心脈安的UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS定性分析和UHPLC-QTRAP-MS/MS含量測(cè)定

張 薇，李楚源，王德勤，郭海彪，孫曉波，徐科一*，殷 瑋

心脈安的UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS定性分析和UHPLC-QTRAP-MS/MS含量測(cè)定

張 薇1, 2，李楚源1，王德勤1，郭海彪1，孫曉波2*，徐科一1*，殷 瑋3

1. 廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣東 廣州 510515 2. 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193 3. 廣州醫(yī)藥研究總院有限公司，廣東 廣州 510240

應(yīng)用UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技術(shù)分析心脈安中的化學(xué)成分，同時(shí)建立一種快速同時(shí)測(cè)定心脈安中15種成分含量的UHPLC-QTRAP-MS/MS方法。采用ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）為流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，采用加熱電噴霧離子源（HESI），正、負(fù)離子模式下采集數(shù)據(jù)，分析推定心脈安化學(xué)成分。并采用Waters ACQUITY UPLC CSH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），流動(dòng)相為0.1%甲酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脫，電噴霧離子源（ESI），采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）正負(fù)離子同時(shí)對(duì)心脈安中15個(gè)成分進(jìn)行定量分析。根據(jù)精確相對(duì)分子質(zhì)量數(shù)據(jù)和多級(jí)質(zhì)譜碎片離子，結(jié)合對(duì)照品比對(duì)或文獻(xiàn)報(bào)道，共從心脈安中分析推定109個(gè)主要化學(xué)成分，包括31個(gè)三萜類（主要是三萜皂苷類）、25個(gè)黃酮類、15個(gè)苯丙素類、13個(gè)甾體、9個(gè)單萜類、7個(gè)醌類、9個(gè)其他類化合物。在優(yōu)化的液相-質(zhì)譜條件下，人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd、丹參素、丹酚酸B、丹參酮I、隱丹參酮、丹參酮IIA、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、黃芪甲苷、芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、麥冬皂苷D、魯斯可皂苷元在測(cè)定濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（≥0.995 8），平均加樣回收率（＝6）為91.8%～106.5%，RSD為1.9%～4.5%，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均小于4.6%。該研究基本闡明了心脈安的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，建立的UHPLC-QTRAP-MS/MS含量測(cè)定方法，重復(fù)性和專屬性好，穩(wěn)定可控，可用于心脈安的質(zhì)量控制。

心脈安；UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS；UHPLC-QTRAP-MS/MS；三萜類；人參皂苷Re；人參皂苷Rg1；丹參酮I；黃芪甲苷；芍藥苷

心脈安片由人參、黃芪、丹參、赤芍、麥冬、冰片6味藥組成，具有益氣、養(yǎng)陰、活血定悸之功效，用于心悸氣陰兩虛兼心血瘀阻證（輕中度冠心病室性早搏）。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明心脈安片能使動(dòng)作電位時(shí)程與有效不應(yīng)期的比值A(chǔ)PD90/ERP＜l，從而發(fā)揮其抗心律失常作用[1]。心脈安片有明顯對(duì)抗烏頭堿、氯仿、氯化鋇及結(jié)扎冠脈等所致心律失常的作用[2]。多項(xiàng)臨床試驗(yàn)證明心脈安片明顯減少冠心病室性早搏患者室性早搏的次數(shù)，對(duì)氣陰兩虛兼心血瘀阻型冠心病所致室性早搏療效確切，具有較好安全性[3-5]。但其化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)研究薄弱，目前執(zhí)行的國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)YBZ12852004-2009Z僅對(duì)丹參酮ⅡA和丹酚酸B進(jìn)行含量測(cè)定，難以反映復(fù)方的整體特點(diǎn)，不利于心脈安片的全面質(zhì)量控制和進(jìn)一步深入研究。

UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS是一種快速、靈敏度高、分離能力高、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)采集技術(shù)，被廣泛應(yīng)用于中藥復(fù)雜化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)鑒定。劉坤等[6]采用UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技術(shù)鑒定樹舌靈芝的化學(xué)成分。UHPLC-QTRAP-MS/MS具有高選擇性、高通量和高靈敏度的特點(diǎn)，可分離復(fù)雜中藥化學(xué)成分，檢測(cè)通量多，耗時(shí)短。Xu等[7]采用UHPLC-QTRAP-MS/MS技術(shù)同時(shí)測(cè)定枸杞7種單糖的含量。

本研究基于UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技術(shù)，建立心脈安中主要化學(xué)成分的分析方法，結(jié)合精確相對(duì)分子質(zhì)量數(shù)據(jù)、碎片離子和對(duì)照品比對(duì)等手段進(jìn)行結(jié)構(gòu)推定。并采用UHPLC-QTRAP- MS/MS技術(shù)，選取覆蓋組方5個(gè)單味藥的特征性成分以及活性成分（人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd、丹參素、丹酚酸B、丹參酮I、隱丹參酮、丹參酮IIA、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、黃芪甲苷、芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、麥冬皂苷D、魯斯可皂苷元）為指標(biāo)成分，建立心脈安多指標(biāo)成分含量測(cè)定方法，為心脈安質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升奠定一定的基礎(chǔ)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Thermo Scientific? Q Exactive?組合型四極桿- Orbitrap質(zhì)譜儀，美國(guó)Thermo Scientific公司；超高效液相色譜三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用（UHPLC-QTRAP-MS/MS）系統(tǒng)，包括LC-30AD UHPLC超高效液相色譜儀（含二元梯度泵-自動(dòng)進(jìn)樣器-柱溫箱），日本島津公司；Sciex QTRAP 5500三重四極桿質(zhì)譜，美國(guó)Sciex公司；Milli-Q Reference超純水儀，美國(guó)Millipore公司；Secura 125-1CN型電子天平，德國(guó)Sartorius公司；SIGMA 3-18KS型冷凍離心機(jī)，美國(guó)Sigma公司；HYCD-205型醫(yī)用冷藏冷凍箱，海爾集團(tuán)公司。

1.2 試藥

色譜級(jí)乙腈及色譜級(jí)甲醇，美國(guó)Sigma-Aldrich公司；色譜級(jí)甲酸，上海阿拉丁生化科技有限公司；超純水來(lái)自超純水機(jī)自制。

