中藥丹參及其制劑心寧片丹參素質量控制研究

岳玲燕 龍 平 鄧竹君 涂雨佳 陳 可 何桂英

太極集團四川綿陽制藥有限公司，四川綿陽 621000

丹 參（salviae miltiorrhizaeradixet rhizoma） 來源于唇形科植物丹參Salvia miltiorrhizaBge.的干燥根和根莖[1]，其具有活血祛瘀，通經止痛，清心除煩，涼血消癰的功效[2]。長期以來主要靠人工栽培，山東為道地產區，其次四川中江、河北、安徽、山西、陜西亦有栽培[3]。《中華人民共和國藥典》2020年版丹參質量控制只有丹參酮類和丹酚酸B兩類成分[1]，丹參素作為丹參藥材的重要組成成分，在丹參類藥物制劑中應用廣泛[4]，比如臨床上用于冠心病、心絞痛等癥[5-8]的心寧片，其質量標準要求對丹參素含量進行控制，但該處方中君藥丹參并未對丹參素進行質量控制及檢驗方法介紹[9]，且該制劑檢測丹參素方法較復雜，所以通過本試驗研究出一種適合中藥丹參及心寧片中丹參素檢測方法，用于指導心寧片生產非常有必要，為心寧片工藝生產提供參考依據，有效控制心寧片中丹參素的質量，從而保障心寧片產品質量的均一性。

1 材料與方法

1.1 試藥試劑

對照品丹參素鈉（批號：110855-201915，含量以97.8%計）購于中國食品藥品檢定研究院；色譜級甲醇購自百靈威化學技術有限公司；分析級甲醇、乙醇、鹽酸、醋酸、氫氧化鈉均購自成都市科隆化學品有限公司；水為屈臣氏蒸餾水，購自廣州屈臣氏食品飲料有限公司。丹參藥材樣品采收于河北豐潤、亳州譙城、山東莒縣、山東臨朐，且均為栽培品，經綿陽市食品藥品檢驗所魏云主任中藥師鑒定為正品。心寧片樣品收集于生產企業A、B，規格均為0.4 mg/片（糖衣片）。

1.2 儀器

Agilent1260型高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司），MSA6.6S-CE型微量電子天平（sartorius）、ME204E型電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]，YR-500A型多功能粉碎機（永康市五瑞工貿有限公司）等。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性試驗

迪馬 C18為填充柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇-0.6%的醋酸溶液（5∶95）為流動相；檢測波長為280 nm；流速為1 ml/min；柱溫25℃。理論板數按丹參素鈉峰計算應不低于3000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取丹參素鈉對照品10.62、12.00 mg，分別置10 ml的量瓶中，加甲醇適量溶解，再加甲醇至刻度，搖勻，分別制成質量濃度為1.0386、1.1736 mg/ml的對照品溶液儲備液。

2.2.2 供試品溶液的制備 （1）取丹參粉（過二號篩）約2.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加水60 ml，稱定重量，加熱回流2.5 h，放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，用 0.45 μm 微孔濾膜濾過，取續濾液，作為丹參供試品溶液。（2）取心寧片20片，除去包衣研細，取約1.0 g，精密稱定，同上法操作，制成心寧片供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按2.2.2項下方法，制備陰性樣品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性試驗 取2.2.1項下對照品溶液儲備液（濃度 1.1736 mg/ml）1 ml，置 10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成對照品溶液，再分別取2.2.2、2.2.3項下供試品溶液、陰性樣品溶液，按2.1項下色譜條件測定，進樣量10 μl，測定結果陰性樣品溶液對測定成分無干擾，專屬性良好。見圖1～4。

圖1 對照品溶液色譜圖

圖2 陰性樣品溶液色譜圖

圖3 丹參供試品溶液色譜圖

圖4 心寧片供試品溶液色譜圖

2.3.2 線性關系考察 精密吸取2.2.1項下對照品溶液儲備液（濃度1.0386 mg/ml）1 ml，分別置5、10、20、25、50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成不同質量濃度對照品溶液，按2.1項下色譜條件依次進樣10 μl，記錄色譜圖峰面積，以峰面積為縱坐標，對照品溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線，結果顯示丹參素鈉的線性回歸方程Y=6.768 61×103X-32.770 21，線性范圍0.020 77～0.207 73 mg/ml，相關系數R2=0.999 95，丹參素鈉在濃度范圍內與其峰面積呈現良好的線性關系。見圖5。

