不同環(huán)境溫度對膠體金免疫層析法測定血清低濃度HBsAg的效果評價

謝春艷 鄧 紅 李廣志

廣東省韶關市中醫(yī)院檢驗科，廣東韶關 512000

隨著經(jīng)濟的快速發(fā)展與乙型肝炎疫苗的不斷普及，當前乙型肝炎患者人數(shù)逐年降低，但乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染依然是社會比較敏感的問題。乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）是HBV感染的最主要的病原標志及直接證據(jù)之一，及時準確檢測HBsAg，對診斷是否感染HBV具有重要的臨床意義，為下一步臨床治療提供實驗室依據(jù)[1-2]。目前的檢測方法有膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫吸附試驗、激光化學發(fā)光免疫分析法、電化學發(fā)光免疫分析法[3-4]。電化學發(fā)光免疫分析法與酶聯(lián)免疫吸附試驗的診斷特異度已經(jīng)得到公認，但其操作步驟比較復雜，檢測時間比較長，不適合進行快速篩查檢測[5-6]。膠體金免疫層析法具有操作簡單、試劑廉價、不需要儀器設備等特點，并且其能單份操作，所用時間較短，簡單方便，能滿足急診檢測HBsAg的需要，但是靈敏度不夠，對低濃度HBsAg的標本存在漏檢的問題[7-8]。本研究使用羅氏COBASe601電化學發(fā)光分析儀篩選的150例HBsAg＜150 Cutoff-指數(shù)（COI）值的低濃度臨床標本，用艾博生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的GICA試劑盒分別于室溫25℃的室內(nèi)與37℃水浴箱中檢測HBsAg，按出現(xiàn)2條帶時判斷為陽性的標準，評價兩種環(huán)境溫度對該試劑盒檢測低濃度HBsAg的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年6月至2022年3月于廣東省韶關市中醫(yī)院（我院）診治的150例乙型肝炎患者作為研究對象。男78例，女72例；門診87例，住院63例；年齡最小22歲，最大78歲，平均（54.69±2.49）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。

納入標準：患者來自我院門診及住院部；符合乙型肝炎的診斷標準，HBsAg＜150 COI；采樣前未接受任何治療。排除標準：合并呼吸道傳染性疾病者；溶血標本；備孕期、妊娠期女性；甲型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎等疾病患者；臨床資料缺乏者。

1.2 檢測方法

羅氏COBASe601電化學發(fā)光分析儀及配套試劑由瑞士羅氏公司提供，膠體金法試劑由艾博生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)提供，廣東省臨檢中心提供的臨界值控制品HBsAg為9 COI。羅氏全自動儀器操作按照廠家說明書及科室的儀器標準操作程序文件規(guī)定進行。膠體金免疫層析法格按艾博生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)提供的說明書進行。

在檢測過程中，以羅氏電化學發(fā)光免疫法的檢測結(jié)果作為標準，篩選150例HBsAg定量＜150 COI的標本，再用艾博生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的膠體金免疫層析試劑盒檢測HBsAg。對照組放置于25.0℃室溫內(nèi)，觀察組放置于37.0℃水浴箱內(nèi)。兩組分別放置15、30 min后，采用膠體金免疫層析法的結(jié)果進行觀察，以30 min時為報告結(jié)果，并且于15 min內(nèi)讀取測定結(jié)果，超過30 min即可判定為無效的結(jié)果。

1.3 觀察指標及評價標準

按照試劑盒說明，電化學發(fā)光免疫分析：COI＞1可判斷為陽性；膠體金免疫層析法：出現(xiàn)2條帶時可判斷為陽性。

以電化學發(fā)光免疫分析法作為參考標準，分析觀察組、對照組檢測結(jié)果與電化學發(fā)光免疫分析法的符合率。

觀察與記錄觀察組、對照組的讀取時間與報告。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用統(tǒng)計學軟件SPSS 24.00進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標準差（）表示，行t檢驗，計數(shù)資料用 [n（%）]表示，行χ2檢驗，P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 讀取時間與報告時間比較

觀察組的膠體金免疫層析法讀取時間與報告時間都明顯短于對照組（P＜ 0.05）。見表1。

表1 兩組讀取時間與報告時間比較（min，）

表1 兩組讀取時間與報告時間比較（min，）

組別 n 讀取時間 報告時間觀察組 150 4.26±0.32 10.86±1.48對照組 150 7.48±0.33 15.01±1.11 t值 11.393 16.935 P值 0.000 0.000