對(duì)照品人參皂苷Rg1（批號(hào)110703-202034，質(zhì)量分?jǐn)?shù)94.0%）、人參皂苷Rb2（批號(hào)111715-201203，質(zhì)量分?jǐn)?shù)93.8%）、人參皂苷Rd（批號(hào)111818- 202104，質(zhì)量分?jǐn)?shù)97.3%）、丹酚酸B（批號(hào)111562- 201917，質(zhì)量分?jǐn)?shù)96.6%）、丹參酮I（批號(hào)110867-201607，質(zhì)量分?jǐn)?shù)96.5%）、隱丹參酮（批號(hào)110852-201807，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.0%）、丹參酮IIA（批號(hào)110766-202022，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.9%）、毛蕊異黃酮葡萄糖苷（批號(hào)111920-201907，質(zhì)量分?jǐn)?shù)96.8%）、黃芪甲苷（批號(hào)110781-2021118，質(zhì)量分?jǐn)?shù)96.8%）、芍藥苷（110736-202145，質(zhì)量分?jǐn)?shù)94.6%）、魯斯可皂苷元（批號(hào)111909-201906，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%）均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；人參皂苷Rc（批號(hào)8799，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%）、丹參素（批號(hào)7830，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%）、芍藥內(nèi)酯苷（批號(hào)8409，質(zhì)量分?jǐn)?shù)90.5%）、麥冬皂苷D（批號(hào)9815，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%）均購(gòu)于上海詩(shī)丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司；人參皂苷Re（批號(hào)RSF-R02001906001，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%）、人參皂苷Rb1（批號(hào)RSF-R01201907001，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%）均購(gòu)于成都瑞芬思生物科技有限公司。

3批心脈安干膏粉（批號(hào)21041401、21041402、21041403），均由廣州白云山和記黃埔中藥有限公司現(xiàn)代中藥研究院提供。

人參為五加科植物人參C. A. Mey.的干燥根和根莖；丹參為唇形科植物丹參Bge.的于燥根和根莖；黃芪為豆科植物蒙古黃芪(Fisch.) Ege. var.(Ege.) Hsiao的干燥根；赤芍為毛茛科植物芍藥Pall.的干燥根；麥冬為百合科植物麥冬(L. f) Ker-Gawl.的干燥塊根。人參（批號(hào)2011001）產(chǎn)地吉林，購(gòu)于北京同仁堂健康藥業(yè)有限公司；丹參（批號(hào)2012001）產(chǎn)地山東，購(gòu)于廣東天生藥業(yè)有限公司；黃芪（批號(hào)2010001）產(chǎn)地甘肅，購(gòu)于北京同仁堂健康藥業(yè)（福州）有限公司；麥冬（批號(hào)2011001）產(chǎn)地四川，購(gòu)于廣東匯群藥業(yè)有限公司；赤芍（批號(hào)2011001）產(chǎn)地內(nèi)蒙古，購(gòu)于廣東匯群藥業(yè)有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 心脈安的UHPLC-Q Exactive-Orbitrap-MS定性分析

2.1.1 UHPLC分析條件 色譜柱為ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；自動(dòng)進(jìn)樣器溫度：8.0 ℃，柱溫35 ℃，體積流量0.4 mL/min；流動(dòng)相為0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈溶液（B），洗脫梯度：0～0.5 min，5% B；0.5～11.0 min，5%～95% B；11.0～12.0 min，95% B；12.0～12.1 min，95%～5% B；12.1～15.0 min，5% B；進(jìn)樣量3 μL。

2.1.2 質(zhì)譜條件 Thermo Scientific? Q Exactive?組合型四極桿-Orbitrap質(zhì)譜儀；離子源：加熱電噴霧離子源（HESI）；掃描方式：數(shù)據(jù)依賴性掃描（DDA）模式進(jìn)行正、負(fù)離子全掃描；掃描范圍：/100～1200。源參數(shù)：噴霧電壓：3 000.00 V（＋），?3 000.00 V（?）；離子傳輸管溫度：325.00 ℃；鞘氣體積流量：45.00 units；輔助氣體積流量：11.00 units（＋），11.25 units（?）；加熱溫度：350.00 ℃；S-Lens 電壓：50.00 V。

2.1.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rc、人參皂苷Rd、丹參素、丹酚酸B、丹參酮I、隱丹參酮、丹參酮IIA、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、黃芪甲苷、芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、麥冬皂苷D、魯斯可皂苷元對(duì)照品適量于樣品瓶中，加入相應(yīng)體積的甲醇溶解，制備成1.00 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

2.1.4 供試品溶液的制備 精密稱取人參、丹參、黃芪、赤芍、麥冬藥材粉末，以及心脈安干膏粉各200 mg，置于10 mL離心管中，精密加入75%甲醇4 mL，超聲處理30 min，放冷，10 000 r/min下離心10 min，取上清液通過(guò)0.22 μm微孔濾膜，取濾液，即得供試品溶液。

2.1.5 UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS成分推定 本研究利用UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS對(duì)心脈安的化學(xué)成分進(jìn)行定性分析。通過(guò)高分辨質(zhì)譜及二級(jí)質(zhì)譜的碎片離子推測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)式，再結(jié)合文獻(xiàn)進(jìn)一步比對(duì)或與對(duì)照品比對(duì)，共推定出109個(gè)化合物，并對(duì)化合物的藥材來(lái)源進(jìn)行了歸屬。正離子下推定化合物22種，負(fù)離子下推定化合物87種，包括31個(gè)三萜類（主要是三萜皂苷類）、25個(gè)黃酮類、15個(gè)苯丙素類、13個(gè)甾體、9個(gè)單萜類、7個(gè)醌類和9個(gè)其他類化合物，三萜類和黃酮類化合物是心脈安中的主要成分。其中，17個(gè)成分可通過(guò)與對(duì)照品比較保留時(shí)間、一級(jí)質(zhì)譜和多級(jí)質(zhì)譜信息得到確證。其他化合物均利用質(zhì)譜裂解規(guī)律，同時(shí)參考文獻(xiàn)中質(zhì)譜碎片信息及裂解規(guī)律進(jìn)行推定。結(jié)果見(jiàn)圖1和表1。

