3′，5′-二甲氧基苯丙酮。

化合物5：黃色粉末（甲醇），UVλmax＝232 nm，ESI-MSm／z：144.1 ［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：8.25（1H，ddd，J＝8.2，1.5，0.6 Hz，H-5），7.97（1H，d，J＝7.2 Hz，H-2），7.72（1H，ddd，J＝8.4，7.0，1.5 Hz，H-7），7.59（1H，dt，J＝8.4，0.9 Hz，H-8），7.43（1H，ddd，J＝8.1，6.9，1.1 Hz，H-6），6.34（1H，d，J＝7.3 Hz，H-3）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：141.5（C-2），109.8（C-3），180.9（C-4），126.2（C-4a），126.8（C-5），125.4（C-6），133.6（C-7），119.5（C-8），141.6（C-8a）。以上數據與文獻［23］報道基本一致，故鑒定為2，3-二氫-4（1H）-喹諾酮。

化合物6：褐色粉末（甲醇），UVλmax＝220 nm，ESI-MSm／z：161.0 ［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：8.01（1H，dd，J＝7.9，1.3 Hz，H-5），7.68～7.62（1H，m，H-6），7.23（1H，t，J＝7.5 Hz，H-7），7.18（1H，s，H-8）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：152.6（C-2），165.3（C-4），115.9（C-4a），128.5（C-5），136.5（C-6），124.2（C-7），116.6（C-8），142.3（C-8a）。以上數據與文獻［24］報道基本一致，故鑒定為2，4-喹唑啉二酮。

化合物7：無色油狀（甲醇），UVλmax＝242 nm，ESI-MSm／z：223.1 ［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：5.87（1H，t，J＝1.3 Hz，H-4），5.81（1H，d，J＝15.6 Hz，H-8），5.77（1H，d，J＝15.7 Hz，H-7），4.31（1H，qd，J＝6.4，4.7 Hz，H-9），2.48（1H，d，J＝17.0 Hz，H-2β），2.16（1H，d，J＝16.9 Hz，H-2α），1.91（3H，d，J＝1.4 Hz，H-13），1.24（3H，d，J＝6.5 Hz，H-10），1.04（3H，s，H-11），1.01（3H，s，H-12）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：42.5（C-1），50.8（C-2），201.3（C-3），127.2（C-4），167.5（C-5），80.0（C-6），130.0（C-7），137.0（C-8），68.7（C-9），23.9（C-10），23.5（C-11），24.5（C-12），19.6（C-13）。以上數據與文獻［25］報道基本一致，故鑒定為吐葉醇。

化合物8：無色晶體（甲醇），UVλmax＝250 nm，ESI-MSm／z：237.1 ［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.82（1H，s，H-1′），3.79（1H，dd，J＝7.4，1.2 Hz，H-7），3.61（1H，d，J＝7.3 Hz，H-7），2.36（3H，s，H-3″），1.90（1H，d，J＝12.4 Hz，H-2），1.88（1H，d，J＝13.0 Hz，H-4），1.63（1H，dd，J＝13.0，3.5 Hz，H-4），1.58（1H，ddd，J＝12.5，3.5，1.2 Hz，H-2），1.16（3H，s，H-5′），0.97（3H，s，H-1″）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：54.8（C-1），53.8（C-2），72.8（C-3），53.1（C-4），86.4（C-5），79.0（C-7），84.3（C-8），143.4（C-1′），146.0（C-2′），201.2（C-3′），26.7（C-3″），22.6（C-5′），19.1（C-1″）。以上數據與文獻［26］報道基本一致，故鑒定為cucubalus baccifer L。

化合物9：褐色針晶（甲醇），UVλmax＝215 nm，ESI-MSm／z：225.1 ［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.31（2H，s，H-2，6），3.95（2H，t，J＝6.1 Hz，H-9），3.90（6H，s，-OCH3），3.18（2H，t，J＝6.2 Hz，H-8）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：142.6（C-1），107.3（C-2，6），149.0（C-3，5），129.3（C-4），199.7（C-7），58.9（C-8），41.7（C-9），56.9（-OCH3）。以上數據與文獻［27］報道基本一致，故鑒定為3-羥基-1-（4-羥基-3，5-二甲氧基苯基）丙-1-酮。

化合物10：褐色油狀（甲醇），UVλmax＝230，ESI-MSm／z：195.1 ［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.57（1H，dd，J＝8.2，2.0 Hz，H-6′），7.54（1H，d，J＝1.9 Hz，H-2′），6.86（1H，d，J＝8.3 Hz，H-5′），3.94（2H，t，J＝6.2 Hz，H-3），3.90（3H，s，3-OCH3），3.16（2H，t，J＝6.2 Hz，H-2）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：198.3（C-1），40.2（C-2），57.5（C-3），129.2（C-1′），110.4（C-2′），152.0（C-3′），147.7（C-4′），114.4（C-5′），123.3（C-6′），55.0（3-OCH3）。以上數據與文獻［28］報道基本一致，故鑒定為3，4′-二羥基-3′-甲氧基苯丙酮。