圖5 峰面積與對照品溶液濃度的線性標準曲線

2.3.3 精密度試驗 精密吸取丹參素鈉對照品溶液（濃度 0.1039 mg/ml）10 μl，按 2.1 項下色譜條件連續進樣6次，記錄峰面積，相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）=0.50%，n=6，表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復性試驗 取同一丹參樣品、心寧片樣品，按2.2.2項下方法分別平行制備6份供試品溶液，按2.1項下色譜條件依次檢測，計算含量，丹參和心寧片中丹參素平均含量分別為 6.48、3.25 mg/g，RSD分別為0.78%、0.86%，表明該方法重復性良好。

2.3.5 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12 h進行測定，記錄峰面積并計算 RSD，結果丹參素鈉峰面積RSD為1.60%，表明供試品溶液在制備后12 h內穩定。

2.3.6 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的丹參藥材供試品、心寧片供試品各9份，分別精密加入一定量丹參素鈉對照品，按2.2.2中供試品溶液方法進行制備，分別進樣，測定峰面積，計算回收率，丹參素鈉的平均回收率分別為95.2%、93.4%，RSD分別為1.30%、1.93%，結果見表1～2。

表1 中藥材丹參加樣回收率試驗結果

表2 心寧片加樣回收率試驗結果

2.3.7 樣品測定 取9批丹參樣品、6批心寧片樣品，分別按2.2.2供試品溶液方法制備，進行丹參素含量測定并計算，結果見表3～4。

表3 不同批次丹參及對應心寧片中丹參素的含量

表4 不同批次心寧片兩種方法測定丹參素含量結果比較（mg/g）

投料前對9批丹參藥材進行丹參素含量測定，含量范圍為4.44～7.61 mg/g，對應18批成品丹參素含量范圍為1.97～3.07 mg/g，平均轉移率為44.3%。通過以上數據結合心寧片質量標準計算，建議丹參含丹參素不得少于0.375%，更能保證心寧片丹參素含量符合質量標準要求。

對6批心寧片進行丹參素含量測定，本法含量范圍為2.56～3.80 mg/g，藥典方法含量范圍為2.00～2.88 mg/g，可知本方法優于藥典方法，可用于心寧片丹參素含量檢測，有效控制其質量。

3 討論

3.1 丹參素提取方式

試驗分別采用了加堿回流提取、加水回流提取、水提醇沉提取和加水超聲提取四種方法，結果表明加水回流提取所得丹參素含量最高，效果最佳。結合心寧片生產中丹參藥材提取方式，加水回流提取更符合心寧片生產工藝要求。

查閱丹參中丹參素測定的文獻[10-13]，多數文獻只研究丹參藥材丹參素含量測定，并未結合實際生產，涉及丹參的中成藥質量標準，制法項多采用加水提取方式，較少采用超聲提取和水提醇沉提取方式，可能是因為大生產考慮生產成本及可操作性。

3.2 丹參素的提取時間

試驗摸索1、2、2.5和3 h加水回流提取時間，結果表明2.5 h加水回流提取所測定的丹參素含量最高，所以確定2.5 h為最佳提取時間。

3.3 丹參素測定色譜條件

試驗摸索了檢測波長為 278、279、280、281、282、283 nm的色譜條件，結果表明280 nm條件下供試品的吸收強度最大，故確定280 nm為最佳檢測波長。

根據文獻資料[9，14]對丹參素的檢測方法比較，流動相多為一定比例的甲醇與醋酸溶液。本實驗對流動相甲醇-冰醋酸-二甲基甲酰胺-水[15]（2∶1∶2∶95）和甲醇-0.6%的醋酸溶液（5∶95）進行對比考察，結果表明后者檢測出的色譜峰無雜質峰干擾，故選擇甲醇-0.6%的醋酸溶液（5∶95）為測定流動相。

試驗對35、30、25℃三個柱溫條件進行了考察，結果表明柱溫25℃時色譜峰峰型最好，故確定柱溫為25℃。

3.4 丹參素提取溶劑

文獻顯示[14]，在丹參藥材中，丹參素以丹參素鈉的形式存在，是丹參水溶性成分中的主要藥效成分之一，結合心寧片生產中丹參的提取工藝，確定本研究提取溶劑為水。

4 結論

綜上所述，本法測定結果準確，重復性好、靈敏度高，與其他研究文獻比較不足在于回流提取時間較長。通過同一檢測方法控制丹參及心寧片丹參素質量，從源頭把關追蹤溯源，確保心寧片丹參素含量達到《中華人民共和國藥典》標準要求。