油菜種子純度的田間小區(qū)種植鑒定方法

洪 勇, 唐 谷

（1. 貴州省安順市種子管理站, 貴州 安順 561000；2. 貴州省安順市農(nóng)業(yè)科學(xué)院, 貴州 安順 562100）

貴州是我國(guó)長(zhǎng)江流域油菜優(yōu)勢(shì)主產(chǎn)區(qū)，也是全國(guó)油菜主產(chǎn)省之一。貴州省常年油菜種植面積約43 萬(wàn)hm2，種植面積居全國(guó)第5 位。種子質(zhì)量是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中至關(guān)重要的因素，油菜種子質(zhì)量是提高油菜產(chǎn)量、增加油菜種植收入的基本保證。隨著大量品種的審定、引進(jìn)和品種加速更替，雜交油菜品種呈現(xiàn)井噴之勢(shì)。品種純度是評(píng)價(jià)種子質(zhì)量的重要指標(biāo)，對(duì)產(chǎn)量及品質(zhì)均有直接而明顯的影響[1]，開(kāi)展品種純度鑒定是保證良種遺傳特性充分發(fā)揮、防止良種混雜退化、提高種子質(zhì)量和品質(zhì)的必要手段[2]。目前，我國(guó)鑒定種子純度常用的方法有小區(qū)種植鑒定法和鹽溶蛋白電泳法。鹽溶蛋白電泳法雖然檢測(cè)成本低廉，但區(qū)分能力較弱，難以區(qū)分異型株，對(duì)部分品種也無(wú)法鑒定自交苗。小區(qū)種植鑒定法可在花期同時(shí)觀測(cè)多個(gè)性狀，有較多的性能用于純度鑒定[3]，是經(jīng)典的表型鑒定方法。盡管田間小區(qū)種植鑒定法費(fèi)工費(fèi)時(shí)，但在一定時(shí)期內(nèi)仍然是商品種子純度鑒定唯一認(rèn)可的方法[4]。田間小區(qū)種植鑒定應(yīng)用廣泛，國(guó)內(nèi)已有多篇報(bào)道總結(jié)田間小區(qū)種植法開(kāi)展玉米[5]、水稻[6]、小麥[7]、大豆[8]、辣椒[9]等作物品種純度鑒定程序和關(guān)鍵技術(shù)，但油菜品種田間小區(qū)種植鑒定方法鮮見(jiàn)報(bào)道。安順市種子管理站多年來(lái)承擔(dān)貴州省油菜種子純度田間小區(qū)種植鑒定任務(wù)，通過(guò)試驗(yàn)實(shí)踐探索積累，已掌握關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)。為油菜品種純度田間小區(qū)種植鑒定規(guī)程的制定與應(yīng)用提供參考，總結(jié)油菜品種純度田間小區(qū)種植鑒定的鑒定程序及田間操作技術(shù)要點(diǎn)。

1 鑒定地塊選擇

鑒定地塊應(yīng)選擇具備油菜品種廣泛種植的生產(chǎn)條件和自然環(huán)境條件，不易發(fā)生自然災(zāi)害。選擇地勢(shì)平坦、土壤疏松、均勻、肥力中等偏下、交通便利、水源有保障、排灌方便良好的田塊。鑒定地塊前作最好是玉米或水稻，不能選擇前作為十字花科同科（種）作物的地塊。地塊形狀規(guī)則，未發(fā)生過(guò)嚴(yán)重病蟲(chóng)害。

2 種子樣品準(zhǔn)備

為加強(qiáng)種子質(zhì)量源頭監(jiān)管，全面掌控油菜種子質(zhì)量，使品種特征特性得到客觀、真實(shí)的反映，貴州省種子管理部門定期對(duì)市場(chǎng)銷售量大、推廣種植面積較大及群眾反饋疑似有問(wèn)題的品種進(jìn)行扦樣，嚴(yán)格按照規(guī)定的程序、數(shù)量進(jìn)行，做好鑒定油菜品種信息收集、登記工作，妥善保存樣品。所有樣品統(tǒng)一編號(hào)，并將樣品保存在陰涼、通風(fēng)的室內(nèi)，避免因環(huán)境變化影響種子質(zhì)量。在播種前，再次對(duì)參加種植鑒定的油菜種子樣品數(shù)量、品種名稱、樣品編號(hào)、種子質(zhì)量標(biāo)簽標(biāo)注值等進(jìn)行核查，確保油菜樣品準(zhǔn)確性。根據(jù)播種粒數(shù)隨機(jī)選取種子粒數(shù)，試驗(yàn)種子樣品不得進(jìn)行包衣、浸種、選種等處理[7]。