C21（保留時(shí)間為7.71 min）的正離子圖譜顯示其加和分子離子峰為[M＋HCOO]?/845.493 7，確定分子式為C42H72O14，/637.430 5為脫去1分子葡萄糖形成，475.379 9為脫去2分子葡萄糖形成，根據(jù)調(diào)研文獻(xiàn)中人參皂苷類成分結(jié)構(gòu)推測(cè)，該化合物為人參皂苷Rf[8]。

C38（保留時(shí)間為5.74 min）的負(fù)離子圖譜顯示其分子離子峰為[M－H]?/493.114 7，確定分子式為C26H22O10，313.072 1 [M－C9H8O4]?，295.061 6 [M－C9H10O5]?，185.023 8 [M－C9H10O5－C6H6O2]?等主要的碎片離子。根據(jù)調(diào)研文獻(xiàn)中苯丙素類成分結(jié)構(gòu)推測(cè)，該化合物為丹酚酸A[12]。

C58（保留時(shí)間為6.09 min）的正離子圖譜顯示其分子離子峰為[M＋H]+/269.080 5，確定分子式為C16H12O4，/251.070 1為脫去1分子水形成，/223.074 9為脫去1分子水和甲氧基。根據(jù)文獻(xiàn)中黃酮類成分結(jié)構(gòu)推測(cè)，該化合物為芒柄花素[16-17]。

C74（保留時(shí)間為3.86 min）的負(fù)離子圖譜顯示其分子離子峰為[M－H]?/169.013 5，確定分子式為C7H6O5，/125.023 3為斷裂1分子[COO]，根據(jù)調(diào)研文獻(xiàn)中沒(méi)食子酸類成分結(jié)構(gòu)推測(cè)，該化合物為沒(méi)食子酸[20-22]。

C91（保留時(shí)間為7.19 min）的負(fù)離子圖譜顯示其加和分子離子峰為[M＋HCOO]?/387.108 9，確定分子式為C19H18O6，/341.109 2為[M－H]?母離子峰，/179.034 2為苯基相連的六元環(huán)斷裂羰基后形成的碎片，/135.044 1為苯并五元環(huán)碎片。根據(jù)調(diào)研文獻(xiàn)中麥冬黃烷酮類成分結(jié)構(gòu)推測(cè)，該化合物為甲基麥冬黃烷酮A[23,25-26]。

圖1 心脈安UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS的TIC圖

表1 心脈安正、負(fù)離子模式下的化合物推定及化合物歸屬

續(xù)表1

編號(hào)化合物電離方式分子式理論值(m/z)實(shí)測(cè)值(m/z)tR/min誤差(×10?6)二級(jí)碎片歸屬參考文獻(xiàn) C10malonyl-ginsenoside Rb1[M－H]?C57H94O261 193.595 41 193.601 36.994.9431 149.610 1, 1 107.596 8, 1 089.589 7, 945.546 9人參8 C11三七皂苷R2[M－H]?C41H70O13769.473 8769.476 37.083.249637.433 2, 475.379 8, 391.287 9人參8, 9 C12人參皂苷Rc/Rb2*[M＋HCOO]?C53H90O221 123.590 01 123.592 57.112.2251 077.588 5, 915.539 0, 783.492 9人參8, 10 C13malonyl-ginsenoside Rc/Rb2[M－H]?C56H92O251 163.584 91 163.590 27.164.5551 119.598 9, 1 077.599 0, 927.528 7, 783.490 7人參8 C14人參皂苷Rg2[M＋HCOO]?C42H72O13829.494 9829.497 17.202.652783.492 2, 637.435 9, 475.379 9,391.285 7人參8, 10- 11 C15人參皂苷Ro [M－H]?C48H76O19955.490 3955.493 77.273.558793.440 7, 469.385 4, 455.353 5人參8, 10- 11 C16人參皂苷Rh1/F1[M＋HCOO]?C36H62O9683.437 0683.439 67.303.804637.435 1, 554.238 8, 475.380 7人參8-10 C17人參皂苷Re/Rd*[M＋HCOO]?C48H82O18991.549 7991.550 87.511.109945.545 2, 783.491 4, 621.438 8, 459.385 0人參8 C18malonyl-ginsenoside Re[M－H]?C51H84O211 031.542 71 031.543 27.530.485987.556 0, 945.545 1, 927.534 2,621.444 0人參8 C19pseudoginsenoside Rs1[M－H]?C50H84O19987.552 8987.556 07.553.240945.545 5, 927.534 5, 783.490 2,621.436 5人參8 C20chikusetsusaponin IVa[M－H]?C42H66O14793.437 4793.439 87.623.025569.386 2, 455.354 0, 329.657 5人參8 C21人參皂苷Rf[M＋HCOO]?C42H72O14845.489 9845.493 77.714.494799.487 0, 637.430 5, 475.379 9. 391.288 0人參8 C22三七皂苷Fe[M＋HCOO]?C47H80O17961.537 2961.540 87.953.744915.535 1, 753.483 5, 621.437 9, 375.291 3人參8 C23人參皂苷F2[M＋HCOO]?C42H72O13829.494 9829.492 48.51?3.014783.488 4, 695.973 4, 621.440 9人參8, 10- 11 C24人參皂苷Rg3[M＋HCOO]?C42H72O13829.494 9829.497 38.942.893783.492 1,713.286 6, 621.439 8, 375.291 1人參8, 10- 11 C25人參皂苷Rs3[M＋HCOO]?C44H74O14871.505 5871.508 58.973.442825.502 7, 783.491 9, 765.481 6, 621.437 9人參8 C26人參皂苷F4[M－H]?C42H70O12765.478 9765.480 810.112.482603.425 5, 490.150 0, 383.149 5人參8, 10 C27香草醛[M－H]?C8H8O3151.039 5151.039 21.611.986133.028 6, 123.044 1, 95.048 9, 81.033 4丹參 C28咖啡酸[M－H]?C9H8O4179.034 4179.034 31.71?0.559151.039 1, 135.044 1, 117.033 3, 107.049 0丹參12 C29咖啡酰酒石酸[M－H]?C13H12O9311.040 3311.040 42.540.322179.034 3, 149.008 2, 135.044 1丹參13 C30原兒茶酸[M－H]?C7H6O4153.018 8153.018 44.25?2.614135.007 7, 118.552 1, 109.028 3, 92.000 1丹參12 C31阿魏酸[M－H]?C10H10O4193.050 1193.050 14.460.000178.026 4, 149.059 9, 134.036 3, 121.064 6, 丹參14 C32yunnaneic acid D[M－H]?C27H24O12539.119 0539.120 35.012.411493.231 9, 341.066 3, 297.076 7, 179.034 2丹參15