化合物11：褐色針晶（甲醇），UVλmax＝223 nm，ESI-MSm／z：137.1 ［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.02（1H，d，J＝8.4 Hz，H-3，5），6.70（1H，d，J＝8.5 Hz，H-2，6），3.68（1H，t，J＝7.2 Hz，H-8），2.71（1H，t，J＝7.2 Hz，H-7）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：131.0（C-1），130.9（C-2，6），116.1（C-3，5），156.8（C-4），39.4（C-7），64.6（C-8）。以上數據與文獻［29］報道基本一致，故鑒定為對羥基苯乙醇。

化合物12：無色油狀（甲醇），UVλmax＝210 nm，ESI-MSm／z：317.1 ［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.61（1H，dd，J＝8.3，2.0 Hz，H-6），7.56（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2），6.89（1H，d，J＝1.9 Hz，H-2′），6.79（1H，d，J＝8.3 Hz，H-5），6.75（1H，dd，J＝8.2，2.0 Hz，H-6′），6.72（1H，d，J＝8.1 Hz，H-5′），4.74（1H，dd，J＝8.8，5.2 Hz，H-8），4.24（1H，dd，J＝10.7，8.8 Hz，H-9a），3.86（3H，s，H-3），3.82（3H，s，H-3′），3.70（1H，dd，J＝10.7，5.2 Hz，H-9b）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：130.5（C-1），112.6（C-2），149.4（C-3），153.2（C-4），115.7（C-5），125.2（C-6），199.7（C-7），56.3（C-8），65.6（C-9），129.9（C-1′），112.8（C-2′），149.0（C-3′），147.0（C-4′），116.6（C-5′），122.2（C-6′），56.4（3-OCH3），56.4（3′-OCH3）。以上數據與文獻［30］報道基本一致，故鑒定為楝葉吳萸素B。

化合物13：無色針晶（甲醇），UVλmax＝210 nm，ESI-MSm／z：279.1 ［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：6.57（2H，s，H-2′，6′），4.59（1H，d，J＝7.0 Hz，H-6），4.51（1H，dd，J＝9.8，6.7 Hz，H-8a），4.39（1H，t，J＝9.0 Hz，H-4b），4.34（1H，dd，J＝9.8，2.1 Hz，H-8b），4.20（1H，dd，J＝9.4，3.9 Hz，H-4a），3.91（6H，s，3′，5′-OCH3），3.46（1H，td，J＝9.0，3.9 Hz，H-1），3.11（1H，m，H-5）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：48.7（C-1），178.2（C-2），70.2（C-4），46.1（C-5），86.4（C-6），69.9（C-8），130.0（C-1′），102.9（C-2′，6′），147.5（C-3′，5′），135.0（C-4′），56.6（3′，5′-OCH3）。以上數據與文獻［31］報道基本一致，故鑒定為浙貝素。

化合物14：微黃色粉末（甲醇），UVλmax＝210 nm，ESI-MSm／z：193.1 ［M ＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.81（1H，d，J＝9.4 Hz，H-4），6.97（1H，s，H-5），6.95（1H，s，H-8），6.23（1H，d，J＝9.4 Hz，H-3），3.95（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：164.0（C-2），113.6（C-3），145.9（C-4），112.9（C-5），145.4（C-6），153.5（C-7），100.6（C-8），150.4（C-9），113.5（C-10），56.9（-OCH3）。以上數據與文獻［32］報道基本一致，故鑒定為異莨菪亭。

化合物15：微黃色針晶（甲醇），UVλmax＝210 nm，ESI-MSm／z：193.1 ［M ＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：10.36（1H，s），7.97（1H，dd，J＝9.4，2.1 Hz，H-4），7.28（1H，s，H-5），6.84（1H，s，H-8），6.28（1H，dd，J＝9.4，1.2 Hz，H-3），3.88（3H，s，6-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：160.5（C-2），109.4（C-3），144.3（C-4），110.4（C-5），145.1（C-6），151.0（C-7），102.6（C-8），149.3（C-9），111.5（C-10），55.8（6-OCH3）。以上數據與文獻［33］報道基本一致，故鑒定為東莨菪亭。

4 結論

本研究從天漿殼的二氯甲烷部位中分離得到15 個化合物，其中包括4 個生物堿類、7 個苯丙素類、1 個多酚類、2 個萜類。化合物1～6、8、10～15 等13 個化合物為首次從蘿藦屬分離得到。化合物1 無抗氧化作用，但對于HepG2、A549、HeLa、HCT-116 細胞具有較明顯的體外毒性［19］；化合物5～6 為廣泛應用的抗菌藥物的衍生物，但其抗菌活性未知；化合物11 具有抗菌、抗氧化作用［34］；化合物13 具有抗炎作用［35-36］；化合物14 具有抗氧化作用［37］；化合物15 具有抗炎、抗氧化作用［38-39］。本研究僅限于天漿殼二氯甲烷部位化學成分的分離，對于其藥理作用機制仍需要進一步的研究。