為確保田間小區(qū)種植試驗(yàn)的有效性，同時(shí)考慮節(jié)約占地成本，應(yīng)合理確定播種數(shù)量。測(cè)定品種純度百分率，田間設(shè)計(jì)應(yīng)滿足GB/T 3543.2—1995 鑒定品種純度的基本株數(shù)，計(jì)算公式為鑒定株數(shù)=4×100/（100-純度標(biāo)注值）；田間種植粒數(shù)≥鑒定株數(shù)/發(fā)芽率。GB 4407.2—2008中規(guī)定了油菜種子的質(zhì)量要求、檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)規(guī)則，大田用種中油菜雜交種的品種純度不低于85%，常規(guī)種的品種純度不低于95%，即種植株數(shù)達(dá)80 株即可。在實(shí)際工作中，為提高準(zhǔn)確度，保證種植總數(shù)量在300株以上。

3 小區(qū)設(shè)計(jì)

為保證油菜品種的特征特性得到充分表現(xiàn)，需有足夠的行株距保證植株正常生長(zhǎng)，密度過(guò)小，不利于植株性狀的表現(xiàn)和專家開(kāi)展現(xiàn)場(chǎng)鑒定；密度過(guò)大，則造成土地浪費(fèi)，增加成本。經(jīng)過(guò)多年試驗(yàn)實(shí)踐得出，每個(gè)樣品為1 個(gè)小區(qū)，每個(gè)小區(qū)種植4～6 行，種植密度90 000 株/hm2左右。小區(qū)之間走道80 cm，便于觀察鑒定和田間管理。鑒定地塊四周設(shè)置80 cm 的保護(hù)行，避免鑒定地塊受人畜危害。田間小區(qū)采用隨機(jī)區(qū)組排列設(shè)計(jì)，并繪制田間小區(qū)示意圖。設(shè)2次重復(fù)，有條件的可設(shè)置3 次重復(fù)，同一樣品的2 次重復(fù)不能在同一垂直線上。

4 田間種植技術(shù)

4.1 播種

按貴州省當(dāng)?shù)厣鷳B(tài)及栽培條件，當(dāng)?shù)赝痉N植鑒定一般安排在9月下旬至10月上旬播種。可采用直播或育苗移栽方式，直播方式需單粒播種；育苗移栽方式播種時(shí)，可采用穴盤育苗或漂浮盤育苗，育苗盤須消毒處理后再使用。為培育壯苗，應(yīng)做好育苗大棚溫度管理，溫度高時(shí)注意大棚防風(fēng)，防止燒苗，苗旺盛生長(zhǎng)期應(yīng)適當(dāng)降溫，防止徒長(zhǎng)，保持白天溫度20～30℃，夜間13～18℃，視墑情適當(dāng)補(bǔ)水，需在每個(gè)小區(qū)或每個(gè)營(yíng)養(yǎng)缽（穴盤）上標(biāo)注種植編號(hào)，經(jīng)核查無(wú)誤后將小區(qū)標(biāo)識(shí)牌插在行（區(qū)）頭，再次核查無(wú)誤后開(kāi)始單株移栽。移栽時(shí)隨機(jī)取單株種植，不得選苗。根據(jù)種植總數(shù)量要求，綜合考慮油菜發(fā)芽率、成苗率等因素，建議育苗總數(shù)量在種植總數(shù)量的基礎(chǔ)上增加40%～50%，若個(gè)別品種發(fā)芽率低，播種量應(yīng)當(dāng)適當(dāng)增加，避免移栽定植時(shí)缺苗。

4.2 田間管理

種植前精細(xì)整地，旋耕2 遍以上，深度達(dá)15 cm 以上，耕后平整土地。澆足底墑水，保持土壤相對(duì)含水量為70%～80%。合理施肥，小區(qū)種植鑒定只要求觀察品種的特征特性，不要求高產(chǎn)，土壤肥力不宜過(guò)高。整個(gè)生育期間盡量少施化肥，特別是氮肥，若需施用化肥，要求施肥均勻一致。

整個(gè)生長(zhǎng)周期不補(bǔ)種、不勻苗、不間苗、不去雜，不得使用除草劑和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。 種植后加強(qiáng)田間管理，及時(shí)中耕除草、培土、保持土壤疏松。及時(shí)澆水，保持土表濕潤(rùn)，同時(shí)注意排澇，下雨及時(shí)清溝，確保田間無(wú)明顯積水。可在蕾薹期和初花期噴施0.2%速樂(lè)硼50～60 kg/667m2，栽培管理要求一致，同一管理措施應(yīng)在同一天內(nèi)完成。