續(xù)表1

編號(hào)化合物電離方式分子式理論值(m/z)實(shí)測(cè)值(m/z)tR/min誤差(×10?6)二級(jí)碎片歸屬參考文獻(xiàn) C33紫草酸[M－H]?C27H22O12537.103 3537.104 85.152.793493.114 5, 295.061 4, 185.023 7, 109.028 3丹參12 C34丹酚酸D[M－H]?C20H18O10417.082 2417.081 25.18?2.398373.093 2, 197.045 0, 175.039 3, 135.043 9丹參12 C35異迷迭香酸苷[M－H]?C24H26O13521.129 5521.130 55.251.919359.077 0, 323.077 6, 179.034 2, 161.023 5 丹參15 C36丹酚酸B*[M－H]?C36H30O16717.145 6717.146 95.641.813537.104 6, 519.093 8, 493.116 0, 321.040 7丹參12 C37迷迭香酸[M－H]?C18H16O8359.076 7359.077 95.713.342197.045 0, 179.034 2, 161.023 6, 135.044 1丹參12 C38丹酚酸A[M－H]?C26H22O10493.113 5493.114 75.742.434313.072 1, 295.061 6, 185.023 8, 109.028 3丹參12 C39丹參素*[M－H]?C9H10O5197.045 0197.045 45.922.030179.034 2, 151.038 8, 135.044 1, 123.044 0丹參12 C40原兒茶醛[M－H]?C7H6O3137.023 9137.023 35.96?4.37993.033 3, 85.649 7, 66.475 9丹參12 C413′-O-甲基丹酚酸B[M－H]?C37H32O16731.161 2731.163 16.312.599551.118 5, 533.109 5, 353.067 3, 335.056 6丹參12 C42甲基丹酚酸I/H[M－H]?C28H24O12551.118 9551.120 16.332.177519.093 4, 507.129 7, 353.067 1, 321.040 8丹參15 C43丹酚酸F[M－H]?C17H14O6313.071 2313.072 26.363.194269.082 4, 225.091 0, 197.096 5丹參12 C44丹酚酸C[M－H]?C26H20O10491.097 8491.099 06.502.444311.056 7, 293.046 1, 135.044 1丹參12 C45新隱丹參酮[M＋H]+C19H22O4315.159 6315.158 69.93?3.173297.148 1, 279.137 7, 251.142 4, 197.095 8丹參12 C46丹參酮I*[M＋H]+C18H12O3277.086 5277.085 610.22?3.248259.075 2, 249.090 8, 221.096 4, 193.100 9丹參12 C47隱丹參酮*[M＋H]+C19H20O3297.149 1297.147 810.30?4.375279.137 0, 251.142 9, 209.095 9丹參12 C48二氫丹參酮I[M＋H]+C18H14O3279.102 1279.101 310.33?2.866261.090 6, 233.095 8, 205.101 1, 169.064 5丹參12 C49丹參酮ⅡB[M＋H]+C19H18O4311.128 3311.127 410.42?2.893293.117 5, 267.137 5, 252.114 0丹參12 C50丹參酮ⅡA*[M＋H]+C19H18O3295.133 4295.132 410.71?3.388277.121 6, 249.126 7, 225.127 2丹參12 C51丹參新酮[M＋H]+C19H22O2283.169 8283.169 012.02?2.825265.158 9, 240.114 1, 223.111 7, 195.116 5丹參12 C52毛蕊異黃酮葡萄糖苷[M＋H]+ C22H22O10447.129 1447.128 55.12?1.342285.075 5, 270.052 2, 253.048 8, 137.023 3黃芪16-17 C53calycosin-7-O-glc-6"-O-malonate[M＋H]+ C25H24O13533.129 5533.129 05.59?0.938285.075 4, 270.051 8, 253.049 1, 137.022 8黃芪16 C54pratensein 7-O-glucoside[M＋H]+C22H22O11463.124 0463.123 25.63?1.727421.668 3, 301.070 4, 286.046 7, 241.049 2黃芪16 C55calycosin-7-O-Glc-6"-O-acetate[M＋H]+ C24H24O11489.139 7489.139 25.95?1.022457.786 0, 285.075 5, 270.052 0, 253.048 7黃芪16 C56芒柄花苷[M＋H]+ C22H22O9431.134 2431.132 56.04?3.943325.002 0, 269.080 7, 254.056 9, 213.091 0黃芪16-17 C57pratensein-7-O-glucoside-6"-O-malonate[M＋H]+ C25H24O14549.124 4549.123 56.08?1.639463.120 7, 301.070 3, 286.047 0, 184.073 2黃芪16 C58芒柄花素[M＋H]+ C16H12O4269.081 4269.080 56.09?3.345251.070 1, 223.074 9, 205.064 0, 154.025 4黃芪16-17