2.2 電化學發(fā)光免疫法檢測濃度分布狀況

在 150例患者中，42例HBsAg≤ 1 COI，108例HBsAg處于1～150 COI；電化學發(fā)光免疫法檢測濃度分別為0～1 COI 42例，2～15 COI 30例，16～50 COI 39例，＞50 COI 39例。

2.3 陽性符合率比較

以電化學發(fā)光免疫法作為參考的標準，對照組判斷為陽性48例，觀察組判斷為陽性75例，對照組的陽性符合率為44.44%，觀察組的陽性符合率為69.44%，觀察組的符合率明顯高于對照組（P＜ 0.05）。見表2。

表2 兩組的陽性符合率比較

3 討論

HBV具有較強傳染性，可通過體液、性、血液等渠道傳播，嚴重威脅著人們的生命安全。特別是HBV會在機體內(nèi)長期潛伏，在適當條件下會被激活[9]。而且發(fā)病初期并無明顯的癥狀，如果不及時進行早期檢測與診治，可誘發(fā)肝硬化與衰竭的發(fā)展。乙型肝炎的診斷主要是對HBV進行血清學檢測，其指標包括乙型肝炎核心抗體、乙型肝炎e抗體、乙型肝炎表面抗體、乙型肝炎e抗原、HBsAg，其中HBsAg不存在具有傳染性的外殼蛋白，臨床常作為HBV檢測的重要標志物。膠體金免疫層析技術是20世紀80年代發(fā)展起來的，其基本原理與免疫滲濾技術相同，其主要是將特異度抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合墊上，當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細作用向前移動，溶解結(jié)合墊上的膠體金標記試劑后相互反應，再移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時，待檢物與金標試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異度結(jié)合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果[10]。本研究顯示觀察組的膠體金免疫層析法讀取時間與報告時間都明顯少于對照組（P＜ 0.05），表明實驗環(huán)境置于37℃水浴箱能縮短讀取時間與報告時間。

本研究結(jié)果顯示，在150例患者中，電化學發(fā)光免疫法檢測濃度分別為0～1 COI 42例，2～15 COI 30例，16～50 COI 39例，＞50 COI 39例。電化學發(fā)光免疫檢測方法是近年來發(fā)展起來的新興免疫標記技術，其使用的標記物穩(wěn)定，具有無放射性污染、結(jié)果準確、靈敏度高等優(yōu)勢，而且還具有更寬的線性范圍[11]。不過電化學發(fā)光免疫檢測方法的價格比較高，需要昂貴的儀器設備[12]。

本研究以電化學發(fā)光免疫法作為診斷的標準，對照組判斷為陽性48例，觀察組判斷為陽性75例，對照組的陽性符合率為44.44%，觀察組的陽性符合率為69.44%，觀察組的符合率明顯高于對照組（P＜ 0.05）。膠體金免疫層析法雖然操作簡單、方便，便由于其方法學的原因靈敏度低，對低濃度HBsAg檢測會產(chǎn)生假陰性，而且實驗環(huán)境對該檢測方法的靈敏度影響很大。有研究發(fā)現(xiàn)高溫、高濕提升乙型肝炎檢測靈敏度，低壓、低氧降低其靈敏度，乙型肝炎檢測的敏感度在兩種極端條件下均降低[13]。還有研究發(fā)現(xiàn)檢測環(huán)境的氣溫約為8℃時，71份HBsAg陽性標本，用金標法只檢出50份性標本，再把陰性的21份標本用金標試紙重做，并置入37.0℃溫箱，15 min后又檢出16份為陽性，還有5份標本為陰性[14]。膠體金主要是由氯金酸與還原劑等物質(zhì)發(fā)生反應而聚合成的顆粒，顆粒雖然會受到靜電影響，但是成為膠體狀態(tài)時有較強的穩(wěn)定性。同時通過37℃水浴箱進行處理可促使膠體金的負電荷與蛋白質(zhì)分子正電荷基團相結(jié)合，有利于提高診斷效果[15]。不過本研究由于經(jīng)費問題，樣本數(shù)量比較少，且以電化學發(fā)光免疫法作為診斷的標準還存在一定的誤差，將在后續(xù)研究中探討。

綜上所述，膠體金免疫層析法檢測HBsAg的實驗環(huán)境置于37℃水浴箱可以提高診斷的符合率，還可縮短讀取時間與報告時間，具有很好的臨床應用價值。