4.3 病蟲(chóng)害防治

加強(qiáng)田間調(diào)查，及時(shí)及早開(kāi)展病蟲(chóng)害防治，特別注意防治苗期菌核病、病毒病，生長(zhǎng)期霜霉病、白粉病等病害，蚜蟲(chóng)、菜青蟲(chóng)、菜粉蝶等蟲(chóng)害，以保護(hù)油菜正常生長(zhǎng)，充分表現(xiàn)其品種的特征特性[10]。在生長(zhǎng)中后期階段，清理病葉、老葉并帶出田塊集中處理，防止病菌的擴(kuò)散和蔓延。

5 鑒定

5.1 鑒定時(shí)期

花期和成熟期是品種特征特性表現(xiàn)最明顯的時(shí)期，也是鑒定的最佳時(shí)期，在花期或成熟期集中組織專家鑒定。

5.2 鑒定程序

5.2.1 初步篩查 鑒定專家根據(jù)《農(nóng)作物種子質(zhì)量監(jiān)督抽查管理辦法》《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 真實(shí)性和品種純度鑒定》（GB/T 3543.5—1996）等規(guī)定，按照科學(xué)、公正、公平的原則，對(duì)田間生長(zhǎng)情況進(jìn)行整體巡檢，確保符合鑒定要求后，分組開(kāi)展初步篩查。對(duì)所有樣品的種植小區(qū)，仔細(xì)觀察本品種植株和非本品種植株（包括自交株、非典型株）的主要特征，并對(duì)其進(jìn)行篩查鑒定，對(duì)初步確認(rèn)為非本品種的植株進(jìn)行標(biāo)記并計(jì)數(shù)。初步篩查鑒定結(jié)果填寫(xiě)在《品種純度田間種植鑒定原始記載表》中，對(duì)實(shí)測(cè)值＋容許誤差＜標(biāo)準(zhǔn)值的，列為初步篩查疑似不合格樣品。

5.2.2 復(fù)查不合格樣品 對(duì)照品種純度判斷規(guī)則，對(duì)初步篩查結(jié)果進(jìn)行判定，將預(yù)期可能不合格的種子樣品列為復(fù)查對(duì)象。所有鑒定專家組成復(fù)核組，對(duì)疑似不合格樣品進(jìn)行復(fù)查并計(jì)數(shù)。若復(fù)查結(jié)果與初篩結(jié)果無(wú)顯著差異，以復(fù)查結(jié)果作為最終鑒定結(jié)果，復(fù)查專家組負(fù)責(zé)對(duì)最終確定的非本品種植株予以明顯標(biāo)記。若復(fù)查結(jié)果與初篩結(jié)果差異顯著，報(bào)鑒定組織者進(jìn)行會(huì)商后確定檢查方案再進(jìn)行鑒定，最終結(jié)果以末次鑒定為準(zhǔn)。

5.2.3 鑒定結(jié)果的計(jì)算與判定 根據(jù)《農(nóng)作物種 子標(biāo) 簽通 則》（GB 20464—2006）和《農(nóng)作物種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（GB 4404.1—2008）的規(guī)定，按照種子標(biāo)簽標(biāo)注值和國(guó)家種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定值就高不就低的原則，對(duì)田間小區(qū)種植鑒定計(jì)算出的品種純度值逐一進(jìn)行判定，判定采用規(guī)定的容許誤差。鑒定嚴(yán)格按照GB/T 3543.5—1995 執(zhí)行，逐行逐株進(jìn)行鑒別，記錄調(diào)查品種總株數(shù)、變異株數(shù)。品種純度結(jié)果以百分率表示。計(jì)算公式：