續(xù)表1

編號(hào)化合物電離方式分子式理論值(m/z)實(shí)測(cè)(m/z)tR/min誤差(×10?6)二級(jí)碎片歸屬參考文獻(xiàn) C593-羥基-9,10-二甲氧基紫檀烷[M＋H]+ C17H16O5301.107 6301.106 86.32?2.657269.079 5, 241.086 2, 191.070 1, 167.070 2黃芪16 C607,2'-二羥基-3',4'-二甲氧基異黃烷[M＋H]+C17H18O5303.123 2303.122 46.43?2.639193.085 8, 167.070 1, 123.044 1, 105.070 5黃芪17 C61黃芪異黃烷苷[M＋H]+ C23H28O10465.176 1465.176 16.460.000303.122 7, 249.076 9, 167.070 2, 123.044 2黃芪18 C62formononetin-7-O-Glc-6"-O-malonate[M＋H]+C25H24O12517.134 6517.134 36.46?0.580499.340 4, 269.080 6, 254.057 4, 137.022 3黃芪16 C63毛蕊異黃酮[M＋H]+ C16H12O5285.076 3285.075 46.50?3.157270.052 0, 253.049 3, 225.054 1, 160.064 4黃芪16-17 C64黃芪甲苷IV*[M＋H]+C41H68O14785.468 7785.470 96.882.801717.501 5, 623.414 0, 455.351 6, 143.106 5黃芪13, 19 C65formononetin-7-O-Glc-6"-O-acetate[M＋H]+C24H24O10473.144 8473.143 56.96?2.748440.491 1, 269.080 4, 254.057 2, 170.584 1黃芪16 C66黃芪甲苷VI[M＋HCOO]?C47H78O19991.511 4991.514 67.153.227945.508 9, 858.651 9, 783.456 3, 630.674 6黃芪13, 19 C675,7,4'-三羥基-3'-甲氧基異黃酮[M－H]?C16H12O6299.055 6299.056 57.303.009284.033 0, 256.037 0, 227.034 9, 195.796 1黃芪17 C68乙酰黃芪皂苷I[M＋HCOO]?C47H74O17955.490 3955.493 37.903.140697.549 1, 497.115 0, 435.113 6, 321.083 4黃芪13, 18 C69黃芪甲苷II[M＋HCOO]?C43H70O15871.469 1871.471 78.322.983825.465 9, 765.446 9, 495.035 0, 412.217 7黃芪17-18 C70黃芪皂苷I[M＋HCOO]?C45H72O16913.479 7913.481 98.952.408867.467 3, 825.469 6, 179.054 9黃芪17-18 C71去苯甲酰基芍藥苷[M＋HCOO]?C16H24O10421.134 6421.135 31.081.662375.130 2, 345.119 4, 213.076 5, 195.065 7赤芍20 C72牡丹酮-1-O-β-D-葡萄糖苷[M＋HCOO]?C16H24O9405.139 7405.141 41.154.196359.135 3, 197.081 3, 179.070 6赤芍20 C73兒茶素[M－H]?C15H14O6289.071 2289.072 33.843.805245.082 3, 203.071 0, 149.023 5, 109.028 4赤芍20-22 C74沒(méi)食子酸[M－H]?C7H6O5169.013 7169.013 53.86?1.183125.023 3, 97.028 2, 69.033 3赤芍20-22 C75沒(méi)食子酰芍藥苷[M－H]?C30H32O15631.166 3631.167 74.782.218509.129 3, 313.057 1, 169.013 5, 121.028 4赤芍20-22 C76羥基芍藥苷[M－H]?C23H28O12495.150 3495.151 84.823.029449.147 6, 327.110 5, 165.054 8, 137.023 5赤芍20-22 C77芍藥苷*[M－H]?C23H28O11479.155 3479.156 04.821.461449.145 8, 327.109 1, 165.054 9, 121.028 4赤芍20-22 C78沒(méi)食子酸乙酯[M－H]?C9H10O5197.045 0197.045 15.020.507169.013 5, 125.023 4, 111.007 6赤芍20 C79四沒(méi)食子酰葡萄糖[M－H]?C34H28O22787.099 4787.102 15.043.430635.091 1, 617.079 4, 465.067 7, 169.013 5赤芍20 C80芍藥內(nèi)酯苷*[M＋HCOO]?C23H28O11525.160 8525.162 15.222.475479.155 9, 449.145 5, 327.108 8, 121.028 3赤芍20-22 C811,2,3,4,6-penta-O-galloyl-β- D-glucose[M－H]?C41H32O26939.110 4939.113 95.333.727769.090 6, 617.080 0, 447.058 2, 169.013 5赤芍23 C82苯甲酰羥基芍藥苷[M－H]?C30H32O13599.176 5599.178 56.063.338581.167 5, 431.135 1, 281.067 2, 137.023 5赤芍20-21 C83芍藥苷元[M－H]?C17H18O6317.102 5317.103 96.664.415273.114 3, 248.033 5, 168.005 6, 151.002 8赤芍 C84沒(méi)食子酸甲酯[M－H]?C8H8O5183.029 3183.029 36.730.000168.005 7, 140.010 7, 127.002 8, 112.984 4赤芍21

續(xù)表1

編號(hào)化合物電離方式分子式理論值(m/z)實(shí)測(cè)(m/z)tR/min誤差(×10?6)二級(jí)碎片歸屬參考文獻(xiàn) C85沒(méi)食子酸丁酯[M－H]?C11H14O5225.076 3225.076 96.752.666207.102 2, 181.122 7, 168.005 2赤芍 C86苯甲酰芍藥苷[M－H]?C30H32O12583.181 6583.180 06.90?2.744553.172 3, 431.135 5, 165.054 8, 121.028 4赤芍20-22 C87ophiofurospiside F[M＋HCOO]?C45H74O20979.475 0979.466 85.29?8.372933.472 5, 787.415 0, 607.349 4, 445.297 7麥冬23-24 C88ophiofurospiside L[M＋HCOO]?C50H82O231 095.522 31 095.524 55.362.0081 077.513 5, 861.351 9, 627.303 2, 467.213 7麥冬24 C89ophiofurospiside I[M－H]?C51H84O241 079.527 41 079.531 05.563.335917.477 0, 771.420 3, 591.356 2麥冬23-24 C90ophiofurospiside K[M－H]?C51H84O231 063.532 51 063.535 65.992.915901.483 4, 755.431 4, 593.371 0麥冬23-24 C91甲基麥冬黃烷酮A[M＋HCOO]?C19H18O6387.108 0387.108 97.192.325341.109 2, 320.475 3, 179.034 2, 135.044 1,麥冬23, 25- 26 C92麥冬皂苷R[M＋HCOO]?C39H62O15815.406 5815.409 27.583.311769.403 4, 623.344 0, 443.281 4麥冬25 C93麥冬黃烷酮F[M－H]?C20H22O7373.128 7373.129 67.952.412358.105 6, 254.042 7, 183.065 6, 168.041 9麥冬23 C9414-hydroxy sprengerinin C[M＋HCOO]?C44H70O17915.459 0915.462 08.003.277869.455 8, 737.413 3, 591.353 1麥冬23 C95魯斯可皂苷元*[M＋H]+ C27H42O4431.316 1431.314 98.36?2.782413.304 0, 395.293 3, 346.646 9, 269.189 4麥冬 C96甲基麥冬黃酮B[M＋HCOO]?C19H18O5371.113 1371.114 08.772.425356.090 6, 341.067 1, 297.076 0, 161.023 4麥冬23 C97麥冬黃烷酮A[M－H]?C18H16O6327.086 9327.087 88.792.752312.064 6, 236.032 8, 191.034 3, 123.043 8麥冬25-26 C98麥冬黃烷酮E[M－H]?C19H20O7359.113 1359.114 08.822.506344.090 5, 169.049 8, 154.026 1麥冬25-26 C99deacetyl ophiopojaponin A[M＋HCOO]?C46H72O18957.469 5957.470 69.051.149911.466 2, 869.455 6, 851.444 5, 737.413 8麥冬23 C100麥冬皂苷D*[M＋HCOO]?C44H70O16899.464 0899.466 89.213.113853.460 4, 835.443 5, 721.417 9, 575.358 6麥冬24 C101麥冬黃烷酮B[M－H]?C18H18O5313.107 6313.108 69.633.194224.033 0, 192.042 1, 164.046 7, 135.007 4麥冬 C102甲基麥冬黃酮A[M－H]?C19H16O6339.086 9339.087 89.842.654311.093 0, 217.049 9, 179.034 3麥冬23, 25 C103麥冬皂苷P/Q[M＋HCOO]?C46H72O17941.474 6941.477 79.953.293895.471 7, 853.460 8, 721.417 8麥冬24 C104麥冬皂苷B[M＋HCOO]?C39H62O12767.421 8767.422 910.021.433721.418 3, 575.363 3, 424.027 9麥冬24 C105麥冬皂苷C[M＋HCOO]?C44H70O18931.453 9931.448 410.02?5.905853.460 7, 721.423 0, 648.563 8麥冬24 C106甲基麥冬黃烷酮B[M－H]?C19H20O5327.124 2327.123 210.353.057238.047 8, 206.058 1, 178.062 9, 165.054 8麥冬23, 25- 26 C107麥冬黃烷酮D[M－H]?C20H18O7369.097 4369.098 310.462.438342.107 0, 219.029 5, 191.034 2, 164.010 1麥冬 C108麥冬皂苷A[M＋HCOO]?C41H64O13809.432 3809.434 010.812.100763.428 6, 721.418 3, 685.397 3, 575.354 3麥冬23 C109麥冬黃烷酮C[M－H]?C19H16O7355.081 8355.082 811.222.816327.088 3, 307.062 7, 193.013 6, 164.047 4麥冬

*經(jīng)過(guò)對(duì)照品驗(yàn)證的化學(xué)成分

*Chemical composition verified by reference

2.2 UHPLC-QTRAP-MS/MS含量測(cè)定

2.2.1 UHPLC分析條件 色譜柱為Waters ACQUITY UPLC CSH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；柱溫35 ℃，體積流量 0.3 mL/min；流動(dòng)相為0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈溶液（B），洗脫梯度：0～0.3 min，50% B；0.3～1.2 min，50%～95% B；1.2～3.0 min，95% B；3.0～3.1 min，95%～50% B；3.1～4.0 min，50% B；進(jìn)樣量3 μL。

2.2.2 質(zhì)譜條件 電噴霧離子源（ESI），數(shù)據(jù)采集模式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式正負(fù)離子同時(shí)檢測(cè)。噴霧電壓：5500 V（＋），?4500 V（?）；霧化溫度500.0 ℃；氣簾氣：137.9 kPa；噴霧氣：206.84 kPa；輔助加熱氣：206.84 kPa；去簇電壓：60.0 V；入場(chǎng)電壓：10.0 V；出場(chǎng)電壓：25.0 V。各定量成分的參數(shù)設(shè)定見(jiàn)表2。17種化合物的MRM色譜圖見(jiàn)圖2。

2.2.3 供試品溶液的制備 取心脈安干膏粉約50.0 mg，精密稱定，置于10 mL離心管中，加入75%甲醇5.0 mL，超聲處理30 min，放冷，10 000 r/min下離心10 min，取上清液通過(guò)0.22 μm微孔濾膜，取濾液，為使不同化合物稀釋后能夠在定量限之內(nèi)，用50%甲醇分別稀釋10、100、1000、10 000倍，即為供試品溶液。

表2 15種化合物的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式信息

2.2.4 對(duì)照品溶液的制備

（1）對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備：精密稱取人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd、丹參素、丹酚酸B、丹參酮I、隱丹參酮、丹參酮IIA、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、黃芪甲苷、芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、麥冬皂苷D、魯斯可皂苷元對(duì)照品適量于樣品瓶中，加入相應(yīng)體積的甲醇溶解，制備成1.00 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

（2）混合對(duì)照品溶液的制備：精密吸取15種對(duì)照品溶液，混合稀釋，配制成含人參皂苷Re（10.0 μg/mL）、人參皂苷Rg1（10.0 μg/mL）、人參皂苷Rb1（10.0 μg/mL）、人參皂苷Rb2（10.0 μg/mL）、人參皂苷Rc（10.0 μg/mL）、人參皂苷Rd（10.0 μg/mL）、丹參素（10.0 μg/mL）、丹酚酸B（10.0 μg/mL）、丹參酮I（1.00 μg/mL）、隱丹參酮（0.200 μg/mL）、丹參酮IIA（0.400 μg/mL）、毛蕊異黃酮葡萄糖苷（0.200 μg/mL）、黃芪甲苷（2.00 μg/mL）、芍藥苷（1.00 μg/mL）、芍藥內(nèi)酯苷（1.00 μg/mL）、麥冬皂苷D（0.400 μg/mL）、魯斯可皂苷元（0.080 μg/mL）的混合溶液，用50%甲醇依次稀釋得一系列混合對(duì)照品溶液。

2.2.5 方法學(xué)考察

（1）專屬性考察：分別取心脈安供試品溶液、混合對(duì)照品溶液以及空白溶液各3 μL，按“2.2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下條件進(jìn)行檢測(cè)，色譜圖見(jiàn)圖2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各化合物所選峰之間無(wú)干擾，方法專屬性良好。

1-人參皂苷Re 2-人參皂苷Rg1 3-人參皂苷Rb1 4-人參皂苷Rd 5-丹參素 6-丹酚酸B 7-丹參酮I 8-隱丹參酮 9-丹參酮IIA 10-毛蕊異黃酮葡萄糖苷 11-黃芪甲苷 12-芍藥苷 13-芍藥內(nèi)酯苷 14-麥冬皂苷D 15-魯斯可皂苷元