品種純度=［（本品種總株數(shù)-變異株數(shù)）/本品種總株數(shù)］×100%

式中，T為容許誤差，p為表格中純度標(biāo)準(zhǔn)值，q=100-p，N為鑒定株數(shù)。

5.2.4 結(jié)果填報(bào)與匯總 將計(jì)算數(shù)值和判定結(jié)果填入品種純度田間小區(qū)種植鑒定記載表，并根據(jù)各檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)分工對(duì)鑒定結(jié)果進(jìn)行分類匯總。根據(jù)原始記載表填寫(xiě)純度鑒定結(jié)果匯總表和鑒定意見(jiàn)，結(jié)果匯總表及鑒定意見(jiàn)由所有鑒定專家簽字。對(duì)不合格樣品每個(gè)樣品單獨(dú)填寫(xiě)《品種純度田間種植鑒定原始記載表》，并由初次鑒定專家及記錄人在初次鑒定結(jié)果欄鑒定人處簽字。根據(jù)初步篩查和復(fù)核結(jié)果，填寫(xiě)《品種純度田間種植鑒定結(jié)果匯總表》，鑒定地點(diǎn)填寫(xiě)詳細(xì)至村，所有復(fù)核專家在復(fù)核結(jié)果欄鑒定人處簽字。參與鑒定的所有專家及工作人員在《品種純度田間種植鑒定簽到表》上簽到。

5.2.5 檔案資料管理 田間種植鑒定結(jié)果是農(nóng)業(yè)行政管理部門行使行政管理職責(zé)，進(jìn)行種子執(zhí)法的重要依據(jù)，需強(qiáng)化保密原則和可追溯原則。在田間鑒定期間和鑒定結(jié)果未正式公布前，不得事先轉(zhuǎn)換種植編號(hào)，不得查詢樣品所屬企業(yè)等相關(guān)信息，應(yīng)對(duì)相關(guān)事宜予以保密，所有人員禁止以任何形式向外透露鑒定結(jié)果的相關(guān)信息。建立生產(chǎn)檔案及田間現(xiàn)場(chǎng)鑒定檔案，生產(chǎn)檔案應(yīng)實(shí)事求是記錄品種的田間管理事項(xiàng)、農(nóng)事、氣象、病蟲(chóng)害發(fā)生等情況，田間現(xiàn)場(chǎng)鑒定檔案應(yīng)記錄好品種總株數(shù)、變異株數(shù)。做好數(shù)據(jù)整理匯總，形成鑒定意見(jiàn)，鑒定結(jié)束后，將品種純度田間種植鑒定簽到表、品種純度田間種植鑒定意見(jiàn)、品種純度田間種植鑒定結(jié)果匯總表、品種純度田間種植鑒定原始記載表等田間小區(qū)種植鑒定原始記錄和生產(chǎn)記錄保存好，保證田間鑒定結(jié)果、相關(guān)記載信息均能溯源到原始樣品，保證可追溯。

6 結(jié)果通知與異議處理

6.1 結(jié)果通知

根據(jù)種植編號(hào)信息轉(zhuǎn)換成樣品登記號(hào)，確認(rèn)純度不合格的種子樣品和企業(yè)信息，在現(xiàn)場(chǎng)將鑒定結(jié)果電話通知被抽查對(duì)象，被抽查對(duì)象不是該品種的種子生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)者的，同時(shí)通知種子生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)者。在鑒定結(jié)束后，將結(jié)果通知單書(shū)面材料按程序快遞給企業(yè)，并做好相應(yīng)的收發(fā)記錄。

6.2 異議處理

不合格樣品所屬企業(yè)提出異議，要求到現(xiàn)場(chǎng)查看結(jié)果的，檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)告知其要在3日內(nèi)到達(dá)鑒定現(xiàn)場(chǎng)，跟蹤處理并根據(jù)不合格樣品的鑒定意見(jiàn)做好釋疑工作。田間小區(qū)種植鑒定承擔(dān)單位負(fù)責(zé)有異議企業(yè)查看現(xiàn)場(chǎng)的接洽工作，并確保鑒定小區(qū)在鑒定異議期結(jié)束前保持完好，不被破壞。

7 小結(jié)

科學(xué)規(guī)范的種植方法與合理的管理技術(shù)是保障種子純度種植鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。油菜小區(qū)種植鑒定法在花期同時(shí)觀測(cè)多個(gè)性狀，可直觀地判定品種真?zhèn)巍?shí)施油菜種子純度田間小區(qū)種植鑒定試驗(yàn)必須把握好每個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，確保準(zhǔn)確到位，保障鑒定結(jié)果真實(shí)可靠。對(duì)鑒定不合格的樣品批次進(jìn)行封存，有效防止假冒偽劣油菜種子在市場(chǎng)上流通，防止低純度的油菜種子對(duì)油菜生產(chǎn)造成不良影響，保障秋冬季油菜用種安全，切實(shí)保障農(nóng)民切身利益，為油菜產(chǎn)業(yè)持續(xù)穩(wěn)定健康發(fā)展提供保障。