（2）線性范圍及定量限考察：精密量取“2.2.4”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液，用50%甲醇進(jìn)行逐級(jí)稀釋，得到混合對(duì)照品溶液濃度的1/20、1/25、1/50、1/100、1/200、1/500、1/1000、1/2000倍的系列混合對(duì)照品溶液，稀釋得系列混合對(duì)照品溶液，按“2.2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下的UHPLC-QTRAP-MS/MS條件檢測(cè)，以各對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），峰面積為縱坐標(biāo)（），對(duì)定量成分進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明15個(gè)定量成分在線性范圍內(nèi)線性良好（表3），符合分析測(cè)試要求。

（3）重復(fù)性考察：按“2.2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份心脈安供試品溶液，按“2.2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下的UHPLC-QTRAP-MS/MS條件檢測(cè)，隨行當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線。記錄峰面積響應(yīng)值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算15種被測(cè)成分的含量的RSD值為1.5%～4.4%。結(jié)果表明，各定量成分的重復(fù)性良好。

（4）精密度考察：取高、中、低質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，分別按“2.2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下分析測(cè)試條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積響應(yīng)值。計(jì)算15種被測(cè)成分峰面積的RSD值，考察日內(nèi)精密度。連續(xù)操作3 d，計(jì)算定量成分的峰面積及其RSD值，作為方法日間精密度。結(jié)果15種化合物的日內(nèi)、日間精密度RSD均小于4.6%。

表3 回歸方程、線性范圍考察結(jié)果

（5）加樣回收率考察：取25 mg已知含量的心脈安干膏粉（S1）6份，精密稱定，加入與樣品中各成分含量相近的混合對(duì)照品溶液，按“2.2.3”項(xiàng)下方法處理得到待測(cè)供試品溶液，供試品溶液按照“2.2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下定量測(cè)試條件進(jìn)樣分析，利用當(dāng)日隨行的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各定量成分的含量，15個(gè)定量成分的平均回收率分別為103.4%、106.5%、105.1%、94.8%、 95.3%、102.5%、103.1%、103.8%、97.6%、93.5%、94.9%、92.6%、91.8%、94.7%、94.4%，RSD值分別為3.5%、4.3%、3.2%、3.4%、3.7%、2.7%、2.5%、1.9%、3.6%、2.7%、4.5%、3.7%、3.8%、4.1%、2.8%。結(jié)果15個(gè)化合物的加樣回收率為91.8%～107.8%，RSD值小于4.5%，表明該方法準(zhǔn)確度滿足測(cè)試要求。

（6）穩(wěn)定性考察：按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在4 ℃放置0、4、8、24 h 后，按“2.2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下方法對(duì)15種成分進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積響應(yīng)值，計(jì)算RSD值為1.5%～4.6%。

2.2.6 樣品定量測(cè)定 取待測(cè)樣品，按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定并計(jì)算各待測(cè)組分的量，結(jié)果見(jiàn)表4。

3 討論

3.1 心脈安的UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS定性分析

本研究首次采用UHPLC-Q-Exactive- Orbitrap-MS技術(shù)對(duì)心脈安中化學(xué)成分進(jìn)行分析，同時(shí)采用正、負(fù)離子2種掃描模式，通過(guò)結(jié)構(gòu)信息互補(bǔ)，較為全面地推定心脈安的主要化學(xué)成分。其中，黃酮類在正、負(fù)離子掃描模式下有較好響應(yīng)；三萜皂苷、苯丙素類化合物在負(fù)離子掃描模式下有較好響應(yīng)；醌類化合物在正離子模式下有較強(qiáng)的響應(yīng)，在負(fù)離子模式下則響應(yīng)較弱。實(shí)現(xiàn)了心脈安中109個(gè)化合物的快速辨識(shí)，所推測(cè)和鑒定的化合物中涵蓋了31個(gè)三萜類、25個(gè)黃酮類、15個(gè)苯丙素類、13個(gè)甾體、9個(gè)單萜類、7個(gè)醌類、9個(gè)其他類化合物，為心脈安中化學(xué)成分的定性分析提供一種高效、快速的分析方法。為心脈安后續(xù)的入血實(shí)驗(yàn)研究和關(guān)鍵成分定量控制提供了理論基礎(chǔ)。

3.2 UHPLC-QTRAP-MS/MS含量測(cè)定

3.2.1 檢測(cè)方法的選擇 心脈安中皂苷類成分沒(méi)有紫外吸收，采用紫外或二極管陣列檢測(cè)器時(shí)只能在末端吸收波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)，由于多數(shù)成分含量較低，基線干擾大，因此選擇了質(zhì)譜檢測(cè)器，以MRM方式進(jìn)行測(cè)定，可以避免其他成分的干擾，專屬性強(qiáng)，可準(zhǔn)確用于心脈安樣品的測(cè)定，有效地提高心脈安片的質(zhì)量控制水平。

表4 心脈安中15種化學(xué)成分定量測(cè)定結(jié)果

Table 4 Content of 15 analytes in Xinmai'an

成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)/(mg·g?1)210414012104140221041403人參皂苷Re0.367 0±0.036 30.378 0±0.020 60.362 0±0.032 5 人參皂苷Rg10.727 0±0.063 90.734 0±0.072 80.704 0±0.056 3 人參皂苷Rb10.533 0±0.035 00.522 0±0.028 10.548 0±0.012 8 人參皂苷Rd0.232 0±0.020 20.225 0±0.016 90.234 0±0.038 7 丹參素9.610 0±0.844 09.890 0±0.711 09.430 0±0.754 0 丹酚酸B42.700 0±2.810 041.800 0±2.610 043.500 0±2.250 0 丹參酮I2.440 0±0.285 02.530 0±0.213 02.570 0±0.304 0 丹參酮IIA5.300 0±0.465 35.274 0±0.543 85.413 0±0.487 6 隱丹參酮3.920 0±0.453 04.130 0±0.429 04.050 0±0.334 0 毛蕊異黃酮葡萄糖苷0.387 0±0.025 50.383 0±0.020 60.398 0±0.023 8 黃芪甲苷0.071 3±0.003 90.072 7±0.002 70.069 5±0.003 5 芍藥苷6.010 0±0.493 06.120 0±0.732 05.880 0±0.645 0 芍藥內(nèi)酯苷0.147 0±0.011 20.149 0±0.009 40.142 0±0.009 9 麥冬皂苷D0.012 3±0.001 20.012 3±0.001 10.012 6±0.001 0 魯斯可皂苷元0.002 8±0.000 20.002 8±0.000 20.002 7±0.000 2

3.2.2 色譜條件的優(yōu)化 心脈安中15種成分完全色譜分離較難，分別試用了不同的流動(dòng)相組合（甲醇、乙腈和水）及添加不同的電解質(zhì)（甲酸及乙酸），結(jié)果表明僅有0.1%甲酸水溶液-乙腈作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，15種成分的色譜峰峰形好，響應(yīng)值穩(wěn)定，分析時(shí)間短，且無(wú)其他干擾。

3.2.3 指標(biāo)性成分的選擇 基于本研究采用UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技術(shù)對(duì)心脈安全方進(jìn)行檢識(shí)分析，共檢識(shí)得到109個(gè)化學(xué)成分；對(duì)文獻(xiàn)報(bào)道心脈安中主要成分研究進(jìn)展剖析發(fā)現(xiàn)，心脈安中含有大量具有心血管保護(hù)作用的成分，如人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、黃芪甲苷、丹參酮ⅡA、丹酚酸B、芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、麥冬皂苷D等[27-34]；《中國(guó)藥典》2020年版規(guī)定各單味藥質(zhì)控指標(biāo)性成分。綜上，選擇15個(gè)涵蓋5個(gè)組方藥味代表性結(jié)構(gòu)類型的成分作為指標(biāo)成分。

3.2.4 含量測(cè)定結(jié)果分析 本研究采用UHPLC-QTRAP-MS/MS技術(shù)建立心脈安多指標(biāo)成分含量測(cè)定研究方法，同時(shí)進(jìn)一步考察這些成分在3批次產(chǎn)品中的含量變化，樣品檢測(cè)結(jié)果顯示批次間產(chǎn)品含量差異較小，表明樣品質(zhì)量較好且相對(duì)穩(wěn)定，為建立現(xiàn)代化心脈安質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

3.3 小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技術(shù)對(duì)心脈安進(jìn)行了全面系統(tǒng)地解析，為進(jìn)一步開(kāi)展心脈安全面質(zhì)量控制研究、藥效及安全性評(píng)價(jià)提供了物質(zhì)基礎(chǔ)支撐。建立的UHPLC-QTRAP-MS/MS含量測(cè)定方法可在4 min內(nèi)同時(shí)測(cè)定心脈安中15種成分，該方法樣品處理簡(jiǎn)單、分析時(shí)間短、靈敏度高、專屬性好、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，對(duì)于心脈安的質(zhì)量控制及后續(xù)研究具有重要意義。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Identification of chemical constituents of Xinmai'an by UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS and determination of its content by UHPLC-QTRAP-MS/MS

ZHANG Wei1, 2, LI Chu-yuan1, WANG De-qin1, GUO Hai-biao1, SUN Xiao-bo2, XU Ke-yi1, YIN Wei3

1. Hutchison Whampoa Guangzhou Bai Yunshan Chinese Medicine Co., Ltd., Guangzhou 510515, China 2. Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100193, China 3. Guangzhou General Pharmaceutical Research Institute Co., Ltd., Guangzhou 510240, China

The UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS was developed for the identification of chemical constituents in Xinmai'an. and an UHPLC-QTRAP-MS/MS method was also established for rapid and simultaneous determination of the content of 15 components in Xinmai'an.ACQUITY UHPLC HSS T3 chromatography column (100 mm × 2.1 mm, 1.8 μm) was used with 0.1% formic acid (A)-acetonitrile (B) as the mobile phase in gradient elution．The data were collected by heated electrospray ion source (HESI) under positive and negative mode. Besides, Waters ACQUITY UPLC CSH C18chromatography column (100 mm × 2.1 mm, 1.7 μm) was used with 0.1% formic acid water (A)-acetonitrile (B) as mobile phase for gradient elution. Multiple reaction monitoring (MRM) in positive and negative ion mode.by using electrospray ion source (ESI) was performed for quantitative analysis of 15 compounds in Xinmai'an.Based on the accurate mass measurements, mass fragmentation patterns combined with comparison of reference or literature reports, a total of 109 major compounds including 31 triterpenoids (mainly triterpene saponins), 25 flavonoids, 15 phenylpropanoids, 13 steroids, 9 monoterpenes, 7 quinones, and 9 other compounds were tentatively identified and speculated. Besides, under the optimized MS/MS condition, the linearity ranges of ginsenoside Re, ginsenoside Rg1, ginsenoside Rb1, ginsenoside Rb2, ginsenoside Rc, ginsenoside Rd, danshensu, salvianolic acid B, tanshinone I, cryptotanshinone, tanshinone IIA, calycosin glucoside, astragaloside IV, paeoniflorin, albiflorin, ophiopogonin D, and ruscogenin were with good linearity≥ 0.995 8). The average recovery rate of 15 compounds in the samples were in the range of 91.8%—106.5%, and the RSD range was from 1.9% to 4.5%. The RSD values of precision, stability and repeatability test were all less than 4.6%.The results of this study clarified the chemical substance basis of Xinmai'an, and the method of UHPLC-QTRAP-MS/MS had good repeatability, high specificity, stability and controllability, which could be used for quality control of Xinmai'an.

Xinmai'an; UHPLC-Q Exactive-Orbitrap-MS; UHPLC-QTRAP-MS/MS; triterpenoids;ginsenoside Re; ginsenoside Rg1; tanshinone I; astragaloside IV; paeoniflorin

R284.1

A

0253 - 2670(2023)06 - 1743 - 14

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.06.006

2022-12-29

名優(yōu)中成藥產(chǎn)學(xué)研深度融合發(fā)展服務(wù)平臺(tái)（20212210006）

張 薇（1992—），女，博士研究生，研究方向?yàn)橹兴幩幮镔|(zhì)基礎(chǔ)及中藥質(zhì)量控制研究。E-mail: 751305770@qq.com

孫曉波（1958—），男，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)樾哪X血管及糖尿病藥理學(xué)。E-mail: sun-xiaobo@163.com

徐科一（1965—），男，本科，高級(jí)經(jīng)濟(jì)師，研究方向?yàn)橹兴幋蠼】怠-mail: 553555422@qq.com

[責(zé)任編輯 王文